הדמיית ביולומינסנציה במודל עכבר EAE

תקציר

מקור: Schmitz, K., et al., bioluminescence והדמיה קרובה לאינפרא אדום של דלקת עצב הראייה ודלקת מוחית במודל EAE של טרשת נפוצה בעכברים. J. Vis. Exp. (2017).

סרטון זה מדגים את השיטה להמחשה וניטור של דלקת מוח אוטואימונית ניסיונית או דלקת הנגרמת על ידי EAE בעצב הראייה באמצעות הדמיית ביולומינסנציה. זה כולל מיקום העכבר, הזרקת ריאגנטים ולכידת תמונות עוקבות כדי לנטר שינויים בביולומינסנציה לאורך זמן.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הדמיה ביולומינסנט של דלקת עצב הראייה ודלקת במוח

1. הגדרת מערכת ההדמיה
   1. לבצע הדמיה in vivo עם כל ציוד המאפשר ניתוח של אותות ביולומינסנציה ואינפרא אדום קרוב.
   2. שמור על עכברים מתחת ל-2 - 2.5% הרדמה איזופלורן במהלך כל הליכי ההדמיה.
   3. מקם עכבר אחד או שניים זה לצד זה במנגנון באמצעות אספקת הגז האמצעית. מקם את עמוד השדרה העליון במרכז.
   4. כדי להעריך את השפעות התרופות, השווה זוגות עכברים המשתמשים בשני עכברים בו זמנית, אחד לכל קבוצה. זה חשוב להדמיה ביולוגית.
   5. הגן על אתר החיסון בבד שחור וצלם תמונה ותמונת בסיס כדי להעריך את המיקום הנכון של העכבר/עכברים. עבור כל התמונות, השתמש במיקוד B במרחק של 6.5 ס"מ מהמצלמה.
2. הזרקה והדמיה של בדיקת דלקת ביולומינסנט
   1. השתמש בהגדרות מערכת ההדמיה in vivo}: Epi-BLI, מסנן Em פתוח, בלוק מסנן Ex, fstop 1, binning 8, פוקוס B = 6.5 ס"מ, חשיפה למודעה 120 שניות; צלם תמונת בסיס.
   2. הזרקת 100 מיקרוליטר i.p. של המגיב הכימילומינסנט המוכן לשימוש (40 מ"ג/מ"ל). מערבבים היטב לפני מילוי המזרק.
   3. צלם תמונות ביולומינסנציה 5, 10 ו-15 דקות לאחר ההזרקה. מהלך הזמן של שיא האור הביולוגי שונה בין בעלי חיים.
      הערה: השיא יתרחש 5 - 10 דקות לאחר ההזרקה; ירידה של 15 דקות מצביעה על כך שאין צורך בתמונות נוספות. השתמש בזוגות עכברים של קבוצות בקרה וטיפול כדי למנוע הטיות קלות עקב מסלולי זמן שונים.
   4. מלא תיאורים רלוונטיים לניסוי. שימו לב שתיבת דו-שיח נפתחת אוטומטית; הוא כולל מידע, כגון מאמץ עכבר, מין, נקודת זמן, זמן הזרקת הגשושית, קבוצה, וכו'. שמור את כל הקבצים בתיקיה אחת; יהיו להם תגי זמן וכל התיאורים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
XenoLight RediJect Inflammation Probe	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA	760535	בדיקת הדמיה, הניתנת להפעלה על ידי אוקסידאזות, שימושית להדמיית דלקת
PLP139-151/CFA emulsion	Hooke Labs, St Lawrence, MA	EK-0123	EAE ערכת אינדוקציה
IVIS Lumina Spectrum	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA		Bioluminescence and Infrared Imaging System
תוכנת LivingImage 4.5	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA	CLS136334	IVIS תוכנת ניתוח
Isoflurane	מעבדות אבוט, אילינוי, ארה"ב	26675-46-7	הרדמה