אינדוקציה והערכה של דיכאון בעכברים באמצעות חשיפה למתח כרוני

תקציר

מקור: Yan, Z., et al. הערכת ההשפעה האנטי-דיכאונית של Xiaoyaosan על עכברים הסובלים מלחץ כרוני. J. Vis. Exp. (2019).

הסרטון מדגים את תהליך הקמת מודל עכברי של דיכאון כרוני הנגרם על ידי מתח והערכת התנהגויות דיכאון. היישום הכרוני של גורמי לחץ שונים מעורר שחרור של קורטיקוסטרון, מה שמוביל לעירור יתר עצבי ובסופו של דבר למוות עצבי, מה שגורם לתסמינים דמויי דיכאון בעכברים.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הכנת עכברים להליך הניסוי

הערה: עבור הליך הניסוי, נבחרו עכברי C57BL/6J זכרים בריאים בני 12 שבועות, כאשר כל עכבר שוקל בין 18 ל-22 גרם.

1. להחזיק עכברים בנפרד בכלובים בחדר חיות מעבדה טיפוסי ללא פתוגנים ספציפיים (SPF) (22 ± 1 מעלות צלזיוס, מחזור חושך/אור של 12 שעות/12 שעות, לחות יחסית: 30-40%) למשך שבוע לפני הליך ה-CUMS.
2. חלקו באופן אקראי את כל העכברים לקבוצת ביקורת ולקבוצת מודל בהתאם למשקל גופם. בכל קבוצה יש 15 עכברים.
3. לפני תחילת הניסוי, ספרו את העכברים בכל קבוצה על הזנב שלהם באמצעות עט סימון.

2. השראת דיכאון בעכברים

} הערה: כדי לגרום לדיכאון, העכברים בקבוצת המודל ובשתי קבוצות הטיפול עברו מתח קל כרוני בלתי צפוי (CUMS) במשך 21 ימים. ניתן לשנות את התוכנית בהתאם למצב המעשי, אך יש להקפיד על העיקרון שלא ניתן להשתמש באותו גורם לחץ באופן רציף.

1. חשפו עכברים מדי יום לכל שניים משבעת גורמי הלחץ הבאים במשך 21 ימים רצופים. תוכנית המודלים שלנו מתוכננת באופן הבא:
   1. ביום שני, חשפו את העכברים למחסור במזון (רוקנו את המזון של כל כלוב למשך 24 שעות, 8:00 עד 8:00 בבוקר) ומחסור במים (הוציאו את בקבוק השתייה של כל כלוב למשך 24 שעות, 8:00 עד 8:00 בבוקר).
   2. ביום שלישי, חשפו עכברים ללחץ ריסון (ריסנו עכברים בגיגית פלסטיק קטנה למשך 3 שעות, 8:00 עד 11:00 בבוקר) וכלובים ריקים (הסירו את הריפוד בכל כלוב למשך 11 שעות, 8:00 עד 19:00 בערב).
   3. ביום רביעי, חשפו עכברים לכלובים רטובים ומלוכלכים (שפכו מים לכל כלוב והישארו רטובים במשך 24 שעות, 8:00 עד 8:00 בבוקר) וכלובים צפופים (שימו חמישה עכברים בכלוב אחד למשך 24 שעות, 8:00 עד 8:00 בבוקר).
   4. ביום חמישי, חשפו עכברים ללחץ איפוק ולשחייה קרה כקרח (הכריחו כל עכבר לשחות באקווריום זכוכית שקופה עם מי קרח למשך 5 דקות).
   5. ביום שישי, חשפו עכברים לכלובים רטובים ומלוכלכים ולמחסור במזון.
   6. בשבת, חשפו עכברים ללחץ ריסון וכלובים צפופים.
   7. ביום ראשון, חשפו עכברים לכלובים ריקים ולשחייה קרה כקרח.
2. רשום את מצב הפרווה ומשקל הגוף מדי שבוע עד סוף הדוגמנות (יום 21). חשב את הציון הכולל של מצב הפרווה כסכום הציונים משבעה חלקי גוף שונים: ראש, צוואר, פרווה גבית, פרווה גחונית, כפות קדמיות, זנב וכפות אחוריות. ציון אחד מציין פרווה מטופחת, וציון אפס מציין פרווה לא מטופחת.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
עכברי C57BL/6j	Beijing Vital River Company of the Charles River Company	SCXK 2011-0004	60 עכברי C57BL/6J זכרים בריאים בני 12 שבועות נרכשו מנהר בייג'ינג ויטל של חברת נהר צ'ארלס.
כלוב עכבר	עיצוב ביוטכנולוגיה	34853016	318×202×135 מ"מ
} מים מזוקקים	,	,	המים שימשו במהלך הניסוי.
ACS-2EAS Electronic Balance	Beijing Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd.		הוא שימש לשקילת ה-avoirdupois של עכברים בשלבים שונים.
תוכנת SPSS Statistics 21.0	IBM		תוכנת SPSS 21.0 שימשה לניתוח הנתונים, ANOVA חד-כיווני או מבחן לא פרמטרי שימש לנתונים כלליים המבוססים על מבחן נורמליות ומבחן הומוגניות לשונות, ושיטת LSD אומצה עבור השוואות בין קבוצות.
תוכנת Graphpad Prism 6.0	Graphpad Software,Inc.USA -		תוכנת Graphpad Prism 6.0 שימשה לציור גרפים סטטיסטיים.