$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.
1. הדמיה ביולומינסנציה של גידול GL261
- ריסוס כמות נדיבה של חומר חיטוי (תמיסת 0.05% דימתיל אמוניום כלוריד) על מגבת נייר נקייה. השתמש במגבת הנייר הספוגה בחומר חיטוי כדי לנגב היטב את הסדין השחור, חרוטי האף והמחיצה בתוך תא ההדמיה שבו בעלי החיים יהיו במגע עם המכשיר. נגב היטב את כל המשטחים במגבת נייר נקייה ויבשה. חזור על כך פעם נוספת והמתן 5 דקות.
- אתחל את תחנת ההדמיה.
- להרדים את העכבר בתערובת של 300 מיקרוליטר המכילה 200 מיקרוליטר קטמין/קסילזין ו-100 מיקרוליטר לוציפרין (מלח אשלגן D-לוציפרין, 150 מ"ג/ק"ג) בהזרקה תוך-צפקית.
- המתן 10 דקות לאחר ההזרקה ואשר אם העכברים נמצאים בהרדמה מלאה על ידי צביטת הזנב. כדי להגדיר את מערכת ההדמיה, בחר זמן חשיפה "זוהר", "אוטומטי" ו-binning "בינוני". הנח את העכברים על תחנת ההדמיה ולחץ על כפתור "רכוש" כדי להתחיל את התמונה. ודא שהזמן לאחר ההזרקה תואם לכל הפעלת הדמיה.
- לאחר רכישת התמונה בהצלחה, אמור להופיע חלון תמונה ולוח כלים. לחץ על אזור העניין (ROI) או "כלי ROI" ובחר "אוטומטי" מסמל העיגול. כדי להגדיר החזר ROI, הקף את שטח האות בתמונה ולאחר מכן בצע מדידות של ה-ROI כיחידה של פוטונים/שנייה/sr/cm2.
- הוציאו את העכברים מתא ההדמיה ועקבו אחריהם עד שהם הופכים לאמבולנטיים ושומרים על פעילות רגילה. בדרך כלל, זמן ההחלמה הוא כ-15 דקות. אין להחזיר את העכברים לכלוב עם בעלי חיים אחרים עד שהם מתאוששים לחלוטין מההרדמה.
- עקוב אחר צמיחת הגידול על ידי הדמיה ביולומינסנציה פעמיים בשבוע עד שבעלי החיים מציגים את התסמינים הבאים: ירידה במשקל (ירידה של יותר מ-20% ביחס למשקל לפני ההשתלה), חוסר תיאבון (אנורקסיה מוחלטת למשך 24 שעות), והיעדר תגובה תכליתית מתמשכת לגירויים עדינים (ניסיון חלש לקום), ואז יש להמית אותם.
- לנרמל את ערכי הזוהר עבור כל יום כנגד קריאות תואמות שהתקבלו ביום הראשון של הדמיית ביולומינסנציה (איור 1A).
- לניתוח סטטיסטי, צור עקומות הישרדות באמצעות אומדן קפלן-מאייר והשווה את ההבדלים בין עקומות ההישרדות באמצעות מבחן לוג-דירוג.
