-1::1
Simple Hit Counter
Skip to content

Products

Solutions

×
×
Sign In

HE

EN - EnglishCN - 简体中文DE - DeutschES - EspañolKR - 한국어IT - ItalianoFR - FrançaisPT - Português do BrasilPL - PolskiHE - עִבְרִיתRU - РусскийJA - 日本語TR - TürkçeAR - العربية
Sign In Start Free Trial

RESEARCH

JoVE Journal

Peer reviewed scientific video journal

Behavior
Biochemistry
Bioengineering
Biology
Cancer Research
Chemistry
Developmental Biology
View All
JoVE Encyclopedia of Experiments

Video encyclopedia of advanced research methods

Biological Techniques
Biology
Cancer Research
Immunology
Neuroscience
Microbiology
JoVE Visualize

Visualizing science through experiment videos

EDUCATION

JoVE Core

Video textbooks for undergraduate courses

Analytical Chemistry
Anatomy and Physiology
Biology
Cell Biology
Chemistry
Civil Engineering
Electrical Engineering
View All
JoVE Science Education

Visual demonstrations of key scientific experiments

Advanced Biology
Basic Biology
Chemistry
View All
JoVE Lab Manual

Videos of experiments for undergraduate lab courses

Biology
Chemistry

BUSINESS

JoVE Business

Video textbooks for business education

Accounting
Finance
Macroeconomics
Marketing
Microeconomics

OTHERS

JoVE Quiz

Interactive video based quizzes for formative assessments

Authors

Teaching Faculty

Librarians

K12 Schools

Products

RESEARCH

JoVE Journal

Peer reviewed scientific video journal

JoVE Encyclopedia of Experiments

Video encyclopedia of advanced research methods

JoVE Visualize

Visualizing science through experiment videos

EDUCATION

JoVE Core

Video textbooks for undergraduates

JoVE Science Education

Visual demonstrations of key scientific experiments

JoVE Lab Manual

Videos of experiments for undergraduate lab courses

BUSINESS

JoVE Business

Video textbooks for business education

OTHERS

JoVE Quiz

Interactive video based quizzes for formative assessments

Solutions

Authors
Teaching Faculty
Librarians
K12 Schools

Language

he_IL

EN

English

CN

简体中文

DE

Deutsch

ES

Español

KR

한국어

IT

Italiano

FR

Français

PT

Português do Brasil

PL

Polski

HE

עִבְרִית

RU

Русский

JA

日本語

TR

Türkçe

AR

العربية

    Menu

    JoVE Journal

    Behavior

    Biochemistry

    Bioengineering

    Biology

    Cancer Research

    Chemistry

    Developmental Biology

    Engineering

    Environment

    Genetics

    Immunology and Infection

    Medicine

    Neuroscience

    Menu

    JoVE Encyclopedia of Experiments

    Biological Techniques

    Biology

    Cancer Research

    Immunology

    Neuroscience

    Microbiology

    Menu

    JoVE Core

    Analytical Chemistry

    Anatomy and Physiology

    Biology

    Cell Biology

    Chemistry

    Civil Engineering

    Electrical Engineering

    Introduction to Psychology

    Mechanical Engineering

    Medical-Surgical Nursing

    View All

    Menu

    JoVE Science Education

    Advanced Biology

    Basic Biology

    Chemistry

    Clinical Skills

    Engineering

    Environmental Sciences

    Physics

    Psychology

    View All

    Menu

    JoVE Lab Manual

    Biology

    Chemistry

    Menu

    JoVE Business

    Accounting

    Finance

    Macroeconomics

    Marketing

    Microeconomics

Start Free Trial
Loading...
Home
JoVE Journal
Medicine
Point-of-Care Assay המהיר של יעילות קרישת הדם enoxaparin בכל

Research Article

Point-of-Care Assay המהיר של יעילות קרישת הדם enoxaparin בכל

DOI: 10.3791/3852

October 12, 2012

Mario A. Inchiosa Jr.1,2, Suryanarayana Pothula2, Keshar Kubal1,2, Vajubhai T. Sanchala2, Iris Navarro2

1Department of Pharmacology,New York Medical College , 2Department of Anesthesiology,New York Medical College

Cite Watch Download PDF Download Material list
AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

In This Article

Summary Abstract Introduction Protocol Representative Results Discussion Disclosures Acknowledgements Materials References Reprints and Permissions

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Retraction Notice

The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice

Summary

הפגנה של assay כמותית מהיר של עיכוב קרישת דם על ידי-הפרין נמוך משקל המולקולרי, enoxaparin. התרומה של enoxaparin מוערכת על ידי הסרת ההשפעה שלו דרך מערכת עיכול עם heparinase. תיאור מלא יותר של assay הוא מפורט במאמר שפורסם.

Abstract

יש צורך בבדיקה קלינית כדי לקבוע את המידה שבה הדם של מטופל anticoagulated ביעילות על ידי---הפרין הנמוך משקל המולקולרי (LMWH), enoxaparin. ישנם גם מצבים קליניים דחופים שבו יהיו חשוב אם זה יכול להיקבע במהירות. הבדיקה הנוכחית נועדה להשיג את זה. אנו assayed דגימות דם אדם שתובלו בריכוזים ידועים של enoxaparin בלבד. המאפיין המהותי של assay הנוכחי הוא כימות של היעילות של enoxaparin בדגימת הדם של מטופל באמצעות השפלתו להשלים עם חוסר הפעילות heparinase. שתי דגימות דם נשאב לתוך Vacutainer צינורות (קיטון-דיקנסון; פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי) שתובלו בenoxaparin; מדגם אחד היה מתעכל עם heparinase למשך 5 דקות על 37 מעלות צלזיוס, המדגם האחר ייצג מעמד anticoagulated הבסיסי של החולה. קיצור האחוזים מזמן קרישה במדגם heparinase טופל, לעומת במדינת aseline, הניבה תרומת הקרישה של enoxaparin. אנחנו השתמשנו במכשיר הנייד, הסוללה המופעל Hemochron 801 למדידות של זמני קרישה (הבינלאומי Technidyne קורפ, אדיסון, ניו ג'רזי). המנגנון יש 2 (37 ° C) בארות צינור assay מבוקרים תרמוסטטית. ערכנו את המבחנים בשני סוגים של מחסניות assay שזמינים מהיצרן של המכשיר. מחסנית אחת שונה כדי להגביר את הרגישות שלו. הוצאנו את קאולין מFTK-ACT המחסנית על ידי שטיפה נרחבת עם מים מזוקקים, ומשאיר רק את משטח הזכוכית של הצינור, ואולי מגנט זיהוי, כמפעילים. קראנו assay זה הופעל מינימאלי (מאא). השימוש בבדיקה הופעלה מינימאלי נחקר על ידינו ואחרים. 2-4 המחסנית השנייה שלמדה הייתה assay (A104) זמן thromboplastin חלקי פעיל (aPTT). זה היה בשימוש כפי שסופק מהיצרן. בארות thermostated של המכשיר werדואר משמש הוא לעיכול heparinase ומבחני קרישה. הבדיקה יכולה להסתיים בתוך 10 דקות. Assay מאא הראה שינויים חזקים בזמן קרישה לאחר עיכול heparinase של enoxaparin מעל טווח ריכוז קליני טיפוסי. ב0.2 אנטי Xa IU של enoxaparin למ"ל של דגימת דם, עיכול heparinase נגרם ירידה ממוצעת של 9.8% (20.4 שניות) בזמן קרישה; ב1.0 IU למ"ל של enoxaparin הייתה ירידת 41.4% (148.8 שניות). דוח זה מציג רק את היישום הניסיוני של assay; הערך שלו בסביבה קלינית עדיין צריך לקום.

Protocol

1. כינון Heparinase

  1. heparinase Lyophilized אני מתקבל באופן מסחרי (סימנס, ניוארק דלוור, DadeHepzyme REF B4240-10) בבקבוקונים המכילים 1 מיקרוגרם של החלבון המטוהר. החלבון הוא מומס ב0.25 מ"ל של תמיסת מלח (0.9% NaCl).

2. איסוף דגימות דם

  1. שתי דגימות דם נמשכות על ידי ואקום לציטרט הנתרן (0.3 מ"ל 0.109M; 3.2%) נאגרה Vacutainer צינורות (קיטון דיקינסון-; פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי); הצינורות שניהם מראש מחוזקים איתי ריכוז ידוע של enoxaparin; נפח הדם כי הוא נמשך הוא 2.7 מ"ל. התוכן הכולל הוא אז 3.0 מ"ל.

3. עיכול Heparinase

  1. כל תכולתו של בקבוקון heparinase שעלול להישאף לתוך מזרק (כ -0.2 מ"ל, 80% מהבקבוקון; 0.8 מיקרוגרם של חלבון), עוברת לצינור Vacutainer אחד; 0.2 מ"ל של תמיסת מלח (0.9% NaCl) הוא הוסיף המבחנה השנייה, המשמשת כבאזלמדינת ine לפני נטרול השפעת enoxaparin.
  2. שני צינורות Vacutainer ממוקמים בבארות thermostated של מנגנון Hemochron לתקופה של 5 דקות. (הלימות זמן עיכול 5 דקות עם heparinase הוקמו בעבודה שלנו שפורסמה בעבר. 1)

4. מבחני קרישה

  1. בסוף דגירת heparinase, מיליליטר 2.0 של דם מועבר למחסנית assay. במקרה של צינור מאא, זה מראש מולא עם 0.1 מ"ל של 250 המ"מ CaCl 2 ליזום קרישה. המסחרית aPTT assay המחסנית (A104) נועדה ליזום קרישה בדם כולו שנמשכה לתוך צינורות Vacutainer המכילים ציטרט הנתרן כנוגד קרישה.
  2. מנגנון Hemochron מסמן את ההשלמה של קרישת דם ומשמר את זמני קרישה בשניות. ההבדלים בזמני קרישה בין מדגם heparinase טופל ומדגם המחקר, מחולקים בti הקרישהלהמדגם המחקר, מניב ירידת האחוזים כתוצאה מחיסול של enoxaparin. כפי שנראה להלן, מתאמים ליניארי חזקים הושגו על הקשר בין ירידה באחוז זמן קרישה והריכוז של enoxaparin בדגימות ממוסמרות של דם מלא, כמו גם למתאם עם ריכוזים מדודים של enoxaparin ידי assay chromgenic של אנטי Xa פעילות. מבחנים אנטי Xa של ריכוז enoxaparin נערכו עם ערכה מסחרית לבדיקת chromogenic שני שלבים (BIOPHEN; Aniara, מייסון, אוהיו).

Representative Results

איור 1 מציג את התוצאות ליחסים בין הירידה באחוז זמן קרישה בעקבות חיסול enoxaparin עם heparinase לסדרת ריכוזים ממוסמרים של enoxaparin (0.2, 0.4 ו -1.0 אנטי Xa IU למ"ל). תוצאות מוצגות לשניהם מאא ומחסניות assay aPTT. הריכוזים המדודים של enoxaparin מassay chromogenic של פעילות אנטי Xa כלולים גם בabscissa של כל חלקה.

איור 2 מציג את החלקות של אותם הנתונים כירידה באחוז זמן קרישה לעומת מדד chromogenic של פעילות אנטי Xa.

מתאמים חזקים ליניארי, עם משמעויות סטטיסטיות גבוהות, נמצאו לכל הארבע מערכות היחסים.

איור 1
האיור 1. נקודה של קביעות טיפוח של enoxaparin contr ibution לזמני קרישה של דם כל קוצים המבוססים על אחוז השינוי (קיצור) זמן קרישה לאחר דגירה עם heparinase. ריכוזי enoxaparin הממוסמרים הוסיפו לכל דם והריכוזים אנטי Xa הפלזמה נמדדו (ממוצע ± SE, בסוגריים) ממוקמים בabscissa של כל גרף. כל שיעורי השינוי בזמני קרישה מוצגים כאמצעי וSE, יחד עם קיצור זמן הממוצע קרישה בשניות. נתונים מאותו המטופל מחוברים על ידי קווים מקווקווים. הנתונים לארבעת החולים שזוהו עם כוכביות בעלילה (תוצאות מאא) זהים לארבעה החולים בחלקה ב '(מבחני aPTT). כל התוצאות מייצגים קביעות יחידות. מקדמי מתאם פירסון r = 0.869 (p = 1.9 x 10 -5) וr = 0.916 (p = 2.8 x 10 -5) למערכות היחסים עם מאא וaPTTassay, בהתאמה. לשכפל באישור Inchiosa et al. 1

<p class="jove_content" fo:kיפ-together.within עמודים = "תמיד"> איור 2
. איור 2 התוצאות לשיעורי השינוי בזמני קרישה במבחני שלב של הטיפול מוצגים באיורי 1 א & B הם זממו נגד ריכוזי Xa נגד גורם פלזמה, תוצאות מאא;. B, aPTT מבחנים. כל התוצאות ממבחנים בודדים קרישת זמנים וקביעות יחידות של ריכוזי Xa נגד גורם. מקדמי מתאם פירסון r = 0.910 (p = 2.5 x 10 -6) וr = 0.922 (p = 2.0 x 10 -5) למערכות היחסים עם מאא וassay aPTT, לשכפל בהתאמה באישור Inchiosa et al. 1

Discussion

המחברים אין לי מה לחשוף.

Disclosures

הפגנה של assay כמותית מהיר של עיכוב קרישת דם על ידי-הפרין נמוך משקל המולקולרי, enoxaparin. התרומה של enoxaparin מוערכת על ידי הסרת ההשפעה שלו דרך מערכת עיכול עם heparinase. תיאור מלא יותר של assay הוא מפורט במאמר שפורסם.

Acknowledgements

החקירות בוצעו אך ורק עם תמיכה ממשאבים מחלקתיים ומוסדיים. מנגנון הקרישה (Hemochron 801) הושאל ללא התחייבות מהיצרן. מחסניות assay נרכשו בעלויות הקמעונאי שלהם. הדמות המקדימה בוידאו שונה מSanderink, et al. 12 הדמות השנייה בסרטון (כמובן זמן עיכול heparinase) שוחזרה באישור Inchiosa et al. 1

Materials

שם מגיב חברה מספר קטלוגים תגובות
Hepzyme סימנס B4240 אני heparinase
מחסנית "מאא" Technidyne FTK-ACT שונה על ידי הסרת קאולין
aPTT מחסנית Technidyne A104

References

  1. Inchiosa, M. A. J. r., Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. Toward development of a point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant activity in whole blood. J. Thromb. Thrombolysis. 32, 47-53 (2011).
  2. Despotis, G. J., Filos, K. S., Levine, V., Alsoufiev, A., Spitznagel, E. Aprotinin prolongs activated and nonactivated whole blood clotting time and potentiates the effect of heparin in vitro. Anesth. Analg. 82, 1126-1131 (1996).
  3. Pothula, S., Inchiosa, M. A., Sanchala, V. T., Sarabu, M., Inchiosa, A. S. In vitro effect of protamine excess on blood coagulation assays. Anesth Analg. 96, SCA39 (2010).
  4. Inchiosa, M., Pothula, S., Sanchala, V., Kubal, K. Detection of low plasma levels of low molecular weight heparin. Anesth Analg. 102, SCA10 (2010).
  5. Gogarten, W. The influence of new antithrombotic drugs on regional anesthesia. Curr. Opin. Anaesthesiol. 19, 545-550 (2006).
  6. Gouin-Thibault, I., Pautas, E., Siguret, V. Safety profile of different low-molecular weight heparins used at therapeutic dose. Drug Saf. 28, 333-349 (2005).
  7. Bazinet, A., Almanric, K., Brunet, C., Turcotte, I., Martineau, J., Caron, S., Blais, N., Lalonde, L. Dosage of enoxaparin among obese and renal impairment patients. Thromb. Res. 116, 41-50 (2005).
  8. El Rouby, S., Cohen, M., Gonzales, A., Hoppensteadt, D., Lee, T., Zucker, M. L., Khalid, K., LaDuca, F. M., Fareed, J. The use of a HEMOCHRON JR. HEMONOXTM point of care test in monitoring the anticoagulant effect of enoxaparin during interventional coronary procedures. J. Thromb. Thrombolysis. 21, 137-145 (2006).
  9. Yang, V. C., Bernstein, H., Cooney, C. L., Kadam, J. C., Langer, R. Removal of the anticoagulant activities of the low molecular weight heparin fractions and fragments with flavobacterial heparinase. Thromb Res. 44, 599-610 (1986).
  10. Maddineni, J., Walenga, J. M., Jeske, W. P., Hoppensteadt, D. A., Fareed, J., Wahi, R., Bick, R. L. Product individuality of commercially available low-molecular-weight heparins and their generic versions: therapeutic implications. Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 12, 267-276 (2006).
  11. Wijnhoven, T. J., van de Westerlo, E. M., Smits, N. C., Lensen, J. F., Rops, A. L., vander Vlag, J., Berden, J. H., vanden Heuvel, L. P., van Kuppevelt, T. H. Characterization of anticoagulant heparinoids by immunoprofiling. Glycoconj. J. 25, 177-185 (2008).
  12. Sanderink, G. -. J. C. M., Guimart, C. G., Ozoux, M. -. L., Jariwala, N. U., Shukla, U. A., Boutouyrie, B. X. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of the prophylactic dose of enoxaparin once daily over 4 days in patients with renal impairment. Thromb. Res. 105, 225-231 (2002).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission

Play Video

Point-of-Care Assay המהיר של יעילות קרישת הדם enoxaparin בכל
JoVE logo
Contact Us Recommend to Library
Research
  • JoVE Journal
  • JoVE Encyclopedia of Experiments
  • JoVE Visualize
Business
  • JoVE Business
Education
  • JoVE Core
  • JoVE Science Education
  • JoVE Lab Manual
  • JoVE Quizzes
Solutions
  • Authors
  • Teaching Faculty
  • Librarians
  • K12 Schools
About JoVE
  • Overview
  • Leadership
Others
  • JoVE Newsletters
  • JoVE Help Center
  • Blogs
  • Site Maps
Contact Us Recommend to Library
JoVE logo

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved

Privacy Terms of Use Policies
WeChat QR code