Method Article

תא כותרת Encapsulation על ידי טיפות

DOI:

10.3791/316

⸱

October 1st, 2007

 ,  ,  ,  , 
1Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's, Harvard Medical School, 2Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's Hospital, 3Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 4Harvard-MIT Division of Health Sciences and Technology, Massachusetts Institute of Technology; Center for Biomedical Engineering, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital

In This Article

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH3T3 תאים הכנה:

א תאים לניתוק

  1. Trypsinize תאים, ואז לדלל 1:01 עם התקשורת התא, ולהעביר מבקבוקון T75 כדי צינור פלקון 15 מ"ל
  2. ספין למטה תאים לתוך גלולה ידי centrifuging, לשאוב supernatant ולשטוף תאים עם DPBS
  3. ספין למטה תאים לתוך גלולה שוב, לשאוב supernatant
  4. תאים Resuspend בתקשורת
  5. קביעת צפיפות התאים עם hemocytometer (~ 200 X 10 4 תאים / מ"ל לכל בקבוק T75)
  6. תא פתרון צנטריפוגה, לשאוב supernatant ו resuspend בסכום המתאים של מדיה עבור ריכוזים שונים בתא

ב פליטה נייד

  1. וורטקס תאים לפני השימוש לניתוק
  2. העברת 200 μL של פתרון התא לתוך מזרק
  3. הגדרת מצב המתאים על הדופק גנרטור
    1. עבור טיפות יחיד ולהוציא ו טיפות מרובות (התפרצויות), להגדיר גנרטור הדופק למצב "א Bur"
    2. עבור פליטה אגל רציפה, קבע גנרטור הדופק למצב "נורמה"
  4. שינוי הגדרות אות
    1. סט ברמה גבוהה מתח נמוך התפוקה ברמה: HIL ל V 5 ו LOL ל V 0 וודא "לים" דולקת
    2. קביעת אות כמו דופק מרובע
    3. שינוי משך הזמן שסתום סולנואיד פתוח פליטה אגל ידי שינוי הערך עבור "ויד" או שינוי מחזור ("חובה")
    4. שינוי התדירות של פליטה ידי שינוי הערך עבור "PER"
    5. שינוי מספר טיפות נפלט בפרץ ידי שינוי הערך עבור "Bur"
  5. תא פתרון הוצא על מצע מוכן דימות באמצעות מיקרוסקופ

ג מכתים

  1. להמציא פתרון לצבוע עם 0.5 μL calcein-AM ו 2 μL homodimer ethidium לכל מ"ל של DPBS
  2. המצע מוכן לטבול בתמיסה צבע
  3. אפשר המדגם כדי לדגור במשך 10 דקות ב 37 מעלות צלזיוס לפני הדמיה

ניסוי אימות

  1. ביום מיקרוסקופ Eclipse Nikon U TE-2000 פלורסנט
    1. ספוט תוכנה מתקדמים (Diagnostics, Inc)
    2. חי / מת Assay

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
פלואורסצנטיNikon InstrumentsEclipse TE-2000 U
מפלטתדר פעולה: 1 KHz, 30psi, 50nl ~ 0.5ul. נהג שסתום 12V: 2.5 אמפר זרם כונן
5 ליטר מיכלקולמןPowermate CT5אוויר בלחץ: 30 PSI
ווסתימארש בלופרם
מחוללHP8112Aייצור תדר הפעלה: 50 מגה-הרץ
XYZ-stageמערכותעם מנוע צעד: 6 אינץ' נסיעה xy-stage (NLS4-6-25), 2.5 אינץ' z-stage נסיעה (NLS4-2.5-25), בקר 3 צירים (NSC-G3), רזולוציית 0.1um
NIH 3T3פיברובלסטיםתאים
טריפסיןתמיסה של 0.05%
NIH 3T3 מדיום
תאים DPBSBuffer
T75צלוחיות תרבית רקמות
צינורות חרוטיים15 מ"ל, לתרבית רקמות
מיקרוסקופ תא שסתום סולנואיד אוויר נייד לחץ דופק Newmark בקו מפלסטיק

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell EncapsulationDroplet PrintingCell PrintingSolenoid ValveMotorized StageCell DensityHemocytometerLive Dead AssayCalcium AMEthidium Homodimer

Related Articles