יצירת מודל חולדה של טרנספוזיציה של נוירומה טיביאלית

תקציר

מקור: Brakkee, E. M., et al. ניתוח ובדיקות התנהגותיות במודל טרנספוזיציה של נוירומה טיביאלית בחולדות. J. Vis. Exp. (2023).

סרטון זה מדגים הליך ליצירת מודל טרנספוזיציה של נוירומה טיביאלית של חולדה (TNT). לאחר חשיפת עצב השוקה ברגל האחורית של חולדה מורדמת, יש לחצות את העצב. לאחר מכן, צרו מנהרה תת עורית, השחילו את העצב הקטוע דרך המנהרה ותפרו אותו במקומו. בהיעדר יעד לעצבוב מחדש, צמיחה אקסונלית לא מאורגנת מהעצב הקטוע יוצרת נוירומה, המעוררת כאב נוירופתי על ידי גירוי נוציצפטורים.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הרדמה והכנה

הערה: מחקר זה נערך על 15 חולדות זכרים שהיו בני 12 שבועות.

1. להרדים את בעלי החיים על ידי אינדוקציה עם 5% איזופלורן ולשמור על הרדמה עם 2%-3% איזופלורן.
   הערה: תחזוקה עם איזופלורן 2% מביאה בדרך כלל להרדמה מספקת ונשימה ספונטנית, ללא צורך באינטובציה של קנה הנשימה או הנשמה מכנית.
2. בדוק את הרפלקסים של בעלי החיים על ידי צביטה של כף הרגל בפינצטה. ודא שהחיה אינה מגיבה לפני שתמשיך. יש לגלח את השדה הניתוחי מהברך ועד הקרסול בעזרת מכונת גילוח חשמלית ולמרוח משחת עיניים על העיניים למניעת יובש. יש להזריק 0.5 מ"ג/ק"ג של קרפרופן משכך כאבים תת עורי באזור הבטן.
3. הניחו את החולדה המורדמת על גבה כשראשה שמאלה או ימינה ואת הרגל לניתוח ליד המנתח. סובב את הגפה האחורית התחתונה כך שהמאלולוס המדיאלי פונה כלפי מעלה. הנח את החולדה מתחת למיקרוסקופ כירורגי סטריאו עם הגדלה פי 6.
4. יש לחטא את האזור המגולח בשלושה סבבים לסירוגין של קרצוף על בסיס יוד ואחריו אלכוהול. הניחו סדין סטרילי עם חור ניתוחי מעל הרגל, כך שרק שדה הניתוח נראה לעין. הקפד לשמור על תנאים סטריליים אלה במהלך הניתוח.

2. ניתוח

1. הנח צמר גפן קטן מתחת לקרסול על מנת לשמור על שדה הניתוח אופקי. אתר את הברך ובצע בעדינות חתך אורכי של 1-2 ס"מ באמצעות אזמל מעל הצד המדיאלי של הכפה האחורית מאמצע השוק ועד הקרסול. במידת הצורך, פתח את העור ואת תת העור עוד יותר עם מספריים מיקרו עד ששכבות השריר נראות לעין.
2. זהה את הצרור הנוירו-וסקולרי השטחי כשניים או שלושה לבנים וקו סגול/אדום עבה יותר, לפעמים עם ענפים קטנים, שיכולים לנוע בחופשיות על שכבות השריר. באמצעות צריבה חשמלית ( ראה טבלת חומרים), יש לקרוש כל דימום פעיל או נזילה בשדה הניתוח. היזהר לא לפגוע בצרור הנוירו-וסקולרי.
3. לנתח בצורה בוטה כדי לפתוח את הפאשיה בין שרירי הגסטרוקנמיוס, רק אחורי לצרור הנוירו-וסקולרי השטחי של 2.2. בין הפאשיה של השרירים ניתן למצוא את עצב השוקה. העצב הטיביאלי הוא בערך פי שלושה מגודלו של העצב השטחי בצרור הנוירו-וסקולרי. השתמש בעצם השוק כנקודת ציון נוספת (עצב השוק נמצא ממש מאחורי עצם השוקה).
4. זהה את עצב השוקה ואת התפצלותו.
   הערה: ההסתעפות נראית בדרך כלל עם קו בהיר יותר לאורך מעל העצב.
5. נתח בזהירות את עצב השוקה החופשי מצרורות כלי הדם שמסביב. בצע את הדיסקציה על ידי הזזה בוטה של עצב השוק וחיתוך הרקמה החשופה שמראה מתיחה מסוימת תוך כדי הזזת עצב השוקה.
   הערה: אם עצב השוקה מחובר לוורידים חוצים לאחר דיסקציה, ניתן להקריש את הוורידים הללו על מנת לחשוף את כל עצב השוקה. היזהר לא לקרוש את צרור השוקה עצמו.
6. חשוף את עצב השוק באופן קרוב עד שהוא נעלם מתחת לשכבת שריר חוצה. בשלב זה, נראה שעצב השוקה צולל עמוק יותר לתוך הכף האחורית לכיוון הברך. חשוף את עצב השוק דיסטלי עד הקרסול.
   הערה: כאשר עצב השוק נחשף בצורה דיסטלית יותר, כמות סיבי הקולגן החוצים (כלומר, סיבים בניצב לכיוון סיבי העצב) תגדל. יש לחתוך את סיבי הקולגן הללו כדי לאפשר אורך מספיק להעברת עצב השוקה.
   1. כאשר כל עצב השוק נחשף, הנח את שכבות השריר לאחור כדי למנוע התייבשות של העצב. אם העצב מתייבש (כלומר, הוא הופך נוקשה, עמום ומקומט יותר), וכיסוי בשכבות שריר אינו מספיק, הוסיפו טיפות מי מלח כדי להעניק לו לחות.
7. בעזרת כלי מיקרו-כירורגי קהה, רצוי מחזיק מחט זעיר, מנתחים את העור הקדם-טיביאלי משכבת השריר התת עורית על מנת ליצור תעלה תת עורית. לשם כך, החזק את העור למעלה ודחף את הקצה הקהה לתוך הרקמה, במקביל לעור. ודא שקצה המנהרה ממוקם בסמוך או לרוחב כדי להבטיח נגישות קלה של האזור לבדיקת הנוירומה.
8. הגדל את האיזופלורן ל -5%. חזור לעצב השוק וחשוף אותו (כלומר, חזור למקום המתואר בשלב 2.6). חותכים את עצב השוקה (כלומר, שני הענפים הפלנטרים) ברמה הדיסטלית ביותר ליד הקרסול. להפחית את האיזופלורן לרמה הנורמלית של 2%-3%.
9. שנה את הגדלת המיקרוסקופ ל-10x או 16x. זהה את האפינוריום של עצב השוקה הפרוקסימלי לחתך שנעשה בשלב 2.8, או במקרה של התפצלות פרוקסימלית יותר של עצב השוקה, זהה את האפינוריום של ענפי הצמח המדיאלי והרוחבי הפרוקסימלי לחתך בשלב 2.8.
   הערה: האפינוריום לבן ומוצק יותר בהשוואה לסיבי העצב שבתוכו, שהם צהובים ורכים יותר.
10. מניחים בזהירות 8-0 תפר ניילון ( ראה טבלת חומרים) דרך האפינוריום של קצה העצב הפרוקסימלי על ידי החזקה זהירה של האפינוריום בפינצטה והכנסת המחט בין העצב לאפינוריום בנשיכה של כ-0.5 מ"מ. משוך את התפר וקח ביס עם המחט תת עורית בקצה המנהרה התת עורית שנעשתה בשלב 2.7. צור קשר, שיעביר את העצב לרוחב למנהרה התת עורית.
    הערה: אם שני הענפים הפלנטרים חולקים אפינוריום משותף, תפר אחד אמור להספיק. אם לשני הענפים הפלנטרים יש אפינוריום משלהם, יש לקבע כל אפינוריום בנפרד. הימנע מהנחת התפר דרך העור; לתקן את זה רק תת עורית.
11. הניחו תפר עבה יותר בצבע כהה (רצוי תפר כחול או שחור 4-0) סומק לקצה העצב המקובע, ולא חודר לעור. ודא שהתפר נראה מבחוץ של העור. בדוק אם העצב נשאר במקומו לאחר הזזת הכפה והשרירים. חותכים את קצוות התפרים עם קצה תפר מעט ארוך יותר ב-4-0 מאשר ב-8-0 תפר.
12. שנה את ההגדלה של המיקרוסקופ בחזרה ל-6x. סגור את העור עם תפרים תוך-אפידרמיסיים באמצעות 8-0 לתפור ולנקות בעדינות את העור עם 0.9% NaCl באמצעות צמר גפן.

3. טיפול לאחר ניתוח

1. הנח את החולדה בכלוב נקי מתחת למגבת נייר בתנוחה נוחה. אם החדר קר, הניחו כרית חום מתחת לחלק מהכלוב (רק מתחת לחלק מהכלוב מכיוון שהחיה אמורה להיות מסוגלת לברוח מהחום בעת הצורך). הקפידו על גישה נוחה למזון ומים.
2. אל תשאיר את החולדה לאחר הניתוח ללא השגחה עד שהיא חזרה להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה חזה ניתן להחזיר את החולדה לחברת בעלי חיים אחרים לאחר שהתאוששה לחלוטין מההרדמה לאחר הניתוח. זה בדרך כלל לאחר שעה אחת וכאשר החולדה מציגה את דפוס ההליכה וההתנהגות הרגילים שלה.
3. לאחר 24 שעות ו-48 שעות לאחר הניתוח, יש לתת מינון של 0.5 מ"ג/ק"ג קרפרופן תת עורי (אזור הבטן) לטיפול בכאבים לאחר הניתוח.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Carprofen	Local Veterinary Pharmacy	n/a	בית המרקחת הווטרינרי המקומי מכין דילול קפרופן
Cotton swabs	Nobamed	974255
Electrocautery	Fine Science Tools	18010-00
אתנול 70%	Interchema BV	400406
Ethilon 4.0	Johnson & Johnson	1854G	חשוב: הצבע צריך להיות כחול או שחור
Ethilon 8.0	Johnson & Johnson	BV130-5
Isoflo, isoflurane Zoetis	Dechra Veterinary Products	B506
Mesh bottom cages	StoeltingCo	57816 and 57824
מיקרו מלקחיים	Fine Science Tools	11251-35
Micro needle holder	Fine Science Tools	12076-12	<
Fine Science Tools	15019-10
פינצטה מיקרו	Fine Science Tools	11254-20
NaCl 0.9%	Trademed	H7 1000-FRE
מחזיק מחט	Fine Science Tools	12004-16
Ophthalmic ointment	Local Veterinary בית מרקחת	n/a	בית המרקחת הווטרינרי המקומי מייצר את משחת
אזמל	Fine Science Tools	10003-12
Scissors	Fine Science Tools	14001-12
Stereo surgical microscope	Leica	A60 F
גיליון סטרילי עם חור	Evercare OneMed	1555-01
להב כירורגי מס' 15	Fine Science Tools	10015-00
פינצטה	Fine Science Tools	11617-12

td style='border-top-style:none;height:14.5pt;'>Micro scissors העיניים