כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.
1. נושאים
- השתמש בחולדות ספראג-דולי זכר (250-300 גרם בהגעה).
- חולדות בית בכלובים עם תחתית מוצקה בחדר מושבה עם לחות של 40-60% וטמפרטורת חדר (RT) של 21 ± 1 מעלות צלזיוס.
- העמידו מים ומזון זמינים בליביטום.
- שמור על חולדות במחזור הפוך של 12:12 שעות חושך/אור (אורות דולקים בשעה 20).
2. ניתוח
- }לכל חולדה, הכינו שתי חתיכות של קשירה כרומית (5-0) באורך של כ-6 ס"מ והניחו אותן במי מלח סטריליים כדי למנוע התייבשות ונוקשות ושבירות.
- להרדים את בעל החיים עם פנטוברביטל (60 מ"ג/ק"ג, תוך-צפק) ולטפל באטרופין (0.1 מ"ג/ק"ג, i.p). עקוב אחר רמת ההרדמה על ידי הארכת רגל אחת וצביטת רשת העור בין אצבעות הרגליים בעזרת ציפורן כדי להבטיח הפעלת לחץ מתאים. ודא שהחיה לא מכופפת את הגפה שלה. במידת הצורך, יש לתת פנטוברביטל נוסף.
- לגלח את ראש החולדה כך שניתן יהיה לבצע חתך בקרקפת בקו האמצע של כ-25 מ"מ עם מרחקים שווים מלפנים ומאחור למרכז העיניים.
- קבע את ראש החולדה במסגרת סטריאוטקסית או קבע בדרך אחרת את ראש החולדה. הניחו את החולדה על כרית מחוממת כדי לשמור על טמפרטורת הגוף.
- יש למרוח משחה עיניים על שתי העיניים כדי למנוע נזק מהתייבשות.
- שפשפו את אזור הראש המגולח באלכוהול, ואז בטאדין.
- בצע חתך בקרקפת בקו האמצע, וחשוף את הגולגולת ועצם האף.
- השתמש במיקרוסקופ פעולה כדי לבצע את שלבים 2.9 עד 2.16.
- נתח את קצה המסלול החופשי, שנוצר על ידי עצמות הלסת העליונה, הקדמית, הדמעות והזיגומטיות, באמצעות ספוגית עם קצה כותנה וזוג מלקחיים של דומונט. השתמש במקלון כדי לספוג דם מדימום אפשרי.
- כדי לתת גישה לעצב האינפרא-אורביטלי (IoN), הסיטו בעדינות את תוכן המסלול בעזרת צמר גפן מדויק, והקפידו לא למתוח יתר על המידה את העצב האתמואידלי הקדמי שחוצה מעל ה-IoN. נתח את ה-IoN ללא רקמת החיבור שמסביב, באמצעות ספוגית מדויקת עם קצה כותנה וזוג מלקחיים של Dumont באמצעות תנועת התפשטות. השתמש במקלון כדי לספוג דם מדימום אפשרי.
- כדי לבצע קשירה, דחוף קצה אחד של חתיכה אחת של מעי כרומי כלפי מטה לאורך העצם הקדמית, מדיאלית ל-IoN והתקדם כמה מילימטרים מקבילים ונחותים מה-IoN. הקשירה מוחזקת כעת במקומה בין ה-IoN לעצם הקדמית.
- החלק את קצה מלקחיים של דומונט בזווית של 45 מעלות מתחת ל-IoN כדי למקם אותו בסמיכות לקשירה. משוך בעדינות את ה-IoN לרוחב כדי לחשוף את הקשירה וקצה המלקחיים. אחזו בקשירה עם המלקחיים ומשכו את המלקחיים לרוחב מתחת ל-IoN.
- משוך החוצה את הקשירה מחלל המסלול עד ששני קצוות הקשירה יהיו פחות או יותר במרחק שווה מה-IoN.
- צור "קשר החלקה" משני קצוות הקשירה כדי לאפשר שליטה מושלמת על מידת ההתכווצות והחלק את הקשר כנגד ה-IoN. החלק את הקשר עוד יותר כדי לכווץ את ה-IoN כך שקוטר העצב יופחת בכמות מורגשת בלבד. צור קשר רגיל על גבי קשר ההחלקה כך שכמות ההיצרות תישאר קבועה (כלומר., כדי למנוע החלקה של קשר החריץ).
- חותכים את הקשרים כדי להשאיר כ -2 מ"מ של קצוות חופשיים מהקשר.
- חזור על אותו הליך (שלבים 2.11 עד 2.15) כדי לבצע קשירה שנייה במרחק של 2 מ"מ מהראשונה.
- לניתוח דמה, בצע את שלבים 2.2 עד 2.10.
- סגור את חתך הקרקפת באמצעות תפרי פוליאסטר (4-0) ואפשר לחולדה להתאושש על כרית מחוממת. אין להשאיר את בעל החיים ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה חזה ואל תחזיר את בעל החיים לחברת בעלי חיים אחרים עד שהוא מתאושש לחלוטין.
- כדי למנוע השפעות משככות כאבים מונעות על התפתחות כאב נוירופתי, אין לתת משככי כאבים לכאבים לאחר הניתוח.