העברת חומרים ממוקדים למוח העכבר באמצעות עירוי לעורק הצוואר הפנימי

תקציר

מקור: Leda, A. R., et al. טכניקת עירוי מיקרו-כירורגיה של עכבר להעברת חומרים ממוקדים למערכת העצבים המרכזית דרך עורק הצוואר הפנימי. J. Vis. Exp. (2017)

סרטון זה מדגים הליך מיקרו-כירורגי שנועד להקל על עירוי ממוקד של חומר בדיקה למוח דרך עורק הצוואר הפנימי (ICA). ההליך כולל תפירה מדויקת ומניפולציה של כלי הדם כדי להגביל זמנית את זרימת הדם, מה שמבטיח אספקה מבוקרת. צינור נימי מוחדר לעורק הצוואר החיצוני (ECA) ומתקדם לכיוון ההתפצלות. עם העירוי, החומר עוקף את זרימת הדם המערכתית, חוצה את מחסום הדם-מוח ומשיג אספקה ממוקדת לפרנכימה המוחית.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הכנת עכברים לניתוח

1. עכבר מרדים עם איזופלורן מעורבב עם חמצן, באמצעות מערכת הרדמה מעבדתית. השתמש באיזופלורן בהגדרה בין 4-5% וזרימת חמצן ב-2 ליטר לדקה במכונה המסחרית (ראה טבלת חומרים). העבירו את בעל החיים למשטח הניתוח, תחת סטריאומיקרוסקופ, והמשיכו בהרדמה באמצעות חרוט אף (השתמשו בהגדרת איזופלורן 1.5 - 2.5 וזרימת חמצן ב-2 ליטר לדקה).
   1. ודא שקצב הנשימה של העכבר הוא בסביבות 1-2 נשימה לשנייה מבלי להתנשף. בנוסף, ודא שהחיה אינה מציגה תגובת גירוי שפם ורפלקס דוושה (צביטת בוהן). עקוב אחר קצב הנשימה והמאמץ במהלך הניתוח, לפחות כל 5 דקות. עקוב אחר ההנחיות הספציפיות של הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים והנחיות וטרינריות לניטור הרדמת מכרסמים.
2. יש למרוח טיפה של חומר סיכה עיניים על כל עין באמצעות מטוש סטרילי על מנת למנוע יובש. מומלץ לתת נוגדי דלקת ומשככי כאבים כדי להקל על אי הנוחות.
3. כשבעל החיים שוכב על גבו, שמור על הרדמה באמצעות חרוט אף.
4. נקו את אזור הצוואר של החיה על ידי ניגוב האזור שלוש פעמים עם אתנול 70% וכלורהקסידין. לגלח את אזור הניתוח של בעל החיים באמצעות סכין גילוח (מפורט בהמשך).

2. דיסקציה של עורק הצוואר המשותף (CCA)

1. בצע את כל הליך המיקרו-כירורגיה תחת סטריאומיקרוסקופ. בעזרת מספריים ומלקחיים כירורגיים מבצעים חתך רדוד בקו האמצע בצוואר, מעל עצם החזה ועד מתחת ללסת (כ-3 עד 4 ס"מ).
2. בעזרת מלקחיים יש להפריד בזהירות רקמת שומן ורקמת חיבור כדי לחשוף את קנה הנשימה.
3. הניחו כרית (חפץ עגול, בקוטר של כ-0.5 ס"מ) על גב צוואר העכבר כדי להאריך את הצוואר, ולחשוף עוד יותר את האזור.
4. הפרד את הרקמה באמצעות מפסק רקמות או ווים.
5. בצד שמאל של קנה הנשימה של החיה, יש להפריד בזהירות את רקמת החיבור כדי לחשוף את ה-CCA השמאלי.
6. בעזרת מלקחיים הסר בזהירות את כל רקמת החיבור כדי לחשוף את התפצלות ה-CCA, ואת תחילתם של עורקי הצוואר החיצוניים והפנימיים כאחד.

3. הכנת ה-CCA לעירוי חומרים

1. הכנס שני מקטעים של תפר ניילון (כ-1 ס"מ כל אחד) מתחת לעורק הצוואר החיצוני (ECA), באמצעות מלקחיים.
2. הנח קשר קבוע בנקודה הגבוהה ביותר האפשרית של ה-ECA.
3. בנקודה הנמוכה ביותר האפשרית של ה-ECA, מיד מעל התפצלות ה-CCA, הנח קשר נשלף. קשר זה צריך להיות רופף בהשוואה לקשר העליון.
4. סגור את ה-CCA באמצעות קליפ כלי, בנקודה הנמוכה ביותר האפשרית.
5. סגור את עורק הצוואר הפנימי (ICA) באמצעות קליפ כלי דם.
6. בעזרת מספריים קפיציים של מיקרו-דיסקציה בצע חתך קטן ב- ECA (כ -2 מ"מ), בין שני הקשרים.

4. עירוי חומרים באמצעות ICA

1. הרכיבו מערכת עירוי. חבר 6 אינץ' של צינורות נימיים (מידות אידיאליות: 2.5 מ"מ על 1.2 מ"מ) למזרק טוברקולין המכיל 250 מיקרוליטר מהחומר שיש להחדיר (תרופות, פתוגנים, שלפוחיות חוץ-תאיות, בין היתר) והכנס את קצה הנימים בעדינות לתוך החתך שבוצע בשלב 3.6.
2. המשיכו להחליק במורד הנימים עד שהוא מגיע לנקודת אמצע בין ההסתעפות לקליפ הסוגר את ה-CCA.
3. קשרו את קשר ה-ECA התחתון. ודא שהקשר רופף מספיק כדי לאפשר נזילות נימית והדוק מספיק כדי למנוע דליפה.
4. הסר את הקליפ מה-ICA.
5. הפעל בעדינות לחץ על בוכנת המזרק המאפשר עירוי חומר במהירות של כ-10 מיקרוליטר לשנייה.

5. הליכים לאחר עירוי

1. הנח את הקליפ בחזרה על ה-ICA.
2. הסר בעדינות את הצינור הנימים.
3. קשרו את קשר ה-ECA התחתון לחלוטין.
4. הסר קליפסים מה-ICA ומה-CCA.

6. סגירת חתך וטיפול לאחר הניתוח

1. הסר את המחזיר או את ווי הרקמה והכרית.
2. נקה את אזור התפרים באמצעות מי מלח סטריליים.
3. סגור את החתך באמצעות תפר ניילון/מחט ומלקחיים.
4. יש לתת נוגדי דלקת ומשכך כאבים כדי להקל על אי הנוחות לאחר הניתוח.
5. הנח את החיה בכלוב המונח על כרית חימום למשך שעה אחת לפחות ועקוב אחר ההתאוששות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מכשיר הרדמה	Vetequip	901806
מספריים כירורגיים	כלי מדע עדין	14558-09
מלקחיים כירורגיים קצה ישר	כלי מדע עדין	00108-11
מלקחיים כירורגיים קצה זוויתי	כלי מדע עדין	00109-11
מספריים קפיצים	כלי מדע עדין	15000-08
תפר ניילון	Braintree Scientific	SUT-S 104
צינורות נימיים (מיקרו-רנתן 0.010 אינץ' x 0.005 אינץ' לכל רגל)	Braintree Scientific	MRE01050
תפר סגירה	VWR	95057-036
Isoflurane	Piramal
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride	FisherScientific	50-121-8005