קטרקט הוא הסיבה המובילה לעיוורון בעולם. קרינת אולטרה סגולה שמש (UVR) הוא גורם הסיכון העיקרי להתפתחות קטרקט. מודל חיה של הרבה UVR-B המושרה קטרקט פותח. במאמר זה אנו מתארים שיטות לחקירה של היווצרות קטרקט: חשיפה לUVR, כמותית RT-PCR ואימונוהיסטוכימיה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
קטרקט הוא הסיבה המובילה לעיוורון בעולם 1. ארגון הבריאות העולמית מגדיר את הקטרקט כערפול של עדשת העין שמעכבת את ההעברה של אור. קטרקט הוא מחלה רבה עצרת קשורה עם סוכרת עישון קרינה, אולטרה סגול (UVR), אלכוהול, קרינה מייננת, סטרואידים ויתר לחץ דם. יש ראיות 2-4 ניסיוניות ואפידמיולוגי חזקות 5,6 שUVR גורם קטרקט. פתחנו מודל חיה לUVR B מושרה קטרקט בשני 7 מורדמים וחיות שאינן מורדמות 8.
התרופה היחידה לקטרקט היא ניתוח, אבל הטיפול הזה אינו נגיש לכל. ההערכה הוא, כי עיכוב של הופעת הקטרקט במשך 10 שנים יכול להפחית את הצורך בניתוח קטרקט על ידי 50% 9. כדי לעכב את השכיחות של קטרקט, הוא נחוץ כדי להבין את המנגנונים של היווצרות קטרקט ולמצוא strat מניעה היעילהegies. בין המנגנונים להתפתחות קטרקט, אפופטוזיס ממלא תפקיד מכריע בייזום של קטרקט בבני אדם ובעלי החיים 10. ההתמקדות שלנו הייתה לאחרונה אפופטוזיס בעדשה כמנגנון לקטרקט פיתוח 8,11,12. זה צפוי כי הבנה טובה יותר של ההשפעה של UVR על מסלול אפופטוזיס תספק אפשרויות לגילוי של תרופות חדשות למניעת קטרקט.
במאמר זה, אנו מתארים כיצד קטרקט יכול להיגרם על ידי ניסוי בחשיפת vivo לUVR-B. בהמשך RT-PCR ואימונוהיסטוכימיה מוצגים ככלים ללמוד מנגנונים מולקולריים של UVR-B המושרה קטרקט.
פרוטוקול
1. חשיפה לקרינת אולטרה סגולה
- 15 דקות לפני החשיפה, להרדים חולדת נקבת ספראג-Dawley בתערובת של 90 מ"ג / קילו Ketalar (קטמין) ומ"ג / הק"ג Rompun 10 (xylazine) על ידי הזרקת intraperitoneal.
- הנח את החיה בעוצרת חולדה ולהדק את החגורות עד קיבוע של העכברוש מבלי לגרום לסחוט גזע 13.
- להנחיל Mydriacyl (tropicamide), 10 מ"ג / מ"ל, בשתי עיניה של חיה כדי לגרום mydriasis.
- הנח את החיה, כך שעין אחת מ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
המקורות השונים של שונות במדידות נאמדו בניתוח שונה ונמצא כי שוקל שלוש מדידות לבעלי חיים שונים למדידות הייתה על הסדר של 15% כי לבעלי חיים. לפיכך, בהתחשב בניתוח עדשה כולה, לא ניתן להגדיל את הדיוק. בדיקות אורתוגונלית הובהרו ניגוד מובהק ל- 3 caspase מסר בין מרווח 120 שעתי השהיה לעומת מרווחי השהיה קצרות יותר.
בחשיפת UVR vivo גורם ביטוי caspase-3.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מאמר זה מתאר שיטות המאפשרות לימוד אירועים מולקולריים המתרחשים במהלך UVR-B המושרה קטרקט.
בהתחשב, כי רוב המידע זמין לin vivo UVR המושרה קטרקט נגזר מניסויים בבקן ספראג-Dawley 7 חולדות, 16, 17, 18, 19, החליט להשתמש בעכבר לבקן ספראג-Dawley במחקר הנוכחי. הגיל של החולדות היה שישה שבועות ישן. המגדר נבחר להיות נשי כי, בניגוד לגברים, לנשים יש פחות שתן אלרגני. יתר על כן, אין הבדל במגדר ביחס לחומר.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי קרולינסקה KID-מימון הרשות, השבדית להגנה מפני קרינה, קרולינסקה עין קרן מחקר, אקדח och רטיל Stohnes Stiftelse, סנט אריק עין חולי קרן המחקר, Ögonfonden, Konung גוסטב החמישי: של och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שם המגיב | חברה | מספר קטלוגים | תגובות (אופציונלי) |
| Ketalar | פייזר | 150086 | 50 מ"ג / מ"ל |
| Rompun | אייר | 022545 | 20 מ"ג / מ"ל |
| סימפלקס Oculentum | Apoteket, שוודיה | 336164 | 5 גרם |
| Mydriacyl | אלקון | 00352 | 10 מ"ג / מ"ל |
| תמיסת מלח מאוזנת | אלקון | 0007950055 | |
| 3.5 ul β-mercaptoethanol | |||
| NucleoSpin רנ"א השני סך רנ"א בידוד הערכה | Macherey-נגל GmbH & Co, דארן, גרמניה | 740955.50 | |
| פריימרים ספציפיים DNA p53 | biomers.net GmbH | Custom made | |
| פולימראז תקי-DNA, dNTPack | רוש | 04 728 866 001 | |
| Agarose | סיגמא | A5093 | |
| פתרון רומיד ethidium 0.5 מ"ג / מ"ל | סיגמא | E1385 | |
| Nano-Drop ND-1000 ספקטרופוטומטר | מוצרי NanoDrop | ||
| ערכת 1 st סטרנד cDNA סינתזה לRT-PCR (AMV) | רוש האבחון GmbH | 11 483 188 001 | |
| מערכת iCycler MyiQ יחידה צבע בזמן אמת PCR זיהוי | Bio-Rad Laboratories | ||
| צלחת 96-היטב | Sarstedt | 72.1979.202 | |
| מיקס מאסטר ביטוי גני TaqMan | אפלייד Biosystems | 4369016 | |
| Assay ביטוי הגנים TaqMan ל3 caspase | אפלייד Biosystems | Rn00563902_m1 | |
| Assay ביטוי גני TaqMan ל18s | אפלייד Biosystems | Hs99999901_s1 | |
| MyiQ תוכנה | Bio-Rad Laboratories | ||
| caspase-3 בקע (Asp175) | טכנולוגיית תא איתות | 9661 | |
| נגד הארנב IgG | Abcam | Ab6798 | |
| סוכרוז | סיגמה אולדריץ | 84097 | |
| Vectashield | מעבדות וקטור | ||
| יוניברסל מיקרוסקופ Axioplan 2 דימות | Carl Zeiss | ||
| Paraformaldehyde | סיגמה אולדריץ | 441244 | |
| חיץ 10x TBE | Promega | V4251 |
מקורות
- Brian, G., Taylor, H. R. Cataract blindness: challenge for the 21 st century. Bulletin of the World Health Organization. 79, 249-256 (2001).
- Jose, J. G., Pitts, D. G. Wavelength dependency of cataracts in albino mice following chronic exposure.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
