Method Article

הכנת אינטקט דיסקים זנב שור חולייתי לתרבות איברים

DOI:

10.3791/3490

⸱

February 2nd, 2012

 , 
1ARTORG Center for Biomedical Engineering, University of Bern

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מדגים טכניקה קצירת עבור coccygeal דיסקים חולייתי שור לתרבות עבור איבר במבחנה איבר תרבות.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הדיסק הבין חולייתי (IVD) הוא המפרק המחבר את עמוד השדרה מחוליה לחוליה. זה תפקידי להעביר טעינה של עמוד השדרה ולתת גמישות עמוד השדרה. הוא מלחין של שלושה מדורים: pulposus הגרעין הפנימי ביותר (NP) המקיף ידי fibrosus annulus (AF), ושני endplates סחוס המחבר בין NP ו - AF לגוף השדרה משני הצדדים. הכאב נגרם ככל הנראה על ידי Discogenic מחלה ניוונית הדיסק הבין חולייתי (DDD) ו herniations הדיסק זוהה כבעיה מרכזית בחברה המודרנית שלנו. כדי לחקור מנגנונים אפשריים של ניוון IVD, בתרבות חוץ גופית מערכות איברים עם תאים חיים הדיסק הם מאוד מושך. בתרבות במבחנה של שלם IVDs coccygeal שור התקדמה למערכת מודל רלוונטי, המאפשר את לימוד mechano ביולוגית היבטים בסביבה מבוקר היטב פיזיולוגיים מכני. IVDs זנב שור ניתן להשיג בקלות יחסית במספרים גבוהים יותרד דומים מאוד IVDs המותני האדם ביחס צפיפות התאים, אוכלוסיית התאים ממדים. עם זאת, טכניקות קודמות שור הזנב קצירת IVD שמירה endplates סחוסי ו endplates גרמי נכשל לאחר 1-2 ימים של התרבות מאז המסלולים תזונה נחסמו על ידי ברור דם קרוש. IVDs הם האיברים avascular הגדול ביותר, ולכן, את החומרים המזינים את התאים NP תלויים אך ורק על דיפוזיה דרך בלוטות נימי מהגוף השדרה הסמוכה. נוכחות של פסולת עצם ודם קרוש על פני השטח endplate יכול לעכב דיפוזיה מזין למרכז הדיסק תא הכדאיות פשרה. הקבוצה שלנו הוקמה פרוטוקול מהיר יחסית "סדק", את IVDs מזנב עם סיכון נמוך לזיהום. אנו מסוגלים permeabilize טרי לחתוך משטחים endplate גרמי באמצעות סילון כירורגית שטיפה המערכת, אשר מסיר את קרישי דם ופסולת חיתוך ביעילות רבה מחדש את מסלול דיפוזיה תזונהלמרכז IVD. הנוכחות של צלחות גידול משני צידי העצם בחוליות יש להימנע להסירו לפני התרבות. בסרטון זה, אנו המתאר את הפעולות מכריע במהלך הכנת ולהפגין המפתח תרבות איבר מוצלח שמירה כדאיות התא גבוהה במשך 14 ימים תחת תרבות נפיחות חינם. השעה התרבות יכול להיות ארוך כאשר הסביבה מכני מתאים יכול להישמר באמצעות bioreactor טעינה מכני. הטכניקה הפגינו כאן ניתן להרחיב בעלי חיים אחרים כגון חזירי, ovine ו leporine בידוד IVD הזנב ואת המותני.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הדיסק הבין חולייתי קציר

  1. זנב שור שלם באורך מתקבל שחיטה מקומית, אם אפשר בלי עור מאז הנוכחות של העור מעלה את הסיכוי לזיהום (איור 2).
  2. הכן קרש חיתוך גדול להכין תחנת עבודה סטרילית המכשירים על גבי קרש חיתוך (איור 2).
  3. הכן תחת מכסה המנוע גזה סטרילי זרימה למינרית סטרילי טבולה סודיום כלוריד 0.9% המכיל ציטרט הנתרן 55mm והכניסו גם בכל צלחת 6-הבאר.
  4. הכן אגן לדלל 1:100 פתרון בבטאדין עם מי ברז.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הצעד הראשון לתרבות איברים מוצלחת היא לוודא כי explant לא צריך להיות מזוהמים. הזנב צריך להיות עור לפני שאתם מתחילים עם ההליך. כל שערה חיה הביא למעבדה סטרילית יכול להיות בעייתי מבחינת זיהום. זנב שור אידיאלי צריך להיות טרי ככל האפשר (זה משפיע על כדאיות התא הראשוני). יתר על כן, צעד הכביסה בבטאדין מומלץ להפחית את הסיכון של זיהום נוסף. במקום להשתמש בעל מחוייט להב פטיש להפריד את IVD מגוף החוליה, זה יכול להתבצע באמצעות bandsaw היסטולוגית (להב היהלום צריך להיות מקורר עם PBS או תמיסת רינגר .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אין לנו שום דבר לגלות.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרויקט זה מומן על ידי הלאומית השוויצרית למדע (SNF # 310030-127586/1).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
שם מגיב חברה מספר קטלוגי הערות (אופציונלי)
דיסק חולייתי טריים שור רקמה מן זנב שור, מבית השחיטה המקומית (רצוי תוך שעות שלאחר המוות בלי העור).
Pulsavac פלוס AC מערכת צימר inc. שוויץ 00-5150-486-01 הביצועים הטובים ביותר עם ראש היפ תרסיס ועם אספקת החשמל (אחד עם 8 סוללות AA עושה גם עבודה אבל היא פחות נוחה)
קיבולת גבוהה מניפה תרסיס w / Splash מגן, אורך 12.7cm צימר inc. שוויץ 00-5150-175-00 ישנם כמה ראשי תרסיס זמין, בדקנו את זה בהצלחה
להבי אזמל # 22 ו # 10 סוואן, מורטב, אנגליה # 10: 0201
# 22: 0208
להב בעל איזמל # 3 ו # 4 האוסמן, גרמניה # 3: 06.103.00
# 4: 06.104.00
לוץ תעשייתי להב לוץ, גרמניה 1022.0884
שנאגרו מלוחים פוספט (PBS) Invitrogen, שוויץ 10010-023
Dulbecco של הנשר השתנה בינוני (DMEM) Gibco, שוויץ 11960-044
Lactated Ringer של פתרון (ללא סוכר) Bichsel, שוויץ 133 0002
6 גם רב גם צלחת TPP, שוויץ 92006
בבטאדין פתרון Mundipharma, שוויץ 10055025
עור כירורגי סמן Porex כירורגי, שוויץ 9560
לוח חיתוך גדול כל מותג אפשרי

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lee, C. R., Iatridis, J. C., Poveda, L., Alini, M. In vitro organ culture of the bovine intervertebral disc: effects of vertebral endplate and potential for mechanobiology studies. Spine (Phila Pa 1976). 31, 515-522 (1976).
  2. Chan, S. C. W., Gantenbein-Ritter, B., Leung, V. Y., Chan, D.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Intervertebral Disc PreparationBovine Tail DiscJet Lavage SystemOrgan Culture TechniqueEndplate Surface CleaningDiffusion Experiment MethodLive Dead StainingFree Swelling CultureMechanical Loading BioreactorGrowth Plate Removal

Related Articles