ניטור ביטוי גנים בזמן אמת בפרוסות מוח באמצעות הדמיה תלת מימדית

תקציר

מקור: Shimojo, H., et al. הדמיה ביולומינסנציה בזמן אמת של דינמיקת איתות חריץ במהלך נוירוגנזה של עכברים. J. Vis. Exp. (2019)

בסרטון זה, תרביות פרוסות קליפת המוח מעוברי עכברים טרנסגניים משמשות לניטור ביטוי גנים באמצעות הדמיה תלת מימדית. תמונות ביולומינסנציה, פלואורסצנטיות ושדה בהיר משמשות להמחשת ביטוי גנים בזמן אמת במהלך התמיינות עצבית בתוך הרקמה הטבעית.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים דגימות של בעלי חיים נבדקו ואושרו על ידי ועדת הביקורת האתית המתאימה לבעלי חיים.

1. הדמיה של ביטוי מדווח לוציפראז בתרביות פרוסות
   1. התחל את מערכת ההדמיה החיה של הלומינסנציה לפני תחילת הדיסקציה. השתמש בתנאים הבאים עבור תרביות פרוסות קליפת המוח: 40% O₂, 5% CO₂ ו-37 מעלות צלזיוס.
   2. שים את שמן הטבילה על עדשת האובייקט פי 40. שים את צלחת הדגימה על במת המיקרוסקופ. רכוש את תמונת הבדיקה הפלואורסצנטית והגדר את המיקום ומישור המיקוד לאזור העניין תחת הארת אור עירור.
   3. הריצו את רכישת דולג הזמן על ידי רכישות תלת-ממדיות (זוהר, פלואורסצנטי ושדה בהיר) למשך 24 שעות (איור 1F-H). לרכישת תמונות זוהר, השתמש בהגדרות המצלמה הבאות: קצב העברה נמוך (50 קילו-הרץ), שילוב של 2x2/4x4, זמן חשיפה של 10 דקות/5 דקות. עבור רכישת תמונות הקרינה והשדה הבהיר, השתמש בהגדרות הבאות: קצב העברה ביניים (1 מגה-הרץ), שילוב של 1x1 וזמן חשיפה של 100 אלפיות השנייה.

תוצאות

איור 1: יצירת הפרוסות בקליפת המוח של הטלנצפלון העוברי והדמיה של דינמיקת חלבון Dll1 בתרביות הפרוסות בקליפת המוח. (A) בדיקת הביטוי של EGFP באמצעות מיקרוסקופ סטריאוסקופי פלואורסצנטי. החץ האדום מראה את האזור בקליפת המוח שמבטא EGFP (חלבון פלואורסצ...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
סירקולטור מים צוננים (chiller)	Julabo	דגם:
מצלמת CCD מקוררת	וטכנולוגיה	דגם: iKon-M 934
מערכת חממה	TOKAI HIT	דגם: INU-ONICS
מיקרוסקופ הפוך	אולימפוס	דגם: IX81
מיקרוסקופ הפוך	אולימפוס	דגם: IX83
מכשיר תאורת LED	CoolLED	דגם: pE1
MetaMorph	מכשירים מולקולריים	דגם: 40000
בקר גז מיקס	טוקן	דגם: TK-MIGM OLO2
עדשת אובייקטיבית	אולימפוס	דגם: UPLFLN 40X O

F12-ED