מאמר שיטה

Multimodal הדמיה של השתלת תא גזע במערכת העצבים המרכזית של עכברים

DOI:

10.3791/3906

⸱

13 ביוני 2012

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Experimental Hematology, University of Antwerp, 2Bio Imaging Lab, University of Antwerp

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאמר זה מתאר רצף של אירועים אופטימיזציה עבור דימות multimodal של שתלי הסלולר מכרסם במוח באמצעות: (i) ביולומינציה vivo ו הדמיה באמצעות תהודה מגנטית, ו (ב) הודעה מורטם ניתוח היסטולוגית. השילוב בין שיטות הדמיה על חיה אחת מאפשר הערכה שתל נייד עם רגישות גבוהה רזולוציה, וספציפיות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במהלך העשור האחרון, השתלת צברה עניין גובר כמו מודאליות טיפולית ראשונית או משנית עבור מגוון רחב של מחלות, הן במחקרים פרה קליניים. עם זאת, עד כה התוצאות לגבי תוצאה תפקודית ו / או התחדשות רקמות להשתלה הבאה לתאי גזע הם מגוונים למדי. באופן כללי, היתרון הקליני הוא ציין, ללא הבנה מעמיקה של המנגנון הבסיסי (ים) 1. לכן, מאמצים רבים הובילו לפיתוח שיטות שונות הדמיה מולקולרית כדי לפקח על תא גזע השתלת במטרה הסופית כדי להעריך באופן מדויק, הישרדות הגורל ופיזיולוגיה של בתאי גזע מורכבים ו / או סביבת המיקרו שלהם. השינויים שנצפו אחד או יותר פרמטרים שנקבעו על ידי הדמיה מולקולרית עשוי להיות קשור לאפקט קליני הנצפה. בהקשר זה, מחקרים שלנו להתמקד שימוש בשילוב של הדמיה ביולומינציה (BLI), הדמיית תהודה מגנטית (MRI) ואת analysi היסטולוגיתזה להעריך השתלת תא גזע.

BLI נפוץ הלא פולשני לבצע מעקב תא ולפקח הישרדות התא בזמן בעקבות השתלת 2-7, בהתבסס על התגובה הביוכימית שבה תאים לבטא את הגן כתב בלוציפראז, מסוגלים לפלוט אינטראקציה הבאה אור עם המצע שלה (למשל D- luciferin) 8, 9. MRI לעומת זאת היא טכניקה לא פולשנית אשר ישים מבחינה קלינית 10 והוא יכול לשמש כדי לאתר במדויק שתלי סלולריים עם רזולוציה גבוהה מאוד 11-15, אם כי הרגישות שלה מאוד תלוי בניגוד שנוצר לאחר סימון התא עם חומר ניגוד MRI . לבסוף, ניתוח שלאחר המוות היסטולוגית היא השיטה של ​​בחירה כדי לאמת את תוצאות המחקר שהתקבלו עם פולשנית טכניקות עם הרזולוציה הגבוהה ביותר וברגישות. יתר על כן הקצה נקודת ניתוח היסטולוגית מאפשר לנו לבצע ניתוח מפורט פנוטיפי של תאים מורכבים ו / או הרקמה שמסביב, תואר ראשוןsed על השימוש של חלבונים הכתב ניאון ו / או תיוג התא ישיר עם נוגדנים ספציפיים.

לסיכום, אנחנו כאן חזותית להדגים את complementarities של BLI, MRI ו היסטולוגיה לפענח תא גזע שונה ו / או בסביבה הקשורים המאפיינים הבאים השתלת תא גזע של מערכת העצבים המרכזית של עכברים. כך, למשל, מח עצם שמקורם בתאי סטרומה, מהונדסים גנטית כדי לבטא משופרת גרין פלורסנט חלבון (eGFP) ו גחלילית בלוציפראז (fLuc), ומסומן בכחול ניאון מיקרון בגודל חלקיקי תחמוצת ברזל (MPIOs), יהיו מורכבים ב מערכת העצבים המרכזית של המערכת החיסונית המוסמכות עכברים והתוצאות יהיה פיקוח על ידי BLI, MRI ו היסטולוגיה (איור 1).

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. תא הכנה

  1. ניסויים יש ליזום שימוש בתרבית לשעבר ב vivo לתאי גזע אוכלוסיות מהונדסים גנטית כדי לבטא את החלבונים הכתב בלוציפראז ו eGFP. כאן אנו משתמשים בלוציפראז / eGFP-לבטא Murine מח עצם שמקורם בתאי סטרומה (BMSC-Luc/eGFP) כפי שתואר קודם לכן על ידי Bergwerf et al. 2, 5.
  2. יומיים לפני סימון התא, BMSC-Luc/eGFP תאים צלחת בצפיפות של 8 x 10 5 תאים לכל בקבוק T75 התרבות ב 15 מ"ל בינוני שלם הרחבה (CEM) בתוספת 1 ​​מיקרוגרם / מ"ל Puromycine.
  3. לאפשר לתאים לגדול במשך שעה 48 על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2.
  4. הוסף 5 x 10 6 קרחוני כחול מיקרון בגודל תחמוצת ברזל חלקיקים (GB MPIO) לכל מ"ל בינוני מתרבות לתרבות התא גדל (סה"כ: 75 x 10 6 בינוני 15 חלקיקים לכל תרבות מ"ל בבקבוק T75 התרבות).
  5. דגירה של 16 שעות על מנת לאפשר ספיגת החלקיקים באמצעות אנדוציטוזה.
  6. לשטוף את החלקיקים שנותרוולאפשר לתאים לגדול במשך שעה 24 נוסף כדי להשיג חלוקת התא confluency והומוגני של MPIO GB.
  7. לאמת את ספיגת החלקיקים ויזואלית באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי על ידי ספירת היחס בין eGFP + ו GB MPIO + תאים לסכום כולל של eGFP + תאים.
  8. שטפי גיגבייט MPIO, שכותרתו תאים BMSC-Luc/eGFP פעמיים עם 10 מ"ל PBS ותאי הקציר לאחר טריפסין-EDTA טיפול (5 מ"ל לכל בקבוק T75 התרבות במשך 5 דקות).
  9. לשטוף את התאים נקצרו resuspend בריכוז הסופי של 133 x 10 6 תאים למ"ל ב PBS.
  10. שמור על תאים על הקרח עד להשתלה.

2. תא השרשה של מערכת העצבים המרכזית של עכברים

  1. לטשטש את העכברים בזריקה intraperitoneal של קטמין (80 מ"ג / ק"ג) + xylazine (16 מ"ג / ק"ג) תערובת.
  2. המתן 5 דקות כדי לאפשר עכברים להירדם.
  3. לגלח את הראש העכבר כדי לאפשר מניפולציות סטריליים.
  4. מניחים את העכבר בתוך מסגרת stereotactic.
  5. Desinfectהעור רטוב בעיני העכברים כדי למנוע התייבשות.
  6. לעשות חתך בקרקפת קו האמצע לחשוף את הגולגולת, לקדוח חור בגולגולת באמצעות תרגיל בר שיניים על קואורדינטות נתון: 2 מ"מ אחורי ו 2 מ"מ לרוחב גבחת.
  7. המערבולת ההשעיה התא קצרות לשאוב ההשעיה תא המזרק.
  8. מכניסים את המחט במזרק בעומק של 2.5 מ"מ מתחת דורה ולאפשר איזון הלחץ במשך דקה 1.
  9. להזריק תרחיף תאים μl 3 (4 x 10 5 תאים) בעומק של 2 מ"מ מתחת דורא במהירות של μl 0.70 / min באמצעות משאבה אוטומטית הזרקת מיקרו.
  10. להמתין כ 5 דקות נוספות כדי למנוע backflow ההשעיה התא שהוחדר.
  11. לאט לאט חוזר בי את המחט ולחטא את גבולות העור לפני תפירת העור.
  12. להזריק 300 μl פתרון NaCl 0.9% מתחת לעור על מנת למנוע התייבשות, ומניחים את העכבר תחת מנורת חימום להתאושש מן ההרדמה. ניהול עמ 'ost הניתוח כאבים בהתאם לתקני מוסדיים.

3. ב ביולומינציה vivo

  1. לטשטש את העכברים על ידי תערובת של 3% isoflurane וחמצן.
  2. מניחים את העכברים Imager פוטון ולהפחית את רמת ההרדמה ל -1.5% isoflurane וחמצן.
  3. להזריק 150 מ"ג D-luciferin לכל ק"ג ממשקל הגוף דרך הווריד.
  4. לרכישת התמונה במשך 5 דקות באמצעות תוכנת Vision התמונה.
  5. לבצע עיבוד תמונה באמצעות תוכנת M3vision. לכמת את האות הנצפית באמצעות אזורים קבועים של עניין.

4. בתחום ההדמיה vivo תהודה מגנטית

  1. לטשטש את העכברים עם 3% isoflurane בתערובת של O 2: N 2 O (03:07).
  2. מניחים את עכברים עוצר של מערכת אופקית MR 9.4T ולהפחית את רמת הרדמה% 1 isoflurane בתערובת של O 2: N 2 O (03:07).
  3. להרטיב את העיניים של העכברים כדי למנוע dehydration, חבר בדיקה רקטלית כדי לפקח על טמפרטורת הגוף ולעקוב אחר קצב הנשימה על ידי הצבת חיישן מתחת לבטן העכבר.
  4. לשמור על קצב הנשימה של 110 ± 10 נשימות בדקה ולשמור על חום גוף קבוע בטווח צר של 37 ± 0.5 ° C.
  5. מניחים את משטח RF סליל על הראש העכבר ומיקום העכבר במרכז המגנט.
  6. לרכוש סט של 10 העטרה T2 משוקלל הד ספין (SE) תמונות כדי לקבל מידע אנטומי ספציפי ו-T2 * משוקלל הדרגתיים הד (GE) תמונות כדי ללמוד התא הגירה גזע עם רזולוציה ב-מטוס של 70 מיקרומטר 2. הגדרת פרמטרים רצף כדלקמן: זמן החזרה (TR): 500 MS זמן, הד (TE): 8 MS (רצף GE) וזמן החזרה (TR): 4200 שניה, הפעם הד (TE): 12.16 ms (SE ברצף); שדה הראייה (FOV): 18x18 מ"מ 2, מטריקס: 256x256, 1 פרוסת מ"מ עובי 1 מ"מ ההפרדה פרוסה (פאראוויזיון 5.1 תוכנה).
  7. לבצע עיבוד נתוניםבאמצעות תוכנה עמירה 4.0.

5. פוסט מורטם היסטולוגיה

  1. לטשטש את העכברים מאוד עמוקות שאיפה של חמצן isofluorane (4%), (0.5 ליטר / דקה) וחנקן (1 L / min) התערובת במשך 2 דקות. להקריב את העכברים על ידי פריקה צוואר הרחם.
  2. הסר את המוח העכבר מן הגולגולת לקבע את רקמת המוח paraformaldehyde 4% ב PBS במשך 2 שעות.
  3. מייבשים את רקמת המוח על ידי הנחת המוח לאחר מכן הדרגתיים שונים של סוכרוז: 2 שעות של סוכרוז 5% ב PBS, 2 שעות של סוכרוז 10% PBS, לילה סוכרוז 20% ב PBS.
  4. הקפאת רקמת המוח באמצעות חנקן נוזלי ולאחסן את הרקמה ב -80 ° C עד אחד בלבד.
  5. סעיף המוח רקמת ב 10 חלקים עבים מיקרומטר באמצעות cryostat.
  6. מסך cryosections בלא כתם כחול על הקרינה מן חלקיקים MPIO GB ו פלואורסצנטי ירוק את התאים המבטאים eGFP באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
  7. מסך בלא כתם cryosections עבורירוק / אדום רקע הקרינה של תאים דלקתיים.
  8. בצע stainings immunohistochemical נוסף immunofluorescent לזהות אוכלוסיות תאים פנימיים (למשל microglia, האסטרוציטים, התאים T, ...) אינטראקציה עם שתלי סלולריים.

6. נציג תוצאות

אנחנו כאן הציג ראייה רצף של אירועים אופטימיזציה עבור דימות multimodal מוצלח של בלוציפראז / eGFP-לבטא (גזע) אוכלוסיות תאים של מערכת העצבים המרכזית של עכברים. בתחילה, תיאר את הליך גיגבייט MPIO תיוג תוצאות תיוג היעילה ביותר של תאים BMSC-Luc/eGFP, אשר יכול בקלות להיות מאומת באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי (איור 2 א). לאחר מכן, על השתלת של GB MPIO שכותרתו BMSC-Luc/eGFP את מערכת העצבים המרכזית של עכברים, ההישרדות של השתל הסלולר יכול להיות פיקוח על ידי in vivo BLI מבוסס על פעילות בלוציפראז (2B איור). בנוסף, איתור מדויק של תאים מורכבים יכול להיות פיקוח על ידי in vivo (איור 2 ג). לבסוף, ניתוח היסטולוגית מאפשר אימות של התוצאות שהושגו על ידי BLI ו-MRI. הישרדות יציבה אושרה על ידי ביטוי eGFP יציבה בזמן (איור 2 ד). לשם כך, colocalization של eGFP-להביע תאים עם כחול ניאון MPIO מאפשר להגדרה המדויקת של לוקליזציה ההישרדות של תאים מורכבים. בנוסף, זה תיוג ניאון כפולה של בתאי גזע מקטין את האפשרות לצפות לתוצאות חיוביות שגויות המבוססות על הקרינה רקע נוצר על ידי תאים דלקתיים 5.

figure-protocol-1
באיור 1. סקירת רצף הטיפול

  1. תיוג נייד: BMSC-Luc/eGFP מסומנים עם 5 x 10 6 חלקיקים גיגבייט MPIO בכל מדיום תרבות מ"ל. אחרי 16 שעות של דגירה ועל תקופת מנוחה הבאה של 24 שעות, התאים נקצרים עבורintracerebral ההשתלה.
  2. השתלת תאים: GB MPIO שכותרתו BMSC-Luc/eGFP הם מורכבים במוח העכבר על נקודות הציון הבאות: גבחת -2 מ"מ, 2 מ"מ ימינה של קו האמצע ו - 2 מ"מ מתחת דורה.
  3. In vivo BLI: עירוי לוריד להלן של 150 מ"ג D-luciferin/kg משקל הגוף, האור שנוצר נרכשה במהלך 5 דקות באמצעות Imager פוטון.
  4. In vivo MRI: סט של 10 העטרה T2 משוקלל הד ספין (SE) תמונות ו-T2 * משוקלל הד שיפוע (GE) תמונות ברזולוציה של מטוס של 70 מיקרומטר 2 נרכשו. פרמטרים רצף היו: זמן החזרה (TR): 500 MS זמן, הד (TE): 8 MS (רצף GE) וזמן החזרה (TR): 4200 שניה, הפעם הד (TE): 12.16 ms (רצף SE); שדה הראייה (FOV): 18x18 מ"מ 2, מטריקס: 256x256, 1 פרוסת מ"מ עובי 1 מ"מ ההפרדה פרוסה.
  5. פוסט מורטם היסטולוגיה: cryosection עבה 10μm הוקרנו eGFP להביע וכחול שכותרתו fluorescently BMSC uלשיר מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

figure-protocol-2
2. איור multimodal הדמיה של שתלי בתאי גזע

  1. מיקרוסקופיה immunofluorescence ישירה של קרחוני כחול (GB) MPIO שכותרתו BMSC-Luc/eGFP.
  2. In vivo BLI של עכברים שהוזרק עם 4x10 5 GB MPIO שכותרתו תאים BMSC-Luc/eGFP בשבוע 1 ו 2 שבוע לאחר ההשתלה. ניתוח סטטיסטי של אותות BLI שהתגלו בשבוע 1 ו - 2 בשבוע שלאחר ההשתלה. הנתונים באים לידי ביטוי כמספר הממוצע של פוטונים לשנייה לכל steradian לסנטימטר מרובע (pH / S / SR / cm 2) מהתקופה זמן 5 דקות + / - סטיית התקן המחושבת מאזור קבוע עניין בעכברים מראה איתות ברור BLI במקום ההזרקה.
  3. העטרה דו מימדי MRI של GB MPIO שכותרתו BMSC-Luc/eGFP (לוח לשמאל: (i) T2 משוקלל הד ספין התמונה (ב) T2 * משוקלל הד תמונת צבע) ו-L ללא תווית BMSCמאוניברסיטת קליפורניה / eGFP (הפאנל הימני: (ג) T2 משוקלל הד ספין התמונה (ו ') T2 * משוקלל הד דימוי שיפוע) שתלי במוח העכבר.
  4. ניתוח היסטולוגית של GB MPIO שכותרתו שתלים BMSC-Luc/eGFP 2 בשבוע שלאחר ההשתלה. (א) ניתוח immunofluorescence ישיר לוקליזציה של eGFP-לבטא ו GB שתלי MPIO BMSC-Luc/eGFP שכותרתו. (ב) הגדלה פירוט גבוהה של (אני). (Iii) מכתים Immunofluorescent עבור אנטיגן GFAP, המציין את התפתחותה astrocytic ב המקיף של GB MPIO שכותרתו BMSC-Luc/eGFP. (Vi) מכתים Immunofluorescent עבור אנטיגן-1 איבא, המציין את הפלישה והסביבה של GB MPIO שכותרתו BMSC-Luc/eGFP ידי microglia.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בדו"ח זה, אנו מתארים פרוטוקול אופטימיזציה עבור שילוב של שלוש שיטות הדמיה משלימים (BLI, MRI ו היסטולוגיה) לאפיון מפורט של שתלים הסלולר את מערכת העצבים המרכזית של עכברים המוסמכות החיסונית. שילוב של תיוג כתב הגן של תאים, המבוססת על הנדסה גנטית עם גנים הכתב גחלילית בלוציפראז ו eGFP, ואת תיוג התא ישיר עם GB MPIO, מוביל להערכה מדויקת של שתלים בתאי גזע in vivo.

תיוג החלקיקים של BMSC, גודל החלקיקים MPIO GB ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

החוקרים מצהירים שום ניגוד עניינים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פעילות מחברים נתמך על ידי מענק מחקר ID-BOF 2006 של אוניברסיטת אנטוורפן (שניתן PPO ו AVdL), על ידי מענק מחקר G.0136.11 ו G.0130.11 (שניתן AVdL, צ"ב ו - PPO) ו 1.5.021.09. N.00 (שניתן PPO) של הקרן למטרות מחקר מדעי, פלנדריה (FWO-פלנדריה, בלגיה), על ידי SBO מענק מחקר IWT-60838: BRAINSTIM של המכון הפלמי מדע וטכנולוגיה (שניתן צ"ב ו AVDL), ב בחלקו על ידי מענק מחקר Methusalem מהממשלה הפלמית (שניתן צ"ב), בין השאר על ידי EC-FP6-נואי דימי (LSHB-CT-2005-512146), EC-FP6-נואי אמיל (LSHC-CT-2004-503569) , ועל ידי אינטר אוניברסיטת המשיכה פולנים IUAP-NIMI-P6/38 (שניתן AVDL). נטלי דה Vocht בעל תואר דוקטור מ-studentship FWO-פלנדריה. פיטר Ponsaerts הוא עמית פוסט דוקטורט של FWO-פלנדריה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
שם מגיב חברה מספר קטלוגי תגובות
IMDM Lonza BE12-722F רכיב של CEM צמיחת תאים בינוני
בסרום שור עוברית Gibco 10270-106 רכיב של CEM צמיחת תאים בינוני
סוס סרום Gibco 1605-122 רכיב של CEM צמיחת תאים בינוני
פניצילין, סטרפטומיצין Gibco 15140 רכיב של CEM צמיחת תאים בינוני
Fungizone Gibco 15290-018 רכיב של CEM צמיחת תאים בינוני
PBS Gibco 14190
Puromycine Invivogen הנמלה-PR-1
טריפסין Gibco 25300
GB MPIO פוני מעבדות ME04F/7833
D-luciferin Promega E1601
קטמין (Ketalar) פייזר
Xylazine (Rompun) באייר שירותי הבריאות
Isoflurane Isoflo 05260-05
0.9% NaCl פתרון בקסטר
paraformaldehyde מרק 1.04005.1000
סוכרוז Applichem A1125
מיקרו הזרקה המשאבה KD מדעית KDS100
פוטון imager Biospace מעבדה
9.4T MR סורק Bruker Biospin Biospec 94/20 USR
BX51 מיקרוסקופ אולימפוס BX51
Mycrom HM cryostat Prosan HM525
מזרק המילטון 7635-01
30 מחט מד המילטון 7762-03
תמונה חזון תוכנה Biospace מעבדה
M3vision תוכנה Biospace מעבדה
פאראוויזיון 5.1 התוכנה Bruker Biospin
עמירה 4.0 התוכנה פניו הדמיה

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rodriguez-Porcel, M., Wu, J. C., Gambhir, S. S. Molecular imaging of stem cells. , (2008).
  2. Bergwerf, I., De Vocht, N., Tambuyzer, B. Reporter gene-expressing bone marrow-derived stromal cells are immune-tolerated following implantation in the central nervous system of syngeneic immunocompetent mice. BMC Biotechnol. 9, 1(2009).
  3. Bergwerf, I., Tambuyzer, B., De Vocht, N. Recognition of cellular implants by the brain's innate immune system. Immunol. Cell Biol. 89, 511-516 (2011).
  4. Bradbury, M. S., Panagiotakos, G., Chan, B. K. Optical bioluminescence imaging of human ES cell progeny in the rodent CNS. J. Neurochem. 102, 2029-2039 (2007).
  5. De Vocht, N., Bergwerf, I., Vanhoutte, G. Labeling of Luciferase/eGFP-Expressing Bone Marrow-Derived Stromal Cells with Fluorescent Micron-Sized Iron Oxide Particles Improves Quantitative and Qualitative Multimodal Imaging of Cellular Grafts In Vivo. Mol Imaging Biol. , (2011).
  6. Reekmans, K., Praet, J., Daans, J. Current Challenges for the Advancement of Neural Stem Cell Biology and Transplantation Research. Stem Cell Rev. , (2011).
  7. Reekmans, K. P., Praet, J., De Vocht, N. Clinical potential of intravenous neural stem cell delivery for treatment of neuroinflammatory disease in mice. Cell Transplant. 20, 851-869 (2011).
  8. Contag, C. H., Bachmann, M. H. Advances in in vivo bioluminescence imaging of gene expression. Annu. Rev. Biomed. Eng. 4, 235-260 (2002).
  9. Sadikot, R. T., Blackwell, T. S. Bioluminescence imaging. Proc. Am. Thorac. Soc. 2, 511-540 (2005).
  10. Sykova, E., Jendelova, P., Herynek, V. MR tracking of stem cells in living recipients. Methods Mol. Biol. 549, 197-215 (2009).
  11. Daadi, M. M., Li, Z., Arac, A. Molecular and magnetic resonance imaging of human embryonic stem cell-derived neural stem cell grafts in ischemic rat. 17, 1282-1291 (2009).
  12. Heyn, C., Ronald, J. A., Ramadan, S. S. In vivo MRI of cancer cell fate at the single-cell level in a mouse model of breast cancer metastasis to the brain. Magn. Reson. Med. 56, 1001-1010 (2006).
  13. Hoehn, M., Kustermann, E., Blunk, J. Monitoring of implanted stem cell migration in vivo: a highly resolved in vivo magnetic resonance imaging investigation of experimental stroke in rat. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16267-16272 (2002).
  14. Jendelova, P., Herynek, V., DeCroos, J. Imaging the fate of implanted bone marrow stromal cells labeled with superparamagnetic nanoparticles. Magn. Reson. Med. 50, 767-776 (2003).
  15. Modo, M., Mellodew, K., Cash, D. Mapping transplanted stem cell migration after a stroke: a serial, in vivo magnetic resonance imaging study. Neuroimage. 21, 311-317 (2004).
  16. Boutry, S., Brunin, S., Mahieu, I. Magnetic labeling of non-phagocytic adherent cells with iron oxide nanoparticles: a comprehensive study. Contrast Media Mol. Imaging. 3, 223-232 (2008).
  17. Mailander, V., Lorenz, M. R., Holzapfel, V. Carboxylated superparamagnetic iron oxide particles label cells intracellularly without transfection agents. Mol Imaging Biol. 10, 138-146 (2008).
  18. Modo, M., Hoehn, M., Bulte, J. W. Cellular MR imaging. Mol. Imaging. 4, 143-164 (2005).
  19. Hinds, K. A., Hill, J. M., Shapiro, E. M. Highly efficient endosomal labeling of progenitor and stem cells with large magnetic particles allows magnetic resonance imaging of single cells. Blood. 102, 867-872 (2003).
  20. Shapiro, E. M., Sharer, K., Skrtic, S. In vivo detection of single cells by MRI. Magn. Reson. Med. 55, 242-249 (2006).
  21. Shapiro, E. M., Skrtic, S., Sharer, K. MRI detection of single particles for cellular imaging. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 10901-10906 (2004).
  22. Crabbe, A., Vandeputte, C., Dresselaers, T. Effects of MRI contrast agents on the stem cell phenotype. Cell Transplant. 19, 919-936 (2010).
  23. Szarecka, A., Xu, Y., Tang, P. Dynamics of firefly luciferase inhibition by general anesthetics: Gaussian and anisotropic network analyses. Biophys. J. 93, 1895-1905 (2007).
  24. Keyaerts, M., Heneweer, C., Gainkam, L. O. Plasma protein binding of luciferase substrates influences sensitivity and accuracy of bioluminescence imaging. Mol. Imaging. Biol. 13, 59-66 (2011).
  25. Keyaerts, M., Verschueren, J., Bos, T. J. Dynamic bioluminescence imaging for quantitative tumour burden assessment using IV or IP administration of D: -luciferin: effect on intensity, time kinetics and repeatability of photon emission. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 35, 999-1007 (2008).
  26. Zhang, Y., Bressler, J. P., Neal, J. ABCG2/BCRP expression modulates D-Luciferin based bioluminescence imaging. Cancer Res. 67, 9389-9397 (2007).
  27. Brightwell, G., Poirier, V., Cole, E. Serum-dependent and cell cycle-dependent expression from a cytomegalovirus-based mammalian expression vector. Gene. 194, 115-123 (1997).
  28. Grassi, G., Maccaroni, P., Meyer, R. Inhibitors of DNA methylation and histone deacetylation activate cytomegalovirus promoter-controlled reporter gene expression in human glioblastoma cell line U87. Carcinogenesis. 24, 1625-1635 (2003).
  29. Krishnan, M., Park, J. M., Cao, F. Effects of epigenetic modulation on reporter gene expression: implications for stem cell imaging. FASEB J. 20, 106-108 (2006).
  30. Svensson, R. U., Barnes, J. M., Rokhlin, O. W. Chemotherapeutic agents up-regulate the cytomegalovirus promoter: implications for bioluminescence imaging of tumor response to therapy. Cancer Res. 67, 10445-10454 (2007).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

EGFP Luciferase

מאמרים קשורים