} סרטון זה מדגים את ההליך להטמעת המוח }{{}}} במטריצת פיברין, ואחריו הדמיה פלואורסצנטית בהילוך מהיר של תאי עצב בשעון הביולוגי כדי לנתח פעילות קצבית המסונכרנת עם מחזורי אור/חושך.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הטמעת מוח דרוזופילה במטריצה להדמיית זמן-lapse של נוירוני השעון הביולוגי
712 צפיות
⸱
29 במאי 2025
במאמר זה
תקציר
פרוטוקול
- הטמעה של צמחי מוח במטריצה תלת מימדית והרכבה (~20 דקות).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| KH2PO4 | סיגמא-אולדריץ' | אני לא בטוח שהם בדיוק אותם אלה שיש לנו במעבדה. בחרתי "מתאים לתרבית תאי חרקים" בכל פעם שזמין | |
| CaCl2 | C7902 | ||
| MgSO4.7H2O | 230391 | ||
| NaCl | S5886 | ||
| NaHCO3 | סיגמא-אולדריץ' | S5761 | |
| D-(+) Glucose< | |||
| Yeast extract | Sigma-Aldrich | Y1000 | |
| Insulin | |||
| Penicillin-Streptomycin | |||
| BIS-TRIS | Sigma-Aldrich | ||
| L-(−)-חומצה מאלית | M7397 | ||
| D-(+)-Trehalose dihydrate | T0167 | ||
| succinic acid | S9512 | ||
| חומצה פומרית | F8509 | ||
| α-Ketoglutaric acid | K1128 | ||
| non-heat-inactivated, סרום עגל עוברי (FCS) מיקופלזמה ווירוסים מוקרנים | 2-01F30-I | ||
| HEPES-KOH, pH 7.4 | |||
| KCl | |||
| NaH2PO4 | סיגמא-אולדריץ' | ||
| S7903 | |||
| fibrinogen מפלזמת בקר | אזהרה: מזיק בשאיפה, במגע עם העור ובמקרה של בליעה. מניפולציה תחת זרימה למינרית | ||
| Thrombin from bovine plasma | Sigma-Aldrich | T9549 | |
| PDF, NH2-NSELINSLLSLPKNMNDA-OH | Chi Scientific | ||
| Vaccum grease | Sigma-Aldrich | 18405 | |
| 35 מ"מ צלחת, כיסוי מס' 1.5, קוטר זכוכית 20 מ"מ, לא מצופה | MatTek | P35G-1.5-20-C | |
| Corning Falcon Easy-Grip Tissue Culture Girls | |||
| סטרילי 500 מ"ל Steritop-GP 33 מ"מ מסנן עליון של בקבוק הברגה, 0.22 מיקרומטר | |||
| סרט Polytetrafluoroethylene (PTFE) | Dupont | 200A טפלון FEP Film | |
| Millex-HV יחידת מסנן מזרק, 0.45 מיקרומטר, PVDF, 33 מ"מ, גמא מעוקרת | |||
| millex-GV Filter Unit, 0.22 מיקרומטר, PVDF, 33 מ"מ, גמא מעוקרת | |||
| צלחת חיתוך זכוכית עם שלוש בארות | |||
| מלקחיים עדינים, גודל 5, Dumont | כלים מדעיים עדינים | 11254-20 | |
| סורק טנדם הפוך TCS SP5 מיקרוסקופ קונפוקלי, עם סורק תהודה וגלאי מכפיל צילום HyD | Leica microsystem CMS GmbH | ||
| תא בקרת טמפרטורה | Life Imaging Services | מערכת בקרת הטמפרטורה CUBE & BOX, מעוצבת בהתאמה אישית | |
| בקר לחות במה עליונה | מותאם אישית | ||
| Water Immersion Micro Dispenser: מתקן, סדרת מיקרו-משאבה מורחבת MP6 ותוכנת בקר אובייקטיבי של טבילה אוטומטית | Leica microsystem CMS GmbH | ||
| תוסף סחיפה ליצירת מחסנית SUM ותיקון תלת-ממד | |||
| 10x deconvolution איטרטיבי | AutoQuant ו-Imaris software |
תגיות
