מאמר שיטה

השראת מצבים היפוקסיים-איסכמיים ודלקתיים למודל אנצפלופתיה בחולדות טרום לידתיות

28 באפריל 2025

במאמר זה

תקציר

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Jantzie, L. L., et. al. מידול אנצפלופתיה של פגות באמצעות היפוקסיה-איסכמיה טרום לידתית עם ליפופוליסכריד תוך מי שפיר בחולדות. J. Vis. Exp. (2015)

סרטון זה מדגים פרוטוקול לגרימת מצבים היפוקסיים-איסכמיים ודלקתיים בחולדות עובריות על ידי הגבלת זרימת הדם ברחם והזרקת LPS, מודלים של דלקת עצבית ושיבוש התפתחות המוח הרלוונטיים למחקרי לידה מוקדמת.

פרוטוקול

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. מיקום קליפס מפרצת

  1. הנח קליפ מפרצת של 30 גרם על כל עורק רחם. יש לוודא הפסקת זרימת הדם, כולל פולסים פרוקסימליים ודיסטליים, והתכהות כלי הרחם, כולל שליה בודדת. מכסים את הקרניים החשופות ואת כל שדה הניתוח בגזה ומשקים במי מלח סטריליים. השקו את השדה בערך כל 10 דקות כדי לשמור על לחותו.
  2. לאחר 60 דקות, הסר את הגזה והשקה את השדה. ודא שקרני הרחם וכלי הדם לחים כראוי להסרת קליפס מוצלחת. הסר בעדינות כל קליפ מפרצת באמצעות מלקחיים. הקפד לא לגרום לטראומה לכלי הדם, ושמור על שלמות הרקמות במהלך ההסרה.
  3. השקו היטב את קרני הרחם והשדה, והקפידו להסיר חוטי גזה תועים משקי מי השפיר.

2. הזרקת ליפופוליסכריד לתוך שקי מי השפיר

  1. בבסיס כל שק מי שפיר בודד, ממש לפני לוחית השליה, יש להזריק 100 מיקרוליטר של ליפופוליסכריד (LPS) (4 מיקרוגרם/שק) עם הצבע הכחול המדולל של אוון למי השפיר. השתמש במלקחיים קהים כדי לייצב ולסובב כל שק מי שפיר למצב אופטימלי להזרקה. הצבע הכחול של דילול אוון הוא חומר ניגוד המסייע באישור מיקום והזרקה נכונים של המזרק.
    הערה: השתמש רק במזרק אינסולין דק במיוחד של 0.3 מ"ל עם מחט מחוברת של 8 מ"מ 31 גרם לזריקות תוך מי שפיר. שימוש במחטים גדולות יותר יגרום לאובדן מי שפיר כרוני, מוות עוברי וספיגה חוזרת של ההריון. ניתן להפחית כמויות קטנות של דליפת מי שפיר עם הוצאת המזרק על ידי לחץ ישיר לשק מי השפיר. חלק מעוברי החולדות עשויים לסבול מידה מסוימת של אוליגוהידרמניוס. עם זאת, אובדן מי שפיר חריף מנקב עם מחטים גדולות או ניקוב מקרי הגורם לדליפת נוזלים כרונית גורם לאובדן עובר ובמקרים חמורים לאובדן הריונות שכנים.
  2. השקו את קרני הרחם פי 3 במי מלח סטריליים.

3. סגירת הלפרוטומיה

  1. } בעזרת מלקחיים, החזירו בזהירות את קרני הרחם לחלל הצפק. הקפדה על מרווח מספיק בין שקי מי השפיר לחתך קו האמצע, העריכו מחדש את קצוות השכבה השרירית באמצעות תפר משי 3-0 רץ. היו מודעים למיקום שקי מי השפיר בזמן סגירת חתך השריר. היזהר לא לתפור לתוך שק או דרכו.
  2. יש להעריך מחדש את שכבת העור, באמצעות תפר משי 3-0, הסוגר את שכבת העור.
    הערה: יש לסגור את הלפרוטומיה בשתי שכבות של תפרים רציפים כדי לאפשר התרחבות העור והשרירים עם עלייה בהריון. תפרים רציפים מאפשרים מתח פצע מפוזר באופן שווה. תפרים קטועים פחות רצויים מכיוון שקשרים מרובים מגרים וניתן ללעוס אותם בקלות על ידי החולדה לאחר ההתאוששות מההרדמה. סיכות כירורגיות אינן רצויות. יש לחתוך זנבות של קשרי הניתוח קצרים מאוד (<3 מ"מ).
  3. יש להזריק 1 מ"ל של 0.125% בופיבקאין תת עורי סביב קצוות הפצע באמצעות מחט 26 גרם. יש לתת מנה אחת של 0.1 מ"ג/ק"ג בופרנורפין תת עורית בעורף.
  4. כבה איזופלורן וייבש את החולדה במגבת לפי הצורך. הכניסו את החולדה לכלוב ביתי נקי ועקבו אחר התאוששותה מההרדמה. ודא שהחולדה לא הופכת להיפותרמית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תמיסת מלח, 0.9%SigmaS8776
LPS 011B4SigmaL2630
Evan's Blue DyeSigmaE2129
כפפות כירורגיותBiogel40870
או מגבותCardinal Health287000-008Sterile
PDI Alcohol Prep PadsFisherbrand06-669-62
Mini Arco קוצץ נטעןKent Scientific Corp.CL8787
מלקחיים קהיםRobozRS-8100
ScissorsRobozRS-6808
מספריים כירורגייםRobozRS-5880
מספריים כירורגייםF.S.T.14002-16
SyringeBD3096281 ml
NeedleBD30512225G 5/8
NeedleBD30512830G 1
אפליקטורים עם קצה כותנהFisherbrand23-400-114קטן, 6 אינץ' סטרילי
ספוג גזה כותנהFisherbrand22-362-178
מחזיקי מחט<INS60010912.5 CM STR
Vessel ClipsKent Scientific Corp.INS60012030G Pressure
3-0 Perma Hand Silk PeresEthicon1684Gקלוע שחור, 3-0 (2 מטרי), 18 אינץ', לא נספג, מחט PS-1 24 מ"מ, 3/8 circle
מזרקי אינסוליןBD3284380.3cc 3 מ"מ 31G
td style='width:130pt;'>Kent Scientific קורפ.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים