הכנת פלזמה עשירה בטסיות דם מדם היקפי אנושי

תקציר

סרטון זה מדגים את הכנת הפלזמה העשירה בטסיות (PRP) באיכות גבוהה על ידי בדיקת ספירת טסיות דם, איסוף וצנטריפוגה של דם ובידוד טסיות דם. PRP זה משמש ביישומים טיפוליים להתחדשות וריפוי רקמות.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים משתתפים אנושיים בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות, הלאומיות והבינלאומיות לרווחת האדם ונבדקו על ידי מועצת הביקורת המוסדית המקומית.

1. אוסף דגימות

1. {{}}סנן את המטופלים באמצעות ספירת דם ראשונית כדי לשלול טרומבוציטופניה ולקבוע ספירת תאים בסיסית. לשם כך, השתמש בהמוציטומטר בדרגה קלינית לספירת תאים. ודא שספירת הטסיות היא מעל 150,000 תאים/מיקרוליטר.

2. ודא שהמטופל נוזל הרבה לפני איסוף הדגימה. ניתן להבטיח זאת על ידי בדיקה ויזואלית של הלשון, טורגור העור ומדידת לחץ הדם.

3. אסוף 100 מ"ל של דם ורידי היקפי מהווריד הקדמי-קוטביטלי של המטופל באמצעות 2 x 50 מ"ל מזרקים מלאים ב-5 מ"ל של נוגד קרישה חומצה-ציטראט-דקסטרוז-אדנין (ACDA) ביחס של 1:10. הטה את המזרקים שנאספו לערבוב נכון של נוגד הקרישה כדי למנוע קרישה של דגימת הדם לפני שתמשיך לשלב הבא.
   הערה: שאיבת דם איטית עלולה לגרום לערבוב לקוי של הדם שנאסף עם נוגד הקרישה והקרישה; לפיכך, השתמש בצינורית מינימום 18G לאיסוף דם.

4. העבירו 100 מ"ל דם במזרקים לצינורות צנטריפוגה תחתונים חרוטיים של 15 מ"ל עם 10 מ"ל בכל צינור.

2. צנטריפוגה ובידוד

1. {{}}הנח את צינורות הצנטריפוגה במכונת צנטריפוגה שולחנית ברמה קלינית המתוחזקת בטמפרטורת החדר בסביבה סטרילית והפעל את הסיבוב הרך הראשוני במהירות של 100 x g למשך 15 דקות. הדם נוגד הקרישה מתחלק לשלוש שכבות, כלומר תאי דם אדומים בתחתית, פלזמה בחלק העליון ומעיל באפי באמצע.

2. פיפטה את השכבה העליונה של הדגימה התלת-שכבתית בצורה סטרילית באמצעות מחט עמוד שדרה סטרילית 18G ואוספת אותה בצינור צנטריפוגה תחתון חרוטי נפרד. הקפידו על צינורות בודדים לכל 10 מ"ל פלזמה שנאספה.
   הערה: ההחלטה לכלול את מעיל הבאפי תלויה באופי הפלזמה העשירה בטסיות שאנו מנסים לבודד, אשר בתורו תלוי באופי היישום הקליני שלה. אם PRP דל לויקוציטים הוא המוצר הרצוי, הימנע מלכלול את שכבת הפרווה של האפי, בעוד שאם PRP עשיר בלויקוציטים הוא המוצר הרצוי, אז שכבת הפלזמה העליונה יחד עם שכבת הבאפי מוזרמת החוצה לסבב הצנטריפוגה השני.

3. הכניסו את הפלזמה שנאספה בצינורות צנטריפוגה של 15 מ"ל עם 10 מ"ל פלזמה כל אחד לצנטריפוגה ספין קשה ב-1600 x g למשך 20 דקות. טסיות הדם הקיימות בכדור הפלזמה בתחתית המבחנה. אוספים את הסופרנטנט בשפופרת נפרדת.

4. הכניסו את כדור הטסיות למזרק של 5 מ"ל בעזרת מחט עמוד שדרה סטרילית 18 גרם. אוספים את כל המבחנות עם הכדורים למזרק יחיד של 5 מ"ל ליישום.

5. הרכיבו מחדש את הגלולה שנאספה בנפחים מספיקים לשימוש קליני עם הפלזמה הסופרנטנטית בצינור הצנטריפוגה לאחר סבב הצנטריפוגה השני.

3. אימות

1. הכניסו את ה-PRP הסופי שהוכן לספירת תאים באמצעות המציטומטר בדרגה קלינית כדי לחשב את ספירת הטסיות ולחשב את ספירת הטסיות המוחלטת ב-PRP, שיפוע ריכוז הטסיות שהושג על פני קו הבסיס, ויעילות התאוששות הטסיות של הפרוטוקול באמצעות הנוסחה הבאה.
   ספירת טסיות מוחלטת = ספירת טסיות הדם של ה-PRP ב-μL x 1000 x נפח ה-PRP במ"ל
   שיפוע ריכוז טסיות הדם =
   יעילות התאוששות טסיות =
   לדוגמה, 100 מ"ל דם עם ספירת טסיות בסיס של 200,000 / מיקרוליטר משמשים להכנת PRP, ומתקבל 5 מ"ל PRP עם ספירת טסיות סופית של 3,000,000 / מיקרוליטר. הפרמטרים שהוזכרו לעיל מחושבים באופן הבא:
   ספירת טסיות מוחלטת = 3,000,000 x 1000 x 5 = 15 מיליארד טסיות דם
   {{}}

   
   יעילות התאוששות טסיות = 3,000,000 x 1000 x 5 / 200,000 x 1000 x 100 = 75%{{}}

2. להבטיח את יעילות השחזור של הפרוטוקול באמצעות מחזורים חוזרים ונשנים. שימוש יעיל בפרוטוקול מספק שיפוע ריכוז מעל פי 5 מקו הבסיס עם יעילות התאוששות של >80%. בהתבסס על השימוש הרצוי בנפח ה-PRP, ניתן לטטר את ספירת הטסיות שיש לספק בהתאם.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
נוגד קרישה Citrate Dextrose Solution IP	Fresenius Kabi, India	ACDAIP/L/A/19/00
BD Quincke Needle	Becton Dickinson, Spain	405125	18G
DISPOVAN מזרק 50 מ"ל	Hindustan מזרקים ומכשירים רפואיים בע"מ, הודו
DISPOVAN מזרק 5 מ"ל	Hindustan מזרקים ומכשירים רפואיים בע"מ, הודו
Spinwin צינור תחתון חרוטי	Tarsons, הודו	546021
Sysmex XN-350	Sysmex Inc., ארה"ב	XN 350
מכונת צנטריפוגה קלינית שולחנית	REMI, הודו	R-8C	4x4 מתנדנד היטב החוצה רוטור