$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.
1. הכנה לדוגמה לסריקות מיקרו-טומוגרפיה ממוחשבת (CT)
- המתת חסד של גורי יילודים ב-P8 באמצעות חנק פחמן דו חמצני.
- בצע זלוף תוך לב על ידי החדרת מחט בגודל 29 עם 3 מ"ל של 2% פרפורמלדהיד בתמיסת מלח פוספט (PBS) במזרק של 10 מ"ל לחדר לב העכבר.
זהירות: פרפורמלדהיד רעיל; ללבוש הגנה מתאימה. - נתק את הראש מהגוף בעזרת מספריים. הסירו את כל העור מהראש בעזרת מספריים וקילפו את הגולגולת בעזרת מלקחיים כדי לנתח את כל המוח.
- צלם תמונות של המוח עם סטריאומיקרוסקופ בהגדלה של פי 7.82, רווח פי 1, גמא של 0.6 וזמן חשיפה של 20 אלפיות השנייה.
- תקן את המוחות המנותחים עם 4% פרפורמלדהיד בתמיסת PBS למשך הלילה.
זהירות: פרפורמלדהיד רעיל; ללבוש הגנה מתאימה. - למחרת, נתק את המוח האחורי באמצעות מלקחיים ושטוף עם תמיסת PBS.
- דגרו את המוח האחורי בתמיסת היוד של לוגול למשך 48 שעות.
- לאחר הדגירה, יבשו לזמן קצר את המוח האחורי באוויר כדי להסיר עודפי תמיסת היוד של לוגול.
- ארזו את המוח האחורי המוכתם ביוד של לוגול בצינורות מיקרו-צנטריפוגה של 0.65 מ"ל ואטמו לחלוטין עם סרט פרפין מפלסטיק כדי למנוע התכווצות רקמות ( איור 1A).
- הניחו צינורות מיקרו-צנטריפוגות בצינורות פלסטיק של 5 מ"ל עם ספוגים כדי למנוע מהם לזוז במהלך הסריקה ( איור 1B).
2. סריקת מיקרו-CT של מומים מוחיים במערות (CCM) במוח העכבר
- הרכיבו אנכית את המוח האחורי הארוז בצינור על מחזיק אלומיניום במערכת המיקרו-CT.
- הגדר את פרמטרי הסריקה ל-540 הקרנות וזמן חשיפה של 2 שניות עם תנאי מקור של 50 קילו וולט ו-10 וואט כדי לרכוש את מערכי הנתונים הטומוגרפיים (רזולוציית תמונה 9.5 מיקרומטר/פיקסל).
- צילומי רנטגן מהסריקה משוחזרים באופן אוטומטי על ידי תוכנת שחזור הקרנה מבוססת חומרה המסופקת על ידי מערכת המיקרו-CT, ומייצרת סדרת תמונות של פרוסות ציריות של 16 סיביות (קובץ "TXM").
3. ניתוח מערכי נתונים של מיקרו-CT
- פתח את קובץ התמונה המשוחזר (קובץ "TXM") בתוכנת הניתוח התלת-ממדי ודמיין את המוח באמצעות פונקציית "עיבוד עוצמת הקול".
- הפוך את המוח האחורי לכיוון הרצוי באמצעות פונקציות "התיבה התוחמת" ו"מישור הגזירה".
- דגמו מחדש את התמונה שהשתנתה במצב מורחב ושמרו על גודל הווקסל.
- צור "ערוך שדה תווית חדש" בתמונה שהשתנתה (3.3) והדגש רק את המוח האחורי באמצעות עוצמת גווני אפור.
- הוסיפו את האזורים המודגשים והריצו "ניתוח תוויות" כדי לקבל מדידות של כל המוח האחורי (, כלומר , נפח ושטח כולל). ייצוא מדידות בקובץ Excel.
- דמיין את המוח האחורי באמצעות פונקציית "עיבוד איזופני שטח".
- צור "ערוך שדה תווית חדש" נוסף בתמונה שהשתנתה והדגש אזורים עם נגעים באמצעות עוצמת גווני אפור.
- הוסף את האזורים המודגשים והפעל ניתוח "תווית" כדי לקבל מדידות של הנגעים בתוך המוח האחורי ( כלומר , נפח ושטח כולל). ייצוא מדידות בקובץ Excel.
- דמיין את הנגעים באמצעות הפונקציות "יצירת משטח" ו"תצוגת פני השטח".
- צלם את תמונות המוח האחורי בכיוונים הרצויים או צור סרט להדמיה תלת מימדית של הנגעים.
