$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל ההליכים הקשורים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.
1. הרכבת המשקפיים לעכברים
- הכינו את החלקים הדרושים להרכבת המשקפיים (איור 1a). עבור כל עכבר, הכינו את כל הדברים הבאים: מקל ניילון אחד המותקן על הראש, מסגרת טיטניום אחת גבוהה ואחת נמוכה יותר, שתי עדשות בעלות הספקים מתאימים בהתאם למטרת הניסוי, בורג אחד בגודל M1.4 באורך של 10 מ"מ, אגוז אחד לבורג בגודל M1.4, מכונת כביסה רגילה אחת לבורג בגודל M1.4 בעובי של 0.3 מ"מ, ושני קצות ציפורניים מלאכותיות. הערה: קיימים שני סוגים של מסגרות בגבהים שונים. עבור עכבר אחד, מסגרת אחת גבוהה יותר ומסגרת אחת תחתונה משמשות כסט. יש לשים מסגרות גבוהות יותר מעל התחתונות על מנת להפוך את שדות הראייה לסימטריים. מסגרות ועדשות תוכננו ומיוצרים במיוחד על ידי קבוצת המחקר של המחברים. אלה זמינים על ידי יצירת קשר עם המחברים המתאימים של מאמר זה. חלקים אחרים ניתן למצוא בחנויות כלים קמעונאיות.
- הרכיבו את המסגרת לעין ימין ושמאל בנפרד.
- יש לסדר את קצה הציפורן כך שפונה כלפי חוץ כדי להשיג את אפקט ההגנה הטוב ביותר. התאימו את הזווית בין קצה הציפורן למסגרת כך שתהיה בערך 130° כדי למנוע מיסוך של שדה הראייה של העכבר (איור 1b). הדביקו את קצות הציפורניים המלאכותיות למסגרת באמצעות דבק ציאנואקרילט.
הערה: קצות ציפורניים יכולים לעזור להגן על העדשה מפני שריטות על ידי העכבר. כיוון קצות הציפורניים חייב להיות הפוך מכיוון שהמסגרת הגבוהה והמסגרת התחתונה משמשות לעין ימין ולעין שמאל, בהתאמה. - יש להמתין לפחות 12 שעות כדי לאפשר לדבק להתייבש לחלוטין, ולאחר מכן להשתמש בקוצץ ציפורניים כדי להתאים את צורת קצות הציפורניים לגודל של כ-1 ס"מ ×-1 ס"מ על ידי חיתוך וקיצוץ.
- הדביקו את העדשה למסגרת באמצעות דבק ציאנואקרילט. הנח את העדשה על המסגרת ביד והחזק את המסגרת בצורה אופקית. הזרקו את דבק הציאנואקרילט מקצה העדשה ותנו לדבק להתפשט על ידי מתח פנים.
הערה: הדבק ישחק את העדשה וישפיע על השקיפות שלה, לכן ודא שהדבק נוגע רק בחלק ההיקפי של העדשה. השתמש בעדשת פלאנו 0 דיופטר (D) כעדשת בקרה ומינוס כדי לגרום לקוצר ראייה. ההשפעה של עוצמות שונות של עדשות מינוס (-10 D עד -50 D) תוארה במקום אחר4. כדי למקסם את השראת קוצר הראייה, עדשת -30 D מומלצת להשראת קוצר ראייה. ניתן לגרום ל-FDM גם עם אותו מכשיר פשוט על ידי החלפת העדשה למכסה של המיקרו-שפופרת של 1.5 מ"ל כמפזר.
- הדק את הבורג לתוך מקל הניילון יחד עם מכונת הכביסה מהצד השטוח של המקל. הכינו את המשקפיים והמקלות לפני הניסוי בהתאמה ואחסנו אותם לשימוש נוסף ( איור 1c).
הערה: ניתן להשהות את הפרוטוקול כאן.
2. קיבוע המסגרת על גולגולת העכבר.
- יש למרוח טיפה אחת של 0.1% טיפת עיניים מטוהרת נתרן היאלורונאט למניעת יובש בכל עין.
הערה: טיפות עיניים על פני העין ישפיעו על ערכי השבירה ומדידות האורך הצירי. אין להשתמש בטיפות העיניים לאחר ההרדמה עד לסיום כל המדידות. - הניחו את סנטרו של העכבר המורדם על מדרון עשוי חימר או כל דבר שיכול לשמש ככרית כדי להפוך את המישור הקדמי של הגולגולת לאופקי.
- יש לעקר את השיער והקרקפת בין האוזניים לעיניים באמצעות צמר גפן עם 70% אתנול.
- חותכים את העור בין האוזניים לעיניים כדי לחשוף את הגולגולת למשך כ-0.8 sq.cm באמצעות מספריים ופינצטה כירורגית. השתמש בנוזל תחריט שיניים ובמקלון צמר גפן כדי להסיר את הפריאוסטאום. עקר את המספריים והפינצטה הכירורגית עם 70% אתנול לפני הניתוח של כל עכבר.
הערה: ייתכן שיהיה צורך בגזירת השיער ולבישת כפפות סטריליות. בדוק את הוראות הוועדה הרלוונטית לטיפול בבעלי חיים לפני הליך זה. ברוב המקרים, נוזל תחריט השיניים הוא אחד הקבצים המצורפים במערכת הדבק הדנטלי לריפוי עצמי. אם נוזל החריטה הדנטלי אינו זמין, השתמש במקום זאת באתנול 70%. - הרכיבו סט מסגרות ללא עדשה כדי לעזור לקבע את המוט למיקום הנכון. הנח את המסגרות על ראש העכבר. כוונן בזהירות את מיקום המסגרות כדי לוודא ששתי העיניים נמצאות באמצע המסגרת הריקה.
- השתמש במערכת דבק דנטלי לריפוי עצמי כדי לחבר את המקל לראש העכבר. היזהר לא לתת לנוזל של מערכת ההדבקה לזרום לעין העכבר.
הערה: שיטת השימוש במערכת הדבק הדנטלי לריפוי עצמי שונה בין המוצרים. עיין בהוראות בעיון.
זהירות: חלק מהריאגנטים במערכת הדבק הדנטלי עלולים להיות רעילים. - המתן כ-5 דקות והסר את המסגרת ואת האום בזהירות מבלי לשנות את מיקום המקל (איור 2a).
- הזריק 0.75 מ"ג/ק"ג אטיפמזול הידרוכלוריד תוך צפקי כדי לעזור לעכבר להתאושש מההרדמה מהר יותר. הכניסו את העכבר לכלוב אישי עד להתאוששות מלאה. אל תשאיר את העכבר ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה עצם החזה. ניתן להשהות את הפרוטוקול כאן.
3. התחלת השראת קוצר הראייה והתחזוקה לאחר מכן
- המתן לפחות 24 שעות לאחר הניתוח כדי לאפשר לעכבר להתאושש מההרדמה לחלוטין. אחוז במקל והרכיב את המסגרות בעדשות. התמריץ מתחיל בנקודת זמן זו (איור 2b).
הערה: כדי למזער את אי הנוחות במהלך ההחלמה מההרדמה ולתת מספיק זמן למערכת הדבק הדנטלית להיקרש, מומלץ מאוד לשים את המסגרת לאחר שהעכברים מתאוששים לחלוטין מההרדמה. מלט השרף של מערכת הדבק יכסה במלואו את חתך הקרקפת. לכן, אין צורך בטיפול ספציפי לאחר הניתוח כדי למנוע זיהום ולהקל על כאבים לאחר הניתוח. מיד לאחר הפעם הראשונה ששמים את המסגרת, עכברים יהיו מודעים יתר על המידה לקיומה של העדשה ויגרדו אותה הרבה. ההתנהגות הגסה תחזור לקדמותה לאחר מספר שעות. ניתן לשמור על העכברים עם עדשות באותה צפיפות כמו העכברים הרגילים. - הסר את המסגרת ונקה את העדשות וקצות הציפורניים בעזרת צמר גפן לפחות פעמיים בשבוע כדי לשמור על שקיפות העדשה.
הערה: אין צורך להכניס את העכבר להרדמה לצורך הסרה והרכבה של המסגרת. מתן תמיכה לעכברים לשבת עליהם, במקום לתלות אותם בזמן העבודה איתם, יכול להפחית את המצוקה. - אם יש צורך במדידת ביניים, הכניסו את העכבר להרדמה ומדדו את העכבר כפי שתואר קודם לכן. ניתן להמשיך את ההשראה לאחר שהעכבר מתאושש מההרדמה.
- נקו את הכלוב לפחות פעמיים בשבוע.
הערה: זה עוזר לשמור על בהירות העדשה. הנחת רשת בין העכבר לתחתית הכלוב כדי לסנן את שאריות המזון עשויה גם היא להועיל. - עקוב אחר משקל הגוף וההתנהגות הגסה. השוו אותם לעכברים שלא נגעו באותו גיל במהלך כל תהליך הניסוי.
הערה: מלבד כמה התנהגויות גירוד, לא נמצא שינוי משמעותי, כולל משקל הגוף, בין עכברי ניסוי לעכברים שלא טופלו.
