השראת מצבים היפוקסיים-איסכמיים ודלקתיים למודל אנצפלופתיה בחולדות טרום לידתיות

תקציר

מקור: Jantzie, L. L., et. al. מידול אנצפלופתיה של פגות באמצעות היפוקסיה-איסכמיה טרום לידתית עם ליפופוליסכריד תוך מי שפיר בחולדות. J. Vis. Exp. (2015)

סרטון זה מדגים פרוטוקול לגרימת מצבים היפוקסיים-איסכמיים ודלקתיים בחולדות עובריות על ידי הגבלת זרימת הדם ברחם והזרקת LPS, מודלים של דלקת עצבית ושיבוש התפתחות המוח הרלוונטיים למחקרי לידה מוקדמת.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. מיקום קליפס מפרצת

1. הנח קליפ מפרצת של 30 גרם על כל עורק רחם. יש לוודא הפסקת זרימת הדם, כולל פולסים פרוקסימליים ודיסטליים, והתכהות כלי הרחם, כולל שליה בודדת. מכסים את הקרניים החשופות ואת כל שדה הניתוח בגזה ומשקים במי מלח סטריליים. השקו את השדה בערך כל 10 דקות כדי לשמור על לחותו.
2. לאחר 60 דקות, הסר את הגזה והשקה את השדה. ודא שקרני הרחם וכלי הדם לחים כראוי להסרת קליפס מוצלחת. הסר בעדינות כל קליפ מפרצת באמצעות מלקחיים. הקפד לא לגרום לטראומה לכלי הדם, ושמור על שלמות הרקמות במהלך ההסרה.
3. השקו היטב את קרני הרחם והשדה, והקפידו להסיר חוטי גזה תועים משקי מי השפיר.

2. הזרקת ליפופוליסכריד לתוך שקי מי השפיר

1. בבסיס כל שק מי שפיר בודד, ממש לפני לוחית השליה, יש להזריק 100 מיקרוליטר של ליפופוליסכריד (LPS) (4 מיקרוגרם/שק) עם הצבע הכחול המדולל של אוון למי השפיר. השתמש במלקחיים קהים כדי לייצב ולסובב כל שק מי שפיר למצב אופטימלי להזרקה. הצבע הכחול של דילול אוון הוא חומר ניגוד המסייע באישור מיקום והזרקה נכונים של המזרק.
   הערה: השתמש רק במזרק אינסולין דק במיוחד של 0.3 מ"ל עם מחט מחוברת של 8 מ"מ 31 גרם לזריקות תוך מי שפיר. שימוש במחטים גדולות יותר יגרום לאובדן מי שפיר כרוני, מוות עוברי וספיגה חוזרת של ההריון. ניתן להפחית כמויות קטנות של דליפת מי שפיר עם הוצאת המזרק על ידי לחץ ישיר לשק מי השפיר. חלק מעוברי החולדות עשויים לסבול מידה מסוימת של אוליגוהידרמניוס. עם זאת, אובדן מי שפיר חריף מנקב עם מחטים גדולות או ניקוב מקרי הגורם לדליפת נוזלים כרונית גורם לאובדן עובר ובמקרים חמורים לאובדן הריונות שכנים.
2. השקו את קרני הרחם פי 3 במי מלח סטריליים.

3. סגירת הלפרוטומיה

1. } בעזרת מלקחיים, החזירו בזהירות את קרני הרחם לחלל הצפק. הקפדה על מרווח מספיק בין שקי מי השפיר לחתך קו האמצע, העריכו מחדש את קצוות השכבה השרירית באמצעות תפר משי 3-0 רץ. היו מודעים למיקום שקי מי השפיר בזמן סגירת חתך השריר. היזהר לא לתפור לתוך שק או דרכו.
2. יש להעריך מחדש את שכבת העור, באמצעות תפר משי 3-0, הסוגר את שכבת העור.
   הערה: יש לסגור את הלפרוטומיה בשתי שכבות של תפרים רציפים כדי לאפשר התרחבות העור והשרירים עם עלייה בהריון. תפרים רציפים מאפשרים מתח פצע מפוזר באופן שווה. תפרים קטועים פחות רצויים מכיוון שקשרים מרובים מגרים וניתן ללעוס אותם בקלות על ידי החולדה לאחר ההתאוששות מההרדמה. סיכות כירורגיות אינן רצויות. יש לחתוך זנבות של קשרי הניתוח קצרים מאוד (<3 מ"מ).
3. יש להזריק 1 מ"ל של 0.125% בופיבקאין תת עורי סביב קצוות הפצע באמצעות מחט 26 גרם. יש לתת מנה אחת של 0.1 מ"ג/ק"ג בופרנורפין תת עורית בעורף.
4. כבה איזופלורן וייבש את החולדה במגבת לפי הצורך. הכניסו את החולדה לכלוב ביתי נקי ועקבו אחר התאוששותה מההרדמה. ודא שהחולדה לא הופכת להיפותרמית.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
תמיסת מלח, 0.9%	Sigma	S8776
LPS 011B4	Sigma	L2630
Evan's Blue Dye	Sigma	E2129
כפפות כירורגיות	Biogel	40870
או מגבות	Cardinal Health	287000-008	Sterile
PDI Alcohol Prep Pads	Fisherbrand	06-669-62
Mini Arco קוצץ נטען	Kent Scientific Corp.	CL8787
מלקחיים קהים	Roboz	RS-8100
Scissors	Roboz	RS-6808
מספריים כירורגיים	Roboz	RS-5880
מספריים כירורגיים	F.S.T.	14002-16
Syringe	BD	309628	1 ml
Needle	BD	305122	25G 5/8
Needle	BD	305128	30G 1
אפליקטורים עם קצה כותנה	Fisherbrand	23-400-114	קטן, 6 אינץ' סטרילי
ספוג גזה כותנה	Fisherbrand	22-362-178
מחזיקי מחט<	INS600109	12.5 CM STR
Vessel Clips	Kent Scientific Corp.	INS600120	30G Pressure
3-0 Perma Hand Silk Peres	Ethicon	1684G	קלוע שחור, 3-0 (2 מטרי), 18 אינץ', לא נספג, מחט PS-1 24 מ"מ, 3/8 circle
מזרקי אינסולין	BD	328438	0.3cc 3 מ"מ 31G

td style='width:130pt;'>Kent Scientific קורפ.