Method Article

הפרוטוקולים מכתים עבור איי הלבלב אדם

DOI:

10.3791/4068

⸱

May 23rd, 2012

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology, Immunology, and Laboratory Medicine, University of Florida

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

סרט הווידאו הזה מדגים נהלים ואפיון של איים הלבלב אדם באמצעות hematoxylin ו eosin (H & E) ו אימונוהיסטוכימיה (IHC). סעיפים הלבלב מן הראש, הגוף, באזורים הזנב מוכתמות על ידי שני H & E ו-IHC לקבוע הרכב האנדוקרינית איון (אינסולין, גלוקגון, והלבלב פוליפפטיד), שכפול תאים (Ki67), וכן מחלחל דלקתיות (H & E, CD3). האזור אונקלי הוא מקומי באמצעות IHC של הלבלב פוליפפטיד.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אומדני השטח מספרים איון ותא האנדוקרינית הרכב בלבלב אדם מבוגר נע בין כמה מאות אלפים על טווחים המונים כמה מיליוני ובטא מ 500 עד 1500 מ"ג 1-3. עם ההטרוגניות זה ידוע, עיבוד רגיל הליך מכתים פותחה על כך אזורים הלבלב הוגדרו בצורה ברורה איים מאופיין באמצעות אנליזה פתולוגית בכליה קפדני בדיקות immunolocalization.

נהלים אחידים לעיבוד הלבלב האנושי התאושש תורמים איברים מתוארים בחלק זה של סדרה 1. הלבלב מעובד ל 3 אזורים עיקריים (ראש, גוף, זנב) ואחריו חלקים רוחביים. חלקים רוחביים של ראש הלבלב מחולקים עוד יותר, כפי שמצוין על פי גודל, ממוספרות לפי סדר אלפביתי לציון קטנים. סטנדרטיזציה זו מאפשרת ניתוח מלא חתך רוחב של אזור הראש כולל אזור אונקלי המכיל איים המורכביםבעיקר של תאים בלבלב פוליפפטיד לאזור הזנב.

הדו"ח הנוכחי מהווה חלק 2 מתוך סדרה זו ומתאר את הנהלים המשמשים חתך סדרתי ואפיון histopathological של פרפין סעיפים הלבלב עם דגש על תאים אנדוקריניים איון, שכפול, T-cell המחלחל. פתולוגיה של הלבלב סעיפים נועד לאפיין גם אקסוקרינית, ductular, ורכיבים אנדוקריניות. תא אקסוקרינית מוערך נוכחות של דלקת הלבלב (פעיל או כרוני), ניוון, סיסטיק, שומן, כמו גם מערכת צינורות, בעיקר ביחס לנוכחות של neoplasia הלבלב intraductal 4. איי מוערכים על מורפולוגיה, גודל, צפיפות, תאים אנדוקריניים, דלקת, פיברוזיס, עמילואיד, ואת הנוכחות של תאים אפופטוטיים משכפלים או באמצעות H & E ו-IHC כתמים.

המרכיב האחרון המתואר חלק 2 הוא מתן שקופית צבעוניתכמו דיגיטציה של תמונות שקופיות שלמים. השקופיות דיגיטציה מסודרים לפי המקרה באזור הלבלב במסד נתונים של הפתולוגיה מקוון ליצירת biobank וירטואלי. גישה לאוסף מקוון זה מספק כיום יותר מ -200 רופאים ומדענים העוסקים במחקר סוכרת מסוג 1. מסד הנתונים המקוון מספק אמצעי לשיתוף נתונים מהירה מלאה לחוקרים בחר אבני פרפין או חלקים סדרתיים קפואים.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Microtomy על סעיפים בלא כתם

  1. הגדרת אמבט מים microtome באשר microtomy פרפין סטנדרטי. השתמש שקופיות בעלי מטען חשמלי חיובי ושל מראש תווית עם מספר התיק, באזור הלבלב (לדוגמה) ואת מספר שקופיות. פרפין במקום לחסום צ'אק microtome עם תווית את הקלטת בצד שמאל.
  2. בצע את ההליכים microtomy רגילים, סעיף לבלוק עד רקמת הוא נתקל באופן אחיד. לייצר סרט של חלקים סדרתיים (4 מיקרומטר עבים, 3-6, תלוי כמה כתמים הנדרשים הראשונים (ראה מקרה הגשת טופס, נספח 1)). חלקים נפרדים סרט, לקחת את זה לפי הסדר, ומניחים על שקופיות עם סדר ספורים בעיפרון. לציין אם סעיף זה מנוצל על ידי מספור הסעיפים לפי סדר מדויק. לשמור על הכיוון אותו בשקופית כמו למצוא קלטת עם תווית שקופיות בכיוון שמאלה. יבש במשך הלילה בטמפרטורת החדר ולאחר מכן להמשיך עם כתמים או הפצה החוקרים.
  3. מילמשטח EAL של גוש פרפין עם שכבה דקה של פרפין לשמר רקמות ארכיון בטמפרטורת החדר או -20 ° C.
  4. עבור microtomy לאחר מכן, לשמור על מספור הסעיפים סדרתיים בכל רמה לעיל. קבל 1 שקופית נוספת על ידי כתם שקופיות H & E עבור כל רמה ~ 100 מיקרומטר בתוך כל בלוק.

2. H & E מכתים

  1. מניחים את השקופית הראשונה מחולק הסידורי של כל בלוק במעמד שקופית ואז במגש הראשון autostainer.
  2. בחר את התוכנית תקן H & E כתם ולהמשיך כרגיל.
  3. בסיום מכתים, להסיר את השקופיות מן autostainer ומניחים מכסה המנוע של coverslipping.
  4. Coverslip באמצעות טכניקה סטנדרטית. לייבש היטב את התווית עם תווית מודפס (ראה סעיף 12).

3. IHC Set-up

  1. בחר את התוכנית Dako עבור כתמים כפולים ומספרים קלט של שקופיות. הכן TBST ו ציטראט מאגרים, נוגדנים, reag אחרלהורים על פי כרכים שצוין (טבלה 1). טען את מגש מגיב שקופיות. הסיבוב של קווים נקיים פסולת מתוכנתים על פי המלצות היצרן.
  2. אם מבצעים את מבחני ידני, להכין כרכים כ. דגירה שקופיות חדר humidified להימנע שקופיות ייבוש החוצה בשלב כלשהו. בצע את אותו תהליך עבור כל ריאגנטים כמו בעת שימוש עבור autostainer.

4. IHC Deparaffinization ואחזור Antigen

  1. שים שקופיות קסילן במשך 5 דקות. חזור פעם אחת. אל תאפשר השקופיות להתייבש בכל שלב שלאחר מכן עד כמצוין זה יביא ברקע מוגזם מכתים עניים.
  2. העברת שקופיות אתנול 100% במשך 2 דקות. חזור פעם אחת.
  3. שים שקופיות מוכן טרי 3% H 2 O 2 ב מתנול במשך 10 דקות.
  4. טובלים שקופיות באתנול 90% ולאחר מכן למקם באתנול 90% במשך 3 דקות.
  5. העברת שקופיותאתנול 70% למשך דקה 1.
  6. יש לשטוף במים שקופיות דה מיונן.
  7. מחממים הספינה ואת מאגר ציטראט על הספינה במשך 5 דקות.
  8. הוסף שקופיות ציטראט חיץ קיטור ואדים במשך 30 דקות.
  9. מיד להעביר שקופיות מים ממושכת עד מחליק מצננים לטמפרטורת החדר (~ 20 דקות).
  10. העברת שקופיות מדפי autostainer Dako על פי כתם רצף (איור 1) ולהפעיל את תוכנית צביעה כפולה. הצעדים העיקריים של התוכנית autostainer מפורטים כך פועל ידניים יכול לשכפל.

5. נוגדנים הראשוניות (Ki-67, CD3, הלבלב פוליפפטיד)

  1. חסום שקופיות עם פתרון צלף במשך 15 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
  2. דגירה שקופיות הנוגדן העיקרי במשך 30 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
  3. דגירה עם עז Mach2 אנטי עכבר (Ki-67) או ארנבת אנטי (CD3, הלבלב פוליפפטיד) צנון סוס peroxidase (HRP) פולימר של 30 מ 'inutes. שטפו פעמיים עם TBST.
  4. החל 3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) לשקופיות עבור 4 דקות. לשטוף פעמיים במים.
  5. שקופיות מודגרות עם הלבלב פוליפפטיד מוחזקים על Dako בזמן הטיפול ושם ישקלו לו ויעריכו במקביל ו TBST המשמש את כל הצעדים הבאים תוך בשקופיות שנותרו מודגרת עם סט של 2 נוגדנים ראשוניים. לחלופין, עבור מבחני ידניים, המשך לסעיף 6.

6. נוגדנים ראשיים השני (אינסולין, גלוקגון)

  1. דגירה שקופיות דיב 20 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
  2. בלוק עם סרום 10% עיזים רגיל חוסם avidin 20% TBST (אינסולין) או צלף (גלוקגון) ב TBST במשך 20 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
  3. דגירה עם אינסולין או נוגדנים גלוקגון העיקרי במשך 15 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
  4. אינסולין: שקופיות דגירה של חזיר biotinylated עז נגד גינאה בדילול 1:300 במשך 30 דקות. שטפו פעמיים עם TBST. דגירה עם יש תקןctor ABC-AP מגיב במשך 30 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
  5. גלוקגון: שקופיות דגירה של חיץ במהלך 30 דקות ואחריו נגד העכבר עז אלקליין phosphatase (AP) פולימרי במשך 30 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
  6. בעוד שקופיות מודגרת ב conjugates, לחמם את מאגר LPR לטמפרטורת החדר. הוסף 1 טיפה של נוזל אדום קבע (LPR) לכל מאגר מ"ל 3 מיידית לפני השימוש במקום במעמד מגיב Dako. דגירה שקופיות LPC במשך 4 דקות. לשטוף פעמיים במים.
  7. דגירה שקופיות hematoxylin דקה 1. יש לשטוף פעמיים במים.
  8. דגירה שקופיות כפות pH 7.6 דקה 1. יש לשטוף פעמיים במים.
  9. לפרוק שקופיות מ DAKO Autostainer.
  10. מיד מייבשים שקופיות מוכתמים על הלבלב פוליפפטיד. עבור כל השקופיות מוכתמים כפולות, יבש לפחות שעה 1 ואז מייבשים.

7. התייבשות

  1. במקום שקופיות באתנול 80% למשך דקה 1.
  2. טובלים שקופיות באתנול 95%. החזק שקופיות באתנול 95% למשך 30 שניות.
  3. העברת שקופיות אתנול 100% והחזק 1 דקה. חזור.
  4. טובלים שקופיות קסילן.
  5. החזק שקופיות קסילן דקה 1. חזור.
  6. מיד לעלות coverslips בשקופיות באמצעות cytoseal.

8. Slide סימון

  1. הזן את זיהוי המקרה המידע כולל מספר איברים אבן, כתם, ותאריך ולהדפיס. בסעיף מספר סידורי הוא אופציונלי על הכתמים השקופית הראשונה של כל בלוק. רמות הבאים מסומנים על ידי מספור.
  2. מניחים תוויות בשקופיות.

9. שקופיות סריקה

  1. מניחים במגש שקופיות צבעונית, סורק לסרוק פי מכשור.
  2. לארגן שקופיות לפי סוג התורם ורקמות (ראש הלבלב, גוף, זנב, טחול).
  3. שקופיות ארכיון מוכתמים בטמפרטורת החדר וכל שקופיות בלא כתם הנותרים ב -20 ° C עד בשימוש.

10. Representative תוצאות

נהלים אלה צביעה פותחו עבור רשת JDRF לעוגב תורמים הלבלב עם סוכרת (nPOD) כדי לספק אפיון בסיסי של פרפין בלוקים קפואים טריים. תורם לכל אחד מהם יש אפיון המחקר ביצע מורכב מכתים 2 בלוקים כל אזור הלבלב (ראש, גוף, זנב) ואת הטחול (איור 1, ראו גם טופס הגשת התיק, נספח 1). צביעת H & E נעשה באמצעות autostainer מתוכנת כמו מתקן קלינית קליני כיתה פתרונות המשמשים לאורך כל הדרך. כמו אבני התורמות נוספים הם מחולק, לכל שקופית מובנת H & E להראות מורפולוגיה רקמות. כאשר הם אבני מחולק שוב, כמו להפצה החוקרים, רמות עמוקות יותר יהיה גם שקופיות שצולמו עבור נציג H & שקופיות ה לתעד את המורפולוגיה של הרקמה בלוק שלם כמו גם מספור הסעיפים סדרתיים בכל רמה. שקופיות ויטראז מסומנים עםזיהוי מקרה, באזור הלבלב, מספר בלוק, כתם ותאריך (איור 2) וסקר את מערכת ניהול מידע באינטרנט הפתולוגיה. תמונות מייצגות מתורם השליטה מוצגות באיור 3 בשני בהגדלה נמוך וגבוה להראות התוצאות הצפויות בעקבות הליך זה. מוכתם שקופית עם הלבלב פוליפפטיד (D, H) ושם ישקלו לו ויעריכו היה ביום אחר עם assay באופן ידני ומראה עוצמת מכתים מופחת של counterstain hematoxylin. הבדלים מכתים עוצמת נוגדנים ראשוניים או counterstain בין מבחני יש להימנע במיוחד אם באמצעות ניתוח תמונה אחרת עם מחליק דורשים תיקון צבע הפרט כדי להשיג את אותו התא או אזורים ספירות.

כל מעבדה צריך לצפות כדי לייעל את ריכוזי הנוגדנים כמו הרבה אל הווריאציה הרבה חומרים כימיים אחרים ותנאים יכול להשפיע בעוצמה מכתים וספציפיות. עם הרכישה של ניו ריאהרבותי, נהלים מכתים מאומתים עם דגימות הידועות בקרה חיוביים ושליליים כדי להשיג את אותה מידה של עוצמת הכתם כמו ריאגנטים לשעבר. נוגדנים נוספים אופטימיזציה בליבת nPOD הפתולוגיה ניתנים בטבלה 2 כמקור התייחסות שימשו במשך multilabeling מבחני immunofluorescence עבור מיקרוסקופיה confocal.

figure-protocol-1
באיור 1. רשת Dako מכתים. סכמטית זה מתאר ניתוח שגרתי מהלבלב התורם nPOD שבוצעה על autostainer Dako. התורמים nPOD מוצפנים עם מספר בן 4 ספרות זיהוי. שני מגשי שקופיות מוצגים עם שקופיות מאורגנות על ידי כתם. תצורות חלופיות שקופיות צפויים תלוי במספר שקופיות התורמות. בקרות חיוביות כוללים הכללת תורם חיובית ידוע על שני כתמים כפולים הטחול התורם עבור Ki-67 ו CD3. בקרות שליליות הן כפולה וכוללים 2 SLIדה מבלוק אחד תורם הלבלב מודגרות עם אימונוגלובולינים (איג) מן המין המארחות של נוגדנים ראשוניים שתי שקופיות של הטחול התורם עבור אינסולין גלוקגון.

figure-protocol-2
איור 2. נציג שקופית צבעונית כפולה. שקופיות המוגמר טיפוסי מוצג עם תיוג פרמטרים שקופיות השמה רקמות לפני סריקה דיגיטלית מבוצעת.

figure-protocol-3
איור 3. נציג H & E וכתמים IHC בסעיפים הלבלב. סעיפים מהלבלב של תורם האיבר הנשי הבוגר (6096-04 PanHead) היו מוכתמות סריקות דיגיטליות שבוצעו כמפורט בפרוטוקול. התמונות התקבלו באמצעות תוכנית ImageScope ההצגה של סעיף שלם (AD) ומ איון 1 (EH). את עוצמות איון צפוי כתם של אינסולין, גלוקגון, והלבלב פוליפפטיד הםציין עבור חלקים BD כמו משרטטת פרק ד ', כי זה בלוק בראש הלבלב מכיל חלק קטן של האזור אונקלי או באונה הלבלב הגחון כמו איים כולם מכילים בעיקר פוליפפטיד חיובי בתאי הלבלב. שים לב counterstain hematoxylin בלוח D הוא קל מדי בזמן hematoxylin counterstain עוצמות ב B ו-C הם אופטימליים. לוחות EH להראות איון מהאונה הגב עם ההפצה מצופה מתאי בטא ו α-תאים. התאים בלבלב כמה פוליפפטיד נמצאים בחלק השמאלי התחתון של איון (H). , E-H &E; B, F-Ki67 + אינסולין, C, G-CD3 + גלוקגון, D, H-הלבלב פוליפפטיד. לספירה, 0.2X, EH-12.8x.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

סטנדרטיזציה של תהליכי IHC הוא קריטי לניתוח תמונה, במיוחד בעת שימוש במחשב מבוסס אלגוריתמים על פני מספר גדול של שקופיות לאורך זמן. הליך מכתים IHC המתואר בדוח זה יאפשר ניתוח סדרה של דגימות של תורמים ניתן באמצעות autostainer תוך יום 8 שעות עבודה משתנים מן הדו"ח הקודם 5. דיגיטציה שקופיות שלמים של כל שקופית צבעונית לרשות nPOD המזוהים עם החוקרים באמצעות מערכת מבוססת אינטרנט הפתולוגיה באינטרנט. החוקרים יכולים לבדוק נתונים דמוגרפיים, נתונים התורמות מעבדה, אחר ההיסטוריה קלינ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אין ניגוד עניינים הצהיר.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מודים משפחות של תורמים איברים הרכש ארגונים העוסקים במחקר זה ואמילי מונטגומרי, רוברט Pietras, אן פו, Mitali Agarwal, ו רושאן Agarwal לסיוע המומחה שלהם. עבודה זו מומנה על ידי Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T.) בתמיכה של רשת לעוגב תורמים הלבלב עם סוכרת.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
שם מגיב חברה מספר קטלוגי תגובות
מי חמצן 30% (H 2 O 2) FisherScientific H325-500 Peroxidase אנדוגני חסימת
ABC-phosphatase אלקליין (AP) וקטור AK-5000 AP המצומד
נוגדנים diluent Invitrogen 003218 ראשי נוגדן
Avidin חוסם וקטור SP-2001 חסום ביוטין אנדוגני
עיזים Biotinylated נגד חזיר ים וקטור BA-7000 משני הנוגדנים
Bluing מגיב FisherScientific 7301 לייקה autostainer
מאגר ציטראט, ה-pH 6.0 BioGenex HK086-9K Antigen אחזור
Clarifier 1 FisherScientific 7401 לייקה autostainer
Cytoseal XYL FisherScientific 8312-4 Coverslip mountant
DAB וקטור SK-4100 HRP אב צבע
דיב DAKO S2003 AP אנדוגני חסימת מגיב
Eosin אלכוהולי Y FisherScientific 71204 לייקה autostainer
Ethanols-100%, 95%, 90%, 70% FisherScientific שונים Deparaffinization ו coverslipping
Hematoxylin DAKO S3301 Dako autostainer
Hematoxylin 7211 FisherScientific 7211 לייקה autostainer
IgG (כל המינים המארחות של נוגדנים ראשוניים) שונים שונים בקרות שליליות על הפריימריז
אדום קבע נוזלי (LPR) DAKO K0640 AP אב צבע
Mach2 AP Biocare רפואי MALP521L אנטי עכבר עיזים AP המצומד
Mach2 HRP Biocare רפואי MHRP520L אנטי עכבר עיזים HRP המצומד
Mach2 HRP Biocare רפואי RHRP520L אנטי עכבר עיזים HRP המצומד
מתנול FisherScientific שונים H 2 O 2 diluent
עז רגיל סרום וקטור S-1000 IHC מגיב חסימת
צלף Biocare רפואי BS966M IHC מגיב חסימת
TBST 20X ThermoScientific מדד ת"א 999-TT IHC חיץ
Triology 20x תא Marque 920P-06 Antigen אחזור
קסילן FisherScientific שונים Deparaffinization ו coverslipping

טבלה 1. חומרים כימיים ספציפיים.

ראשי נוגדן המארחות מינים מוכר החתול. # תגובות ואחזור Antigen
פרפין
עמילאז עכבר סנטה קרוז SC-46657 ציטראט
Amylin עכבר Serotec MCA11267 ציטראט
פחמתית anhydrase 19.9 עכבר Abcam ab15146
Caspase-3, ביקע ארנב התא איתות 9961 ציטראט או הטרילוגיה
CD20 עכבר DAKO M0755 ציטראט או הטרילוגיה
CD3 ארנב DAKO A0452 ציטראט
CD34 עכבר התא איתות 3569 ציטראט
CD4 עכבר DAKO M7310 ציטראט
CD45 עכבר DAKO M0754 ציטראט
CD68 עכבר DAKO M0876 ציטראט
CD8 עכבר DAKO M7103 ציטראט
Chromogranin ארנב DAKO A0430 ציטראט
CK17 עכבר DAKO M7046 ציטראט
CK19 עכבר DAKO M0772 ציטראט
CK7 עכבר DAKO M7018 ציטראט
C-peptide ארנב התא איתות 4593 ציטראט
Foxp3 עכברוש Bioscience דואר 14-4776-80 ציטראט
גרלין עז סנטה קרוז SC-10386
גרלין ארנב Abcam ab85104
גלוקגון ארנב DAKO A0565
גלוקגון עכבר Abcam ab10988 ציטראט
גלוקגון חזיר ים Bachem T-5037 ציטראט
שפע-1 עכבר Abcam ab40084 טרילוגיה
שפע-2 ארנב סנטה קרוז SC-9117 לא באה לידי ביטוי איים אדם
אינסולין חזיר ים DAKO A0564
Ki-67 עכבר DAKO M7240 ציטראט
Mafa ארנב נובוס ביולוגית NB400-137A טרילוגיה
פוליפפטיד הלבלב ארנב Invitrogen 18-0043 ציטראט
PDX-1 חזיר ים Abcam ab47308 ציטראט או הטרילוגיה
Proinsulin עכבר Novocastra NCL-proin-1G4
Proinsulin עכבר התפתחותית מחקרים Hybridoma בנק GS-9A8 ציטראט
Secretagogin ארנב סיגמא HPA 006641 ציטראט
שריר חלק אקטין ארנב Abcam ab5694
Somatostatin ארנב DAKO A0566
Synaptophysin עכבר DAKO M0776 ציטראט
טרי קפוא המארחות מינים מוכר החתול. # תגובות
CD11b עכברוש Abcam ab6332 תקן עם PF 4%
CD11c ארנב Serotec AHP1226
CD25 עכבר נובוס ביולוגית נ.ב. 600-564 השתמש הדגירה לילה עבור חלקים פרפין
CD94 עכבר Abcam ab61874 תקן עם אצטון
GAD65 עכבר סנטה קרוז SC-130569 תקן עם PF 4%
HLA-ABC עכבר DAKO M0736 תקן עם אצטון או PF 4%

טבלה 2. נוגדנים ראשיים.

שם מגיב חברה מספר קטלוגי תגובות
Aperio Scanscope CS Aperio שקופית סורק דיגיטלי
DAKO Autostainer פלוס DAKO IHC כתמים
מטריקס לייבל הדפסה תוכנה BioCarta LM7UP57 התווית שקופיות תוכנה
לייקה XL Autostainer Leica H & E כתמים
פרימיום Coverglass FisherScientific 12-548-5j Coverslip
מידע קשת Manager Aperio סורק תוכנות
Superfrost פלוס מחליק FisherScientific 12-550-15 מטען חשמלי חיובי שקופיות
ירקות קיטור שחור דקר שונים Antigen אחזור
Zebra TLP 3742 CDWG TLP3742 התווית שקופיות מדפסת

לוח 3. אספקה ​​וציוד ספציפיים.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. In't Veld, P., Marichal, M. Microscopic anatomy of the human islet of Langerhans. Adv. Exp. Med. Biol. 654, 1-19 (2010).
  2. Matveyenko, A. V., Butler, P. C. Relationship between beta-cell mass and diabetes onset. Diabetes Obes. Metab. 10, Suppl . 4. 23-31 (2008).
  3. Saisho, Y. Pancreas volumes in humans from birth to age one hundred taking into account sex, obesity, and presence of type-2 diabetes. Clin. Anat. 20, 933-942 (2007).
  4. Hruban, R. H. Pancreatic intraepithelial neoplasia: a new nomenclature and classification system for pancreatic duct lesions. Am. J. Surg. Pathol. 25, 579-586 (2001).
  5. Campbell-Thompson, M. Pancreatic adenocarcinoma patients with localised chronic severe pancreatitis show an increased number of single beta cells, without alterations in fractional insulin area. Diabetologia. 52, 262-270 (2009).
  6. Meier, J. Beta-cell replication is the primary mechanism subserving the postnatal expansion of beta-cell mass in humans. Diabetes. 57, 1584-1594 (2008).
  7. Rowe, P. A., Campbell-Thompson, M. L., Schatz, D. A., Atkinson, M. A. The pancreas in human type 1 diabetes. Semin. Immunopathol. 33, 29-43 (2011).
  8. Veld, I. n't, P, Insulitis in human type 1 diabetes: The quest for an elusive lesion. Islets. 3, 131-138 (2011).
  9. van Belle, T. L., Coppieters, K. T., von Herrath, M. G. Type 1 diabetes: etiology, immunology, and therapeutic strategies. Physiol Rev. 91, 79-118 (2011).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Pancreatic IsletsHistopathologyImmunohistochemistrySerial SectioningParaffin SectionsH E StainingWhole Slide ImagesOnline Pathology DatabaseType 1 DiabetesTissue Processing

Related Articles