אינדוקציה של לחץ תוך עיני מוגבר במודל חולדה

תקציר

מקור: Lani-Louzada, R., et al., צריבה במעגל מלא של מקלעת כלי הדם הלימבלית לגלאוקומה הנגרמת בניתוח במכרסמים. J. Vis. Exp. (2022)

סרטון זה מדגים את האינדוקציה והניטור של לחץ תוך עיני מוגבר (IOP) במודל חולדות. התהליך כולל צריבה של כלי הדם הלימבליים, וכתוצאה מכך חסימת כלי דם ועלייה ב-IOP. לאחר מכן נותנים לחולדה להתאושש, ו-IOP מנוטר באופן קבוע הן בעיני הניסוי והן בעיני הביקורת לצורך השוואה.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

בעבודה הנוכחית נעשה שימוש בחולדות Lister Hooded משני המינים, בגילאי 2-3 חודשים ובמשקל 180-320 גרם. עם זאת, ניתן להתאים את ההליך בזני חולדות שונים בטווחי גילאים שונים.

ניתוח יתר לחץ דם בעיניים ומעקב קליני

1. בעלי חיים בסביבה בטמפרטורה מבוקרת ומחזור אור/חושך של 12 שעות (6:00: אור דולק/18:00: כיבוי אור) עם מזון סטנדרטי מוקרן גמא (Nuvilab® CR-1, Quimtia S/A, ברזיל) ומים (מסנן משולש, עם פחם פעיל לא רעיל) זמין ad libitum.
2. הכינו תערובת קוקטייל הרדמה מלאי המורכבת משלושה חלקים של 10% קטמין הידרוכלוריד וחלק אחד של 2% קסילזין הידרוכלוריד (מדלל: מים סטריליים).
3. לרסן בעדינות את בעל החיים על ידי החזקת העור הגבי ולגרום להרדמה על ידי מתן תוך-צפקי של 1 מיקרוליטר/גרם ממשקל הגוף של התערובת (קטמין: 75 מ"ג/ק"ג; קסילזין: 5 מ"ג/ק"ג). בדוק אם יש הרדמה נכונה לאחר כ-5 דקות על ידי ביצוע תגובת צביטה בבוהן.
4. הרדמה מקומית של שני משטחי העיניים על ידי החדרת טיפת עיניים פרוקסימטקאין הידרוכלוריד 0.5%. המתן 30-60 שניות והסר את התמיסה שנותרה מההיבט הקדמי של הגלובוס, על ידי נגיעה עדינה בלחמית הבולברית של האף או הרוחב עם צמר גפן סטרילי קטן.
5. מדוד IOP בסיסי של עיני בקרה ניסיוניות ונגדיות על ידי הצבת החיה בתנוחת דקוביטוס גחונית על הספסל כך שמשטח הקרנית יהיה נגיש בקלות לקצה הטונומטר.
6. השתמש בטונומטר כף יד או ריבאונד ( איור 1A). מקם את קצה הטונומטר כך שהוא נוגע מעט באזור הקרנית המרכזי בניצב. רכוש וממוצע של 3-5 ממוצעים אמינים שנוצרו על ידי מכונה. כל ממוצע מחושב אוטומטית על ידי המכשיר לאחר שש מדידות בודדות מוצלחות.
   1. טען את טונומטר הריבאונד עם בדיקה ולחץ על לחצן המדידה פעם אחת כדי להפעיל אותו, תוך הנחת קצה המכשיר כלפי מעלה כדי למנוע נפילת הגשושית. לאחר הפעלתו, התצוגה תציג 00 המציין שהציוד מוכן למדידה.
   2. מקם את המכשיר עם קצה הגשושית במרחק של 1-4 מ"מ מהקרנית ורכוש מדידות על ידי לחיצה מהירה וזהירה על כפתור המדידה, מבלי להזיז את הציוד. כל מדידה מוצלחת מזוהה על ידי צפצוף קצר ולאחר שש פעמים, הממוצע מוצג על מסך המכשיר.
      הערה: למרות ניסיון רב עם טונומטר אפלנציה, כדי לייעל את ההליך כולו המחברים ממליצים להשתמש בטונומטר ריבאונד, המספק רכישה קלה יותר של מדידת IOP אמינה.
7. הנח את החיה בתנוחת דקוביטוס רוחבית קלה תחת מיקרוסקופ סטריאו, ותכנן בזהירות את הניתוח על ידי בדיקת עין הניסוי בהגדלה של פי 40. אל תשכח לשמור על עין הבקרה הנגדית משומנת במהלך ההליך על ידי החדרת טיפת נתרן כרמלוז או נתרן היאלורונאט.
8. בעזרת מלקחיים מעוקלים, דחף בעדינות קדימה את גלגל העין הניסיוני כדי לחשוף את כלי הדם המקיפים 360 מעלות של הלימבוס. ביד השנייה, צרבו בעדינות את כלי הדם סביב הקרנית בעזרת צריבה עיניים בטמפרטורה נמוכה (1,300 מעלות צלזיוס; Bovie Medical, USA) (איור 1B-E).
   הערה: לצריבה המוזכרת יש קצה עגול שאמור לגעת בכלי הדם הלימביים לאורך.
9. היזהר לא לצרוב את היקף הקרנית, מכיוון שהדבר עלול לגרום לאטימות קרנית לאחר הניתוח, מה שמונע הערכת in vivo של תפקוד הרשתית.
10. שימו לב להופעתם של סימנים מעגליים קטנים של צריבה על הלימבוס הסקלרלי, מחיקת כלי הדם הלימביים והרחבת האישונים בעין המנותחת, שהם סימנים להליך כירורגי מוצלח.
    הערה: מכיוון שכלי הדם הלימבליים של חולדות ועכברים דומים מבחינה אנטומית ולצריבה המשמשת יש קצה קטן ועדין, פרוטוקול זה יכול לעבוד גם עבור עין העכבר ללא כל התאמה.
11. לאחר הניתוח, בדוק את הלחץ התוך עיני מיד לאחר הניתוח בשתי העיניים כמתואר בשלב 1.5.
12. יש למרוח טיפה של פרדניזולון אצטט (1.2 מ"ג/מ"ל) ולשמור אותה במגע עם המשטח הקדמי של עין הניסוי למשך כ-40 שניות, ולאחר מכן להחליף אותה במשחה עיניים של אנטיביוטיקה (אוקסי-טטרציקלין הידרוכלוריד 30 מ"ג/גרם בתוספת פולימיקסין B 10,000 יח'/גרם; או ציפרופלוקסצין 3.5 מ"ג/גרם). בצע הזרקה תוך שרירית של טרמדול הידרוכלוריד (מנה בודדת; 2 מ"ג/ק"ג) למניעת כאבים לאחר ההליך.

תוצאות

איור 1: צריבה תרמית של מקלעת כלי הדם הלימבלית והשלכות על תפקוד הרשתית in vivo. (A) שיטות חלופיות למדידת IOP בחולדות: טונומטריית ריבאונד (מעולה), וטונומטריית אפלנציה (נחותה). (B-E) הליך כירורגי; ראש חץ: מקלעת כלי דם לימבלית; חץ: מלקחיים מעוקלים המשמשים לחשיפת המשטח הקדמי של גלגל העין ולאופטימיזציה של הערכה כירורגית לכלי דם לימבל...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Cautery Low Temp Fine Tip 10/bx	Bovie Medical Corporation	AA00	צריבה
Cetamin	Syntec do Brasil Ltda	000200-3-000003	קטמין הידרוכלוריד 10%
Ecofilm	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0487	נתרן כרמלוז 0.5%
Hyabak	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-8042140002	נתרן היאלורונאט 0.15%
Icare Tonolab	Icare פינלנד Oy	TV02 (מספר דגם)	טונומטר כף יד ריבאונד
Maxiflox Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda MS-1.0298.0489 Ciprofloxacin 3.5 מ"ג/גרם	Ster MD União Química Farmacêutica Nacional S/A MS-1.0497.1287 פרדניזולון אצטט 0.12%	Terolac
Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0497.1286	Ketorolac trometamol 0.5%
Terramicina	Laboratórios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	Oxytetracycline hydrochloride 30 מ"ג/גרם + פולימיקסין B 10,000 U/g
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	טונומטר
	Carl Zeiss-מיקרוסקופ		סטריאו לניתוח ודיסקציה של הרשתית

עיניים בטמפרטורה נמוכהכף יד דיגיטלי