סרטון זה מדגים הליך שלב אחר שלב להזרקת תרחיף ויראלי לגרעיני השורש הגבי (DRGs) וגרימת פגיעה אקסונלית מבוקרת באמצעות ריסוק שורש הגב בחולדה מורדמת. הפרוטוקול כולל חשיפת ה-DRGs, אספקת וקטור ויראלי מקדם צמיחה כדי להקל על התחדשות אקסונלית, וניתוק קשרים אקסונליים לחוט השדרה כדי לדגמן פגיעה עצבית חושית והתחדשות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מידול התחדשות אקסון חושי בחולדה באמצעות הזרקת גנגליון שורש גבי ופגיעה בריסוק שורש הגב
1.2K צפיות
⸱
28 באפריל 2025
במאמר זה
תקציר
פרוטוקול
כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.
1. הזרקת DRG וביצוע פציעת ריסוק שורש גבי
הערה: זהו ניתוח עדין ביותר. רצוי להתאמן תחילה על כמה בעלי חיים מתים כדי להכיר את האנטומיה לפני שמתקדמים לניתוח בעלי חיים חיים.
- אתר את התהליכים הקוצניים הבולטים C2 ו-T2 מעל העור. בצע חתך בעור בין התהליכים הקוצניים C2 ו-T2 עם להב אזמל מס' 10 (לאחר פתיחת העור, קו אמצע לבן של רקמה סיבית אמור להיות גלוי בשכבת השריר הראשונה; לשכבת השריר הראשונה יש מרקם "דמוי ג'לי").
- בצע חתך בגודל דומה בשכבת השריר הראשונה לאורך קו האמצע הלבן באמצעות להב אזמל. אל תחרוג מהתהליך הקוצני T2 הבולט, מכיוון שיש ענף עורקי מרכזי מאבי העורקים היורד הממוקם בסמוך לשם.
הערה: דימום כבד יכול להתרחש בכל מקום משלב זה ואילך. עצור תמיד את הדימום והסר את הדם באמצעות ניצני כותנה מעוקרים או ספוגים נספגים כירורגיים כדי לאפשר הדמיה ברורה בכל עת. המשך ההליך "בצורה עיוורת" עלול לגרום לנזק לא רצוי לחוט השדרה, DRG או שורש הגב, מה שיוביל לתופעות לוואי בלתי צפויות בבעל החיים בהמשך. - החזר את שכבת השריר הראשונה באמצעות שני מחזירים, אחד מונח בזנב ואחד בזנב; שכבת השריר השנייה, בעלת מראה מפוספס, צריכה להיות גלויה.
- אתר את קו האמצע של שכבת השריר השנייה (שם ניתן לראות שני שרירים אורכיים המחוברים על ידי רקמה דקה וקרומית). נתח את הרקמה הקרומית בעזרת זוג מספריים כדי להפריד בין שני שרירי האורך. הימנע משימוש בלהב אזמל במידת האפשר, מכיוון שהדבר עלול לגרום לנזק מיותר לשרירים ולדימום.
- כוונן את המחזירים בהתאם כדי לחשוף את השכבה השלישית של השריר הדק המכסה את עמוד השדרה. ניתן להרגיש את התהליכים הקוצניים על ידי נגיעה קלה עם זוג מלקחיים מעל שכבת השריר השלישית.
- בצע חתך קטן בשכבה השלישית של השריר בעזרת מספריים ומגרד בעדינות את השריר מהעצם בעזרת קורט או אזמל בצורה צדדית כדי לחשוף בבירור את החוליות. במידת הצורך, חתכו חלק מהשריר או הגיד כדי להקל על כריתת הלמינקטומיה.
- כדי לחשוף את ה-DRG השמאלי C5 - C8, בצע כריתת חצי למינקטומיה שמאלית בחוליות C4 - T1 על ידי הסרה זהירה של חלק מהלמינה והפדיקל באמצעות זוג רונג'ורים עדינים. ה-DRG ממוקם ליד הנקב הרוחבי של החוליות.
הערה: C3 - לחוליות C7 אין תהליך קוצני בולט. ה-C5 DRG ממוקם בין חוליות C4 ו-C5, ה-C6 DRG נמצא בין חוליות C5 ו-C6 וכן הלאה, בעוד שה-C8 DRG נמצא בין חוליות C7 ו-T1. אין חוליה C8, למרות נוכחותם של C8 DRG וקטע חוט שדרה C8. - לאחר שנחשף מספיק מה-DRG להזרקה, הכינו את המזרק על ידי הנחת מזרק המיקרוליטר המלא בנגיף המצויד במחט קהה בגודל 33 בהתאמה אישית על מחזיק המזרק הסטריאוטקסי. לפני ההזרקה, השתמש במחט משופעת בגודל 30 כדי ליצור פתח שטחי קטן על כל אחד מה-DRG הממוקד כדי לסייע בהחדרת מחט ההזרקה.
- הכנס את המחט בגודל 33 למרכז ה-DRG על ידי סיבוב הכפתורים בעדינות כדי לכוונן את הקואורדינטות הסטריאוטקסיות. אין להכניס את המחט יתר על המידה, מכיוון שהדבר עלול לגרום לדליפת נוזל החוצה מהצד הגחוני של ה-DRG. אם תתרחש דליפה, התאם מיד את מיקום המחט.
הערה: הקואורדינטות הסטריאוטקסיות המספריות אינן בשימוש; עם זאת, כדאי לנצל את המסגרת כדי להחזיק את המחט להזרקה. - הזריק 1 מיקרוליטר של הנגיף לכל DRG ב-0.2 מיקרוליטר לדקה באמצעות משאבת מזרק עירוי. המתן שלוש דקות נוספות לפני שתמשוך את המחט. במהלך ההזרקה, ה-DRG ישנה את צבעו לאט לאט אם תמיסת הנגיף מכילה צבע צבעוני.
- כדי לבצע פציעת ריסוק שורש גבי במקביל C5 - C8, מועכים כל שורש שלוש פעמים למשך 10 שניות כל אחד באמצעות זוג מלקחיים עדינים (Bonn Micro), המנוגדים לחלוטין לקצוות המלקחיים; קו לבן ברקמה אמור להופיע באתר הריסוק. אין להעמיק מהנדרש עם המלקחיים, מכיוון שהדבר עלול לגרום נזק לשורש הגחון.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Fast Green FCF dye | Sigma-Aldrich | F7258 | להמחשת פתרון חסר צבע. ריכוז מומלץ: 1% |
| Olsen-Hegar Needle Holder | Fine Science Tools | FST 12502-12 | |
| Friedman Pearson Rongeur Curved 0.7 מ"מ Cup | Fine Science Tools | FST 16121-14 | |
| Bonn Micro Ocps | Fine Science Tools | FST 11083-07 | לביצוע פציעת ריסוק שורש גבי< |
| Fine Science Tools | FST 14072-10 | ||
| מספריים עדינות | Fine Science Tools | FST 14058-11 | < |
| Fine Science Tools | FST 11018-12 | ||
| Goldstein Retractor | Fine Science Tools | FST 17003-03 | |
| Vannas Spring Scissors (ישר) | Fine Science Tools | FST 15018-10 | |
| SURGIFOAM ספוג ג'לטין נספג | Ethicon | 1972 | for bleeding control |
| microliter מזרק RN701 (10 μl)< | 80330 | ||
| Custom-made-Removable Needle (for DRG)< | 7803-05 | 33 מד, 38 מ"מ, סגנון נקודה 3 | |
| UltraMicroPump עם בקר SYS-Micro4 | World Precision Instruments | UMP3-1 |
