מתן תוך ורידי של וקטורים רקומביננטיים של וירוסים הקשורים לאדנו במודל חולדה

תקציר

מקור: Grames, M. S., et al. שיטות וטיפים למתן תוך ורידי של נגיף הקשור לאדנו לחולדות והערכת התמרה של מערכת העצבים המרכזית. J. Vis. Exp. (2017)

סרטון זה מדגים את הזרקת וריד הזנב של נגיף אדנו-קשור רקומביננטי (AAV) בחולדות. לאחר ההזרקה לווריד הזנב הרוחבי, הנגיף נכנס לזרם הדם, מסתובב דרך הלב ומגיע למוח, שם הוא נכנס לתאי עצב ומקל על ייצור חלבון מטרה ליישומים נוירותרפיים.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הכן את ה-rat

1. הפוך את החמצן עד 1 ליטר לדקה והגדר את הרדמת האיזופלורן ל-5%. ודא שהרדמת הגז זורמת לתא האינדוקציה על ידי בדיקת כל צינורות החיבור וכיווני תא העצירה.
2. הנח את החולדה בתא האינדוקציה של הרדמת גז למשך כ-3 דקות עד שהחולדה אינה מגיבה.
3. הקפידו על עומק הרדמה הולם על ידי צביטה של הבוהן. לא אמורה להיות תנועה בכף הרגל או ברגל לאחר צביטת הבוהן.
4. צמצם את הרדמת האיזופלורן ל-2% לצורך תחזוקה והתאם את תא העצירה כך שההרדמה תזרום למסכת ההרדמה.
5. הניחו את האף של החולדה במסכת ההרדמה והתאימו את החולדה כך שהיא תשכב על צדה.
6. זהה את וריד הזנב הצדדי.
   הערה: ורידי הזנב הצדדיים שוכנים בערך בשעה 10 ו-2, כאשר החלק העליון הגבי של הזנב נמצא בשעה 12. כשהחולדה שוכבת על צדה, וריד הזנב הצדדי צריך להיות פונה כלפי מעלה.
7. נגב את אזור ההזרקה עם כרית הכנת האלכוהול. אתר ההזרקה נמצא שני שליש לאורך הזנב.

2. הזריק את הווקטור

1. החזק בחוזקה את הזנב מעט מעל אזור ההזרקה באצבע אחת ישירות מעל וריד הזנב הרוחבי; זה ירחיב את הווריד.
2. כשהשיפוע פונה כלפי מעלה, יישר את המחט עם וריד הזנב הגלוי באותו כיוון.
3. יש לנקב את העור מעל וריד הזנב תוך הקפדה יתרה על הימנעות מהיד השנייה להחזיק את הזנב וללחוץ על וריד הזנב.
4. שחרר לחץ מווריד הזנב כדי לאפשר זרימת דם תקינה.
5. העבירו את המחט לווריד. כדי להבטיח שהמחט ניקבה את וריד הזנב, משוך מעט לאחור את הבוכנה. אם המחט נמצאת בווריד, הדם יזרום לתוך המחט.
   1. מקם מחדש את המחט לפי הצורך. לאחר מכן, כדי לייצב את המחט, הזיזו את היד מעל מקום ההזרקה מתחת לאתר ההזרקה והחזיקו את קצה המזרק כנגד הזנב.
6. הזרקו לאט את הווקטור לזנב (כ-20 מיקרוליטר לשנייה).
   הערה: הווריד עלול לאבד צבע כאשר הווקטור זורם דרכו. סימנים לכך שהתמיסה הוזרקה מחוץ לווריד כוללים מכשול, הלבנה של העור או התנגדות בעת הזרקת הווקטור. בעזרת תרגול ניתן למזער את החשיפה החוץ-וסקולרית.
7. לאחר מתן הווקטור, הסר את המחט מהחולדה ולחץ פד גזה על מקום ההזרקה כדי לעזור לעצור את הדימום למשך 30 - 60 שניות.

3. ניקוי

1. כבה את ההרדמה והחמצן של איזופלורן. עקוב אחר החולדה עד שהיא חוזרת להכרה, ואז החזיר אותה לכלוב שלה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
-1-mL מזרק	BD	309626	מגיע עם מחט 25 גרם מחוברת. החלף במחט 27-30 גרם להזרקה
30 גרם מחט	BD	305106
Isoflurane	Piramal Healthcare	66794-013-25	Isoflurane USP 250 מ"ל
מסכת הרדמה	Kopf Instruments	906
גזה	הנרי שיין	100-2524	2 אינץ' x 2 אינץ' (5 ס"מ x 5 ס"מ)
וופורייזר הרדמה בגז	SurgiVet	4214322	T3 קלאסי
נבלות הרדמה בגז	SurgiVet	32373B10	Enviro-PURE
כרית חימום	Sears	17280
70% אתנול	Decon Laboratories, Inc.	2401	140 הוכחה
70% איזופרופנול	VWR	89108-160