Method Article

ניתוח מבני עמילואיד במקטע רקמה באמצעות מיקרוסקופ הדמיה פלואורסצנטי לכל החיים

April 28th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Nyström, S., et al., הדמיית רקמות עמילואיד מוכתמות באוליגותיופנים מצומדים זוהרים על ידי מיקרוסקופיה קונפוקלית היפרספקטרלית והדמיה פלואורסצנטית לכל החיים. J. Vis. Exp. (2017).

סרטון זה מדגים ניתוח מבני עמילואיד עם מיקרוסקופ הדמיה פלואורסצנטי או FLIM, תוך שימוש בצבע hFTAA כדי לחשוף ליבות קומפקטיות ככחול/ירוק והיקפי לא יציב כמו אדום/צהוב בתמונות מקודדות צבע, המשקפות את ארגון העמילואיד.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הכנת דגימות רקמה

הערה: ניתן לדמות סוגי רקמות רבים באמצעות חומצה אצטית הפטאמר-פורמיל תיופן (hFTAA) כסמן עמילואיד. hFTAA רגיש לקונפורמציה מצטברת. לכן רצוי לבצע את הצביעה על אגרגטים ללא הפרעה ללא חשיפה לאפיטופים. איכות ספקטרלית אופטימלית מושגת אם קיבוע הרקמות נשמר למינימום. לפיכך, עדיף חומר קפוא טרי, קבוע בעדינות באתנול בזמן הצביעה. עם זאת, ניתן לזהות משקעי עמילואיד גם ברקמה שתוקנה עם למשל , פורמלין. hFTAA בדרך כלל חודר היטב לרקמה. בחר עובי דגימה התואם לטכניקת ההדמיה המיועדת.

    <....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
hFTAA/Amytracker545Ebba Biotech
מדיום הרכבה פלואורסצנטי של דאקוטכנולוגיות זריזותGM304,
LeicaDM6000Leica, ,
לומן 200 קודם
מערכת ספקטרוויו מפרט ASI הדמיה טרלית
}תוכנת ספקטרוויו הדמיה ספקטרלית של ASI & #160;
LSM780Zeiss
} Zen 2010b v6.0 תוכנהZeiss
מערכת FLIM} בקר והיקל
Ar/ML 458/488/514Zeiss
לייזר מתכוונן בכוונוןZeiss}
}}{{TAG_ 38}}{{TAG_ 99}}

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Fluorescence Lifetime ImagingAmyloid StructureshFTAA DyeConfocal MicroscopyTissue SectionBeta Sheet StructuresFluorescence LifetimeColor Coded ImagesCompact CoresUnstable Peripheries

Related Articles