גרימת חבלה בחוט השדרה במודל עכבר באמצעות פלטפורמה קואקסיאלית לפגיעה בחוט השדרה

תקציר

מקור: Elzat, E. Y. Y., et al., הקמת מודל פגיעה בחוט השדרה של חבלת עכבר המבוסס על טכניקה זעיר פולשנית. J. Vis. Exp. (2022).

סרטון זה מדגים את השיטה לגרימת פגיעת חבלה בחוט השדרה ברמת T9 במודל עכבר, באמצעות פלטפורמה קואקסיאלית של פגיעה בחוט השדרה. משקל נופל על חוט השדרה ברמת T9 שיוצר חבלה הגורמת מיד לשינוי צבע הרקמה ונפיחות.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. איתור וכריתת למינקטומיה של חוליית בית החזה 9^th (T9)

} הערה: נקבות עכברי C57BL/6J בני 9-10 שבועות נרכשו מחברת ג'ינאן פנגיואה לבעלי חיים ניסיוניים (ג'ינאן, סין).

1. אוטוקלאב חבילת מכשירים כירורגיים לניסוי ולעקר את שולחן הניתוחים ב-75% אלכוהול לפני הניתוח.
2. יש להזריק בופרנורפין לשיכוך כאבים (0.05-2.0 מ"ג/ק"ג, תת עורית) 30 דקות לפני ההרדמה לניתוחי פציעה. לאחר מכן, הרדמו את העכבר עם איזופלורן (אינדוקציה: ~3-5%, תחזוקה: ~1.5-2%). בדוק אם החיה מורדמת לחלוטין על ידי הרפלקסים של צביטת הזנב או הבוהן. לאחר שההרדמה נכנסה לתוקף, יש להשכיב את העכבר במצב שכיבה בחלק ייעודי של שולחן הניתוחים ולצפות את הקרנית במשחה עיניים (למרוח משחה עיניים על הקרניות כדי להגן על העיניים מפני התייבשות במהלך הניתוח).
   1. לגלח את השיער מהזנב לרוסטרל בעזרת מכונת גילוח חשמלית מעל עמוד השדרה של בית החזה. עקר את העור מספר פעמים בתנועה סיבובית עם יודופור למשך 30 שניות, ואחריו 75% אלכוהול. מרחו וילון כירורגי סטרילי ובצעו חתך אורכי של כ-1.5 ס"מ על העור מ-6^th חוליית בית החזה (T6) לחוליית בית החזה ה-13 (T13) בעזרת אזמל ולהב.
      הערה: ממשש לאורך השוליים העליונים עד לקו האמצע, היכן שנמצאת חוליית בית החזה 12^th (T12) - T13. בצע חתך של 1.5 ס"מ לרוסטרל, והחתך צמוד בערך לחוליות T6-T13.
3. חקור את הצלע 13^th בצד אחד מהחלק הגרמי מתחת למיקרוסקופ ההפעלה. חקור את התהליך הקוצני בקו האמצע על ידי נגיעה קלה באזור הזווית הקוסטוברלית ולאחר מכן לכיוון הרוסטרל כדי לאתר את החלל הבין-קוצני של ה-T12-T13. חקור את המרחב הבין-קוצני של חוליית בית החזה T9 - 10^th (T10) מהמרחב של T12-T13 לצד הרוסטרלי. (איור 1A, 2A)
4. נתחו את שריר עמוד השדרה לאורך התהליך הקוצני של ה-T9 למפרקי הפן הקדמיים והאחוריים של שני הצדדים בעזרת מספריים מיקרו (איור 2B). החזר את שרירי עמוד השדרה בעזרת מיקרו-מחזירים ונקה את הרקמה הרכה על הלמינה ובחלל הבין-קוצני של חוליית בית החזה 8^th (T8) - T9 ו- T9-T10 בעזרת מספריים מיקרו.
5. בצע כריתת למינקטומיה T9, מהדק את התהליך הקוצני של T9 בעזרת מלקחיים מיקרו-כירורגיים, הרם אותו מעט, הכנס את המספריים המיקרו במקביל לאורך הצד האחורי הימני של הלמינה, הימנע מנזק לחוט השדרה, וחתך את הלמינה בעזרת מספריים מיקרו. חזרו על הפעולה בצד שמאל, וחוט השדרה יכול להיחשף (איור 1B, 2C).
6. לפני תיקון החוליה, שחרר את הזרוע האוניברסלית והדק לאט את מפרקי הפן 9^th ל-10^th משני צידי החוליה עם מלקחיים מיקרו יתושים של מייצב החוליות. הדק את הברגים על מלקחיים המיקרו יתושים, וכך החוליה מתייצבת. התאימו את חוט השדרה למישור האופקי, הדקו את הזרוע האוניברסלית וקבעו את החוליה ( איור 2D).

2. פגיעת חבלה T9

1. ברגע שחוט השדרה ברמת T9 נחשף והחוליה מקובעת, כוונו אל חוט השדרה בקצה שבתוך השרוול מתחת למיקרוסקופי המנתח (איור 2E).
2. בדוק אם פני השטח של הקצה מקבילים לחוט השדרה מההיבטים האחוריים והרוחביים של חוט השדרה מכיוון שקל להתבונן בקשר בין חוט השדרה לקצה מתחת למיקרוסקופ, וניתן להפוך את שולחן הניתוחים בקלות.
3. בדוק אם פני השטח של הקצה מקבילים לגבולות הדו-צדדיים של הלמינה החסכונית לפני שהקצה נמצא במגע עם חוט השדרה לאחר כריתת הלמינקטומיה מכיוון שמדובר במישור ייחוס טבעי המקביל לחוט השדרה.
4. לאחר איתור החלל הבין-קוצני של ה-T12-T13, הורד את השרוול עד שקצה הפגיעה תואם את הסימן על חלון התצפית ומגיעים לגובה שצוין של 22 מ"מ. משוך החוצה את סיכת המשיכה כדי לשחרר את המשקל (1.3 גרם, 2.0 גרם או 2.7 גרם לפי הקבוצה, כאשר כל קבוצה כוללת 3 עכברים ולכל קבוצה יש עכבר אחד לכל נקודת זמן).
   הערה: חוט השדרה צריך להיות מקביל לקרקע ומאונך לקצה; הזז את שולחן הניתוחים כדי להבטיח את שדה הראייה המיקרוסקופי, מכיוון שהשולחן קומפקטי מאוד.
5. הסר את הפגיעה כאשר החבלה נעשית וצפה במידת הפגיעה בחוט השדרה (SCI) תחת מיקרוסקופ ההפעלה. בקבוצה הקלה ניתן לראות שינוי בצבע אדום בהיר, ואילו בקבוצה המתונה, אתר הפגיעה מציג אדום כהה תוך 3-4 שניות, ואולי ניתן להבחין בבולטות. בקבוצה החמורה, הביטויים האדומים הכהים עשויים להופיע מיד, ובולטות ברורה בדורה באה לידי ביטוי, אולם הדורה עדיין במצב עקבי (איור 2F).

תוצאות

איור 1. גרף הדמיה של שיטת איתור החוליות הקוסטוברליות T13. (A) הצלע 13^th ו-T13 הם מבנים אנטומיים קבועים יחסית. ניתן לזהות בקלות את הזווית הקוסטוברלית T13 תחת המיקרוסקופ, שממנו המפעיל יכול לחקור לעבר התהליך הקוצני ולמצוא את החלל הבין-קוצני T12-T13. לאחר מכן, בדוק לכיוון הצד הרוסטרלי ברציפות כדי למצוא את חוליית הפגיעה ה...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אתנול	Fuyu Reagent	64-17-5	{{}}
מיקרוסקופ פלואורסצנטי	KEYENCE	BZ-X8000}
עכברים	Jinan Pengyue Experimental Animal Company	C57BL/6J
מכשיר מיקרו-כירורגיה	שאנדונג ULT ביוטכנולוגיה ושות 'בע"מ	כל מכשירי הניתוח הם בהתאמה אישית	מספריים עיניים, מלקחיים מיקרו יתושים, מלקחיים מיקרו-כירורגיים
תחנת הרדמה אינהלציה במעבדה RWD	RWD Life Science Co., Ltd	R550
	PerkinElmer	}Quantum GX2
}פלטפורמה קואקסיאלית לפגיעה בחוט השדרה	שאנדונג ULT ביוטכנולוגיה ושות', Ltd	Custom-made (Feng's standard)	(https://shop43957633.m.youzan.com/wscgoods/detail/367x5ovgn69q18g?banner_id=f.81386274~goods.7~1~ b0yRFKOq&alg_id=0&slg=tagGood List-default%2COpBottom%2Cuuid %2CabTraceId&components_style_ layout=1&reft=1659409105184&sp m=g.930111970_f.81386274&alias =367x5ovgn69q18g&from_uuid=136 2cc46-ffe0-6886-2c65-01903dbacbb a&sf=qq_sm&is_share=1&shopAuto Enter=1&share_cmpt=native_ wechat&is_silence_auth=1)

{{TAG_ 39}}