יצירת פגיעה מוחית טראומטית קלה בראש סגור במודל עכברים

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הכנה לניסוי ואינדוקציה של פגיעה מוחית טראומטית קלה (TBI) במכרסמים

הערה: העברת מכרסמים לאזור ההחזקה 30 דקות עד שעה לפני תחילת ניסויי פגיעה מוחית טראומטית (TBI) כדי להתאקלם. בחר אזור אחיזה המושפע באופן מינימלי מרעש ההליך.

1. הכן את כל החומרים הנדרשים לניסוי ובדוק את ההתקנה להתקנה נכונה ( למשל , התאם פרמטרים בהתאם למטרת המחקר) (~5 - 10 דקות).
   הערה: ניתן להתאים את חומרת הפציעה על ידי בחירת עובי קרום הפוליאסטר. בהתבסס על המחקרים שלנו, עובי ממברנה של 25.4 עד 102 מיקרומטר מנוצל עבור TBI קלה עד בינונית בעכברים. בעבר השתמשנו בממברנות בעובי של 76.2 עד 127 מיקרומטר כדי לייצר TBI קלה עד בינונית בחולדות.
   1. חותכים בזהירות את קרום הפוליאסטר, מכניסים אותו בין החלקים המונעים והנהגים, ומאבטחים אותו על ידי הידוק ברגי החיבור.
   2. חבר את מיכל הדלק לצינור ההלם באמצעות אביזרי שחרור מהיר. ודא שהקרום מקובע היטב בין הנהג לחלקים המונעים.
   3. מקם שלושה חיישני לחץ ביציאה מצינור ההלם, במרחק של 120 מעלות זה מזה, כדי לנטר את מאפייני גל הפיצוץ במהלך השראת ה-TBI.
   4. ודא שהמרחק מקצה מכשיר צינור ההלם נכון עבור כל נבדק בהתאמה באמצעות המיקרומטר המותקן. שמור על מיקום ראש המכרסם ( כלומר , מיקום, מרחק) קבוע בתוך מחקרים כדי לאפשר הערכת פציעה עקבית.
      הערה: סוגים שונים של פציעה יכולים להיגרם על ידי בחירת הכיוון שבו גל הפיצוץ משפיע על הראש. כדי שההליך יגרום ל-TBI קלה עד בינונית המתוארת כאן, הגוף ממוקם בניצב לצינור ההלם שבו גל הפיצוץ משפיע על צד הראש. במצב זה, הראש מותר לניידות חופשית ולכן הוא חשוף לגל הפיצוץ ולכוחות סיבוב מהירים המאפשרים יצירת אפקטים של הפיכה וקונטרפיופ.
   5. התחל את ההקלטה מחיישני הלחץ באמצעות ממשק המשתמש הגרפי (GUI) של התוכנה.

2. הרדמה ומיקום מכרסמים בהגדרה

1. העברת מכרסמים מחדר ההחזקה והשראת הרדמה עם 4% איזופלורן בחמצן ושמירה על 2% איזופלורן בחמצן כדי להפחית מצוקה וכאב.
   הערה: ודא שהחיה אינה מגיבה לצביטה בבוהן או בזנב לפני שתמשיך. ודא שהשראת ההרדמה עקבית עבור כל חיות הניסוי, כולל בקרות דמה. הליך זה דורש הרדמה ברמה נמוכה וקצרה.
2. הנח את המכרסם המורדם לחלוטין במגן צינור הפוליוויניל כלוריד (PVC) עם ריפוד כדי להגן על איברים היקפיים מפני גל הפיצוץ.
   הערה: נושאי הבקרה מורדמים וממוקמים בסמיכות למערך, אך אינם נתונים ישירות לגל הפיצוץ. ודא שהפקדים נתונים לרעש שנוצר על ידי צינור ההלם.
3. הנח את ראש המכרסם בתוך אזור מיקום הראש ותמוך בו מלמטה, או על ידי תמיכה המובנית ישירות במנגנון המיגון או כרית גזה. קבע את יישור הראש בהתאם לאנטומיה של כל מכרסם, כאשר הקונדיל העורפי מיושר עם קצה המיגון המגן.
   הערה: הימנע מהפניית גל הלחץ ישירות לכיוון גזע המוח כדי להפחית את התמותה. פגיעה במרכז הנשימה של גזע המוח ובחוט השדרה הצווארי ידועה כתורמת להפרעות נשימה ואפילו למוות במודלים של מכרסמים של TBI.

3. חשיפת מכרסמים לגל פיצוץ

1. פתח במהירות את השסתום הראשי של מיכל הגז הדחוס כדי לייצר עליית לחץ שקורעת את הממברנה ומייצרת פיצוץ חזק המאשר יצירת גל לחץ. הממברנה תיקרע ויזואלית כאשר תוסר לאחר הניסוי.
   הערה: ניתן להשתמש במצלמה מהירה כדי ללכוד את השפעות ההפיכה והקונטרפיופ של תאוצת הסיבוב שחווה המכרסם לצורך ניתוח נוסף.
2. כבה את זרימת הגז מיד לאחר שמיעת הפיצוץ.