מאמר שיטה

אלגינט microcapsule כפלטפורמה 3D עבור ריבוי והתמיינות של בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC) כדי שושלות שונות

DOI:

10.3791/3608

⸱

9 במרץ 2012

 ,  ,  ,  , 
1Stem Cell Lab, School of Psychiatry, Faculty of Medicine, The University of New South Wales, 2Siriraj Center of Excellence for Stem cell Research, Faculty of Medicine Siriraj Hospital, Mahidol University , 3Neuropsychiatric Institute, Prince of Wales Hospital

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

יש לנו אופטימיזציה טכניקה מיקרואנקפסולציה כפלטפורמה 3D יעיל להפצת והבחנה בתאי גזע עובריים כדי האנדודרם ואת דופאמין (DA) נוירונים. הוא גם מספק הזדמנות בידוד החיסונית של תאים המארח במהלך ההשתלה. פלטפורמה זו ניתן להתאים את סוגי תאים אחרים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC) הם מתעוררים כמקור חלופה אטרקטיבית עבור טיפול חלופי תא שכן ניתן להרחיב בתרבות הבדיל ללא הגבלת זמן לכל סוגי התאים בגוף. סוגים שונים של biomaterials יש גם שימש בתרביות תאים גזע לספק microenvironment מחקה נישה תא גזע 1-3. זו האחרונה היא חשובה לקידום התא אל התא אינטראקציה, התפשטות תאים, והתמיינות אל שושלות ספציפיות, כמו גם הארגון רקמה על ידי מתן תלת ממדי (3D) סביבת 4 כגון אנקפסולציה. עקרון אנקפסולציה התא כולל המלכוד של תאים חיים בגבולות קרום חדיר למחצה בתרבויות 3D 2. קרומים אלה מאפשרים לחילופי חמצן, חומרי מזון גירויים על פני הממברנות, ואילו הנוגדנים ותאי החיסון של המארח שגודלם עולה על גודל הנקבוביות הקפסולה מודרים 5. הנה, אנחנו מראששלח את הגישה לתרבות להבדיל hESC נוירונים התובע ב microenvironment 3D באמצעות microcapsules אלגינט. יש לנו תרבות שונה התנאים 2 כדי לשפר את הכדאיות של hESC כמוס. הראינו בעבר כי תוספת של p160-Rho הקשורים מעכבי קינאז סליל מפותל, (רוק), Y-27632 ואנושי בינוני העובר פיברובלסטים אוויר החלפת בסרום (hFF-CM) לפלטפורמה 3D משופרת באופן משמעותי את הכדאיות של hESC Encapsulated שבו התאים לידי ביטוי מוחלטות סמן גנים האנדודרם 1. השתמשנו עכשיו זה פלטפורמה להפצת 3D של בידול hESC ויעיל נוירונים התובע. חלבון הגן ניתוחים ביטוי לאחר השלב האחרון של בידול התובע העצבית הראו ביטוי מוגבר של hydroxylase טירוזין (ה '), הסמן של התובע נוירונים,> 100 קפלי לאחר 2 שבועות. החוקרים שיערו כי הפלטפורמה שלנו 3D באמצעות microcapsules אלגינט אולי כדאי ללמוד את התפשטות וביים בידולשל hESC כדי שושלות שונות. מערכת 3D גם מאפשר הפרדת תאים מזין מן hESC במהלך תהליך של התמיינות, וכן יש פוטנציאל בידוד-החיסונית בעת השתלת בעתיד.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההנחיות המפורטות להלן מתבצעות באמצעות טכניקות אספטיים בתוך השנייה מחלקה biosafety הממשלה. חומרים כימיים וציוד המשמשים מפורטים בטבלה שלהלן.

1. הכנת אלגינט 1.1% (W / V)

  1. הוסף 0.275 גרם של נתרן אלגינט מטוהרים (glucuronic גבוהה חומצה תוכן ≥ 60%, צמיגות> 200 מגפ"ס S, ו רעלן פנימי ≤ 100 האיחוד האירופי / g) בצינור סטרילי 50 מ"ל ולהוסיף 25 מ"ל פתרון סטרילי ג'לטין 0.1% הכין קודם לכן (0.5g gelatin/500 מ"ל אלפית ש H 2 O ו מומס על ידי מעוקר).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מספר מחקרים באמצעות העכבר גזע עובריים לתאים hESC הוכיחו את היתרונות של מערכת התרבות 3D ב biomaterials והנדסת רקמות 2,3. השתמשנו אלגינט microcapsules סידן כפלטפורמה 3D מתאים ללמוד התפשטות hESC והבחנה בהשוואה אלגינט בריום מאז hESC הראו כדאיות גבוהה יותר משמעותית כאשר הגלום אלגינט סידן מאשר אלגינט בריום. מערכת זו מאפשרת גם תרבות תרבות גבוהה צפיפות התאים וחילופי חומרי מזון וחמצן דרך הממברנה 7. התמיינות ספונטנית בתוך הכמוסות נצפתה קודם לכן ההנחה היא כי ככל hESC מו.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אין לנו מה למסור.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכת על ידי תוכנית NHMRC גרנט # 568969 (PSS) ו הפקולטה לרפואה, אוניברסיטת New South Wales, יוזמת לתאי גזע (KSS).

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
שם מגיב חברה מספר קטלוגי הערות
אלגינט (Pronova למעלה MVG) NovoMatrix 4200101 glucuronic גבוהה תכולת חומצות ≥ 60%, צמיגות> 200 מגפ"ס S, ו רעלן פנימי <100 האיחוד האירופי / g
ג'לטין Sigma-Aldrich G1890-100 גרם
0.9% NaCl בקסטר הבריאות AHF7123
סוג J1 חרוז גנרטור ניסכו הנדסה בע"מ SPA-0447
Multi-Phaser מזרק משאבה חדש משאבת עידן מערכות בע"מ דגם NE-1000
Ezi-Flow רפואי flowmeter גסקון מערכות G0149
Y-27632 מרק 688000
האדם אלבומין בסרום Sigma-Aldrich A4327-1G
Accutase Millipore SCR005
14 גר x 2 "קטטר IV Terumo SR-OX1451C
נוק אאוט, DMEM Invitrogen 10829-018 עבור SR בינוני (הבסיס)
GlutaMAX-I Invitrogen 35050-061 עבור SR בינוני (2 מ"מ)
נוק אאוט סרום החלפת Invitrogen 10828-028 עבור SR בינוני (20%)
פניצילין, סטרפטומיצין Invitrogen 15070063 עבור SR בינוני (2.5 U / ml)
אינסולין transferrin, סלניום (ITS) Invitrogen 41400045 עבור SR בינוני (1x)
β-Mercaptoethanol Invitrogen 21985-023 עבור SR בינוני (0.1 מ"מ)
MEM פתרון NEAA Invitrogen 11140-050 עבור SR בינוני (5 מ"מ)
גלזגו בינוני Essential Minimum Invitrogen 11710035 עבור בינוני בידול התובע עצבית (הבסיס)
נוק אאוט סרום החלפת Invitrogen 10828-028 עבור בינוני בידול התובע עצבית (10%)
נתרן פירובט Invitrogen 11360070 עבור בינוני בידול התובע עצבית (1 מ"מ)
MEM פתרון NEAA Invitrogen 11140-050 עבור התובע nבידול בינוני eural (0.1 מ"מ)
β-Mercaptoethanol Invitrogen 21985-023 עבור בינוני בידול התובע עצבית (0.1 מ"מ)
סוניק הקיפוד (ששש) מחקר ופיתוח מערכות 1314-SH-025/CF על בידול התובע עצבית (100 ng / ml)
גידול פיברובלסטים גורם 8 א (FGF8a) מחקר ופיתוח מערכות 4745-F8-050 על בידול התובע עצבית (100 ng / ml)

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chayosumrit, M., Tuch, B., Sidhu, K. Alginate microcapsule for propagation and directed differentiation of hESCs to definitive endoderm. Biomaterials. 31, 505-514 (2010).
  2. Dean, S. K., Yulyana, Y., Williams, G., Sidhu, K. S., Tuch, B. E. Diffe....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

RockWestern BlotPA6

מאמרים קשורים