הדמיה ביולומינסנציה של מודל עכבר בעל יכולת חיסונית לגליובלסטומה

תקציר

מקור: Clark, A.J., et al. הדמיית ביולומינסנציה של מודל בעלי חיים בעלי יכולת חיסונית לגליובלסטומה. J. Vis. Exp. (2016)

סרטון זה מדגים הדמיית ביולומינסנציה כדי לעקוב אחר התקדמות גליובלסטומה במודל עכבר בעל יכולת חיסונית, תוך שימוש בתאי גידול המבטאים לוציפראז ולוציפרין כדי לכמת את צמיחת הגידול באופן לא פולשני.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הדמיה ביולומינסנציה של גידול GL261

1. ריסוס כמות נדיבה של חומר חיטוי (תמיסת 0.05% דימתיל אמוניום כלוריד) על מגבת נייר נקייה. השתמש במגבת הנייר הספוגה בחומר חיטוי כדי לנגב היטב את הסדין השחור, חרוטי האף והמחיצה בתוך תא ההדמיה שבו בעלי החיים יהיו במגע עם המכשיר. נגב היטב את כל המשטחים במגבת נייר נקייה ויבשה. חזור על כך פעם נוספת והמתן 5 דקות.
2. אתחל את תחנת ההדמיה.
3. להרדים את העכבר בתערובת של 300 מיקרוליטר המכילה 200 מיקרוליטר קטמין/קסילזין ו-100 מיקרוליטר לוציפרין (מלח אשלגן D-לוציפרין, 150 מ"ג/ק"ג) בהזרקה תוך-צפקית.
4. המתן 10 דקות לאחר ההזרקה ואשר אם העכברים נמצאים בהרדמה מלאה על ידי צביטת הזנב. כדי להגדיר את מערכת ההדמיה, בחר זמן חשיפה "זוהר", "אוטומטי" ו-binning "בינוני". הנח את העכברים על תחנת ההדמיה ולחץ על כפתור "רכוש" כדי להתחיל את התמונה. ודא שהזמן לאחר ההזרקה תואם לכל הפעלת הדמיה.
5. לאחר רכישת התמונה בהצלחה, אמור להופיע חלון תמונה ולוח כלים. לחץ על אזור העניין (ROI) או "כלי ROI" ובחר "אוטומטי" מסמל העיגול. כדי להגדיר החזר ROI, הקף את שטח האות בתמונה ולאחר מכן בצע מדידות של ה-ROI כיחידה של פוטונים/שנייה/sr/cm2.
6. הוציאו את העכברים מתא ההדמיה ועקבו אחריהם עד שהם הופכים לאמבולנטיים ושומרים על פעילות רגילה. בדרך כלל, זמן ההחלמה הוא כ-15 דקות. אין להחזיר את העכברים לכלוב עם בעלי חיים אחרים עד שהם מתאוששים לחלוטין מההרדמה.
7. עקוב אחר צמיחת הגידול על ידי הדמיה ביולומינסנציה פעמיים בשבוע עד שבעלי החיים מציגים את התסמינים הבאים: ירידה במשקל (ירידה של יותר מ-20% ביחס למשקל לפני ההשתלה), חוסר תיאבון (אנורקסיה מוחלטת למשך 24 שעות), והיעדר תגובה תכליתית מתמשכת לגירויים עדינים (ניסיון חלש לקום), ואז יש להמית אותם.
8. לנרמל את ערכי הזוהר עבור כל יום כנגד קריאות תואמות שהתקבלו ביום הראשון של הדמיית ביולומינסנציה (איור 1A).
9. לניתוח סטטיסטי, צור עקומות הישרדות באמצעות אומדן קפלן-מאייר והשווה את ההבדלים בין עקומות ההישרדות באמצעות מבחן לוג-דירוג.

תוצאות

איור 1. ביטוי לוציפראז אינו משפיע על צמיחת הגידול in vivo ועל הישרדות בעלי החיים. (A) ניטור ביולומינסנציה מדגים צמיחה מתקדמת של GL261 תוך גולגולתי. גידול לוק (תאי גליובלסטומה GL261 המבטאים לוציפראז) בעכברי C57BL/6. (B) ניתוח ההישרדות של קפלן-מאייר לא מראה...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
D-Luciferin, מלח אשלגן	זהב ביוטכנולוגיה	LUCK-100	אחסן הרחק מהאור
תוכנת תמונה חיה	קליפר מדעי החיים	צור קשר להצעת מחיר	אף אחד
קסנוגן לומינה	קליפר מדעי החיים	צור קשר להצעת מחיר	ללא
קטסט	פייזר	NDC 0856-2013-01	חומר בקרה
קסילזין	סיגמא-אולדריץ'	23076-35-9	ללא
מחט 28 גרם (עם מזרק)	פישר	22-004-270	AKA מזרק אינסולין
כרית חימום	Dunlap	HP950
PDI רפידות הכנה לאלכוהול	פישר	23-501-711