תא כותרת Encapsulation על ידי טיפות

פרוטוקול

NIH3T3 תאים הכנה:

א תאים לניתוק

1. Trypsinize תאים, ואז לדלל 1:01 עם התקשורת התא, ולהעביר מבקבוקון T75 כדי צינור פלקון 15 מ"ל
2. ספין למטה תאים לתוך גלולה ידי centrifuging, לשאוב supernatant ולשטוף תאים עם DPBS
3. ספין למטה תאים לתוך גלולה שוב, לשאוב supernatant
4. תאים Resuspend בתקשורת
5. קביעת צפיפות התאים עם hemocytometer (~ 200 X 10 ⁴ תאים / מ"ל לכל בקבוק T75)
6. תא פתרון צנטריפוגה, לשאוב supernatant ו resuspend בסכום המתאים של מדיה עבור ריכוזים שונים בתא

ב פליטה נייד

1. וורטקס תאים לפני השימוש לניתוק
2. העברת 200 μL של פתרון התא לתוך מזרק
3. הגדרת מצב המתאים על הדופק גנרטור
   1. עבור טיפות יחיד ולהוציא ו טיפות מרובות (התפרצויות), להגדיר גנרטור הדופק למצב "א Bur"
   2. עבור פליטה אגל רציפה, קבע גנרטור הדופק למצב "נורמה"
4. שינוי הגדרות אות
   1. סט ברמה גבוהה מתח נמוך התפוקה ברמה: HIL ל V 5 ו LOL ל V 0 וודא "לים" דולקת
   2. קביעת אות כמו דופק מרובע
   3. שינוי משך הזמן שסתום סולנואיד פתוח פליטה אגל ידי שינוי הערך עבור "ויד" או שינוי מחזור ("חובה")
   4. שינוי התדירות של פליטה ידי שינוי הערך עבור "PER"
   5. שינוי מספר טיפות נפלט בפרץ ידי שינוי הערך עבור "Bur"
5. תא פתרון הוצא על מצע מוכן דימות באמצעות מיקרוסקופ

ג מכתים

1. להמציא פתרון לצבוע עם 0.5 μL calcein-AM ו 2 μL homodimer ethidium לכל מ"ל של DPBS
2. המצע מוכן לטבול בתמיסה צבע
3. אפשר המדגם כדי לדגור במשך 10 דקות ב 37 מעלות צלזיוס לפני הדמיה

ניסוי אימות

1. ביום מיקרוסקופ Eclipse Nikon U TE-2000 פלורסנט
   1. ספוט תוכנה מתקדמים (Diagnostics, Inc)
   2. חי / מת Assay

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מיקרוסקופ פלואורסצנטי		Nikon Instruments	Eclipse TE-2000 U
מזרק תאים בעל שסתום סולנואיד				תדר פעולה: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. דרייבר שסתום 12V: זרם הנעה 2.5 Amp
מיכל אוויר נייד של 5 גאלון		Coleman	Powermate CT5	אוויר דחוס: 30 PSI
ווסתי לחץ		Marsh Bellofram
מחולל פולסים			HP8112A	יצירת תדר הפעלה: 50 MHz
במת XYZ		Newmark Systems		עם מנוע פסיעות: במת xy בטווח תנועה של 6inch (NLS4-6-25), במת z בטווח תנועה של 2.5inch (NLS4-2.5-25), בקר 3 צירים (NSC-G3), רזולוציה של 0.1um
NIH 3T3	קו תאים			פיברובלסטים
טריפסין				תמיסה בריכוז 0.05%
מצע גידול לתאי NIH 3T3
DPBS	בופר
T75				בקבוקי תרבית רקמה
מבחנות פלסטיק קוניות				15 ml, לתרבית רקמה