הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

Readout מולקולרי של הסתגלות חוש ריח לטווח הארוך ב

10.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/4443

⸱

22 בדצמבר 2012

 ,  ,  , 
1Department of Biological Sciences and Institute for Neuroscience, George Washington University, 2Fred Hutchinson Cancer Research Center, 3Department of Cell and Tissue Biology, University of California San Francisco

במאמר זה

סיכום

כאן אנו מתארים readout מולקולרי של הסתגלות חוש ריח לטווח הארוך ב Elegans Caenorhabditis. קינאז G, EGL-4, החלבון הוא הכרחי לתגובות הסתגלות יציבות בזוג נוירון החושי הראשוני נקרא AWC. במהלך-4 EGL translocates הממושך ריח מהחשיפה cytosol לגרעין של AWC.

תקציר

במהלך גירוי מתמשך נוירונים החושיים ביותר יהיה להתאים את תגובתם על ידי הפחתת רגישותם לאות. תגובת ההסתגלות מסייעת תשומת לב צורה וגם מגנה על תאים מגירוי יתר. הסתגלות בתוך מעגל חוש הריח של ג elegans תואר לראשונה על ידי קולבר וBargmann 1,2. הנה, החוקרים הגדירו פרמטרים של הפרדיגמה הסתגלות חוש הריח, שהם משמשים לעיצוב מסך גנטי לבודד מוטנטים פגומים ביכולתם להסתגל לריחות נדיפים חשו על ידי התאים מסוג C (AWC) נוירונים אגף Amphid החושיים. כאשר wildtype ג חי elegans נחשפות לריח אטרקטיבי AWC-חש 3 למשך 30 דקות הם יתאימו את היענותם לריח ואז יהיה להתעלם מריח ההתאמה בבדיקה התנהגותית chemotaxis ל~ 1 שעה. כאשר wildtype ג חי elegans נחשפות לריח אטרקטיבי AWC-חש ל~ 1 שעה ואז הם יוכלו להתעלם מהריח בהתאמת acבדיקה התנהגותית hemotaxis ל~ 3 שעות. שני שלבים אלה של הסתגלות חוש ריח בג elegans תואר כהסתגלות קצרת טווח הרחה (מושרה לאחר חשיפת ריח דק 30), והסתגלות הרחה ארוכת טווח (הנגרם לאחר חשיפת ריח דק 60). מאוחר יותר לעבוד מאטואל et al., 4 חשפו חלבון קינאז G (pkg) נקרא EGL-4 שנדרש עבור שניהם הסתגלות הרחה קצרת טווח וארוך טווח בנוירונים AWC. EGL-4 החלבונים מכילים רצף לוקליזציה גרעיני שהוא הכרחי לתגובות ארוכות טווח הרחת הסתגלות אך dispensable לתגובות הסתגלות הרחה קצרת טווח ב4 AWC. על ידי תיוג EGL-4 בחלבון פלואורסצנטי ירוק, אפשר היה לדמיין את הלוקליזציה של EGL-4 בAWC במהלך חשיפה הממושכת ריח. שימוש הפונקציונלי מלא זה GFP-tagged EGL-4 (GFP :: EGL-4) מולקולה הצלחנו לפתח readout מולקולרי של הסתגלות חוש ריח לטווח ארוך ב5 AWC. שימוש מ 'זהreadout olecular הסתגלות הרחה היינו מסוגל לבצע שני מסכים גנטיים קדימה לאחור כדי לזהות בעלי חיים מוטנטים כי תערוכה פגומה דפוסי subcellular לוקליזציה של ה-GFP :: EGL-4 ב6,7 AWC. כאן אנו מתארים: 1) הבנייה של ה-GFP :: EGL-4 חיות מבטאות, 2) הפרוטוקול לגידול של בעלי חיים למבחני טרנסלוקציה ריח מושרה גרעיניים לטווח ארוך, ו3) הניקוד של הטווח ארוך הריח המושרה אירוע גרעיני טרנסלוקציה והתאוששות (מחדש רגישות) מGFP הגרעיני :: מדינת EGL-4.

פרוטוקול

1. בנייה של ה-GFP תייגה EGL-4 בעלי חיים מבטאים

  1. שיבוט ההיתוך GFP translational :: EGL-4 תחת האמרגן לגן ODR-3 (שימוש 2678 נ"ב ישירות במעלה זרם של קודון ההתחלה): (עמ ') ODR-3 :: GFP :: EGL-4. ODR-3 כונני אמרגן הביטוי בזוגות נוירון amphid: AWA; AWB; AWC; וחולשה באפר.
  2. מזריק פלסמיד (p) ODR-3 :: GFP :: EGL-4 לחי wildtype (N2) בגיל 50 ng / μl עם סמני הזרקה משותפת תוך שימוש בטכניקות ניבטה שורת טרנספורמציה סטנדרטיות 8: (עמ ') הפרנציסקאני-1: : 9-GFP (25 ng / μl), ו( p) ODR-1 :: dsRed 10 (25 ng / μl). ODR-1 ביטוי אמרגן כוננים בזוגות AWB amphid נוירון AWC ו, וביטוי הפרנציסקאני-1 אמרגן הכוננים בcoelomocytes.
  3. להכפיף את בעלי החיים המהונדסים המבטאים את מערכי extrachromosomal המפורט בשלב 1.2 לסגולים (UV) / פרוטוקול האינטגרציה trimethylpsoralen (TMP)11.
  4. האקונומיקה לסנכרן את חי 12 ולטפח אותם על צלחות צמיחה נמטודות מדיה (NGM) המכילות OP50 E. coli לL4 הבמה. שטוף L4 חי מצלחות NGM עם M9 חיץ להסיר OP50 E. חיידקי קולי.
  5. הסר חיץ M9 ולהוסיף 50-100 μl של 30 מיליליטר פתרון TMP עובד על תולעת הגלולה בצינור microcentrifuge המ"ל 1.5 מיקרוגרם /. עטוף את צינור microcentrifuge המ"ל 1.5 בנייר כסף כדי לחסום אור הסביבה, ולהתסיס בעדינות על כתף במשך 15 דקות בצינור microcentrifuge העטוף בנייר האלומיניום 1.5 מ"ל. להעביר את התולעים בפתרון TMP / תולעת לצלחת NGM unseeded גדולה.
  6. לחשוף את התולעים בצלחת NGM לUV 350 μJ (x100) באמצעות 2400 Stratalinker. ואז להוסיף תולעים לצלחת NGM OP50 מכילה ודגירה בחושך במשך 5 שעות.
  7. פיק 50 תולעים מהונדסים לכ 10 צלחות seeded (2-5 תולעים כל צלחת). העברת P0 זה לצלחות חדשות בכל שעות 24 במשך 3 ימים.
  8. פיק F1 משובט 250nimals (חיה 1 לכל צלחת). לשכפל את חי 2-4 F2 מכל צלחת F1. בדקו חי F3 כדי לחפש 100% קו הולכה מלהסתכל (עמ ') הפרנציסקאני-1 :: דפוס ביטוי של GFP תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי לנתח.
  9. Outcross קו הגמר המשולב (הים) עם בעלי חי N2 wildtype 5 פעמים. אנחנו נתייחס לקו המשולב הסופי כpyIs500, ו- 4 EGL מולקולת GFP מתויג כ- GFP :: EGL-4.

2. טיפוח ותחזוקה של בעלי חיים למבחנים טרנסלוקציה גרעיניים

  1. לטפח את pyIs500 החיות ב 25 ° C על 10 צלחות NGM סנטימטר הסטנדרטי (ראה בהמשך למתכון) seeded עם OP50 E. החיידק אשריכיה קולי 13 (איור 1).
  2. ביום 1, לקחת 4-5 L4 pyIs500 חיות מצלחות מעובדות ב 25 ° C על חמישה 10 סנטימטרים נפרדים OP50 E. coli נזרע צלחות ולדגור על 25 מעלות צלזיוס (כלומר, 4-5 L4 חיות לצלחת).
  3. ביום 4, לשטוף מבוגרים עמopulations של pyIs500 חי מהצלחות NGM הגדולות באמצעות חיץ S-Basal (ראה בהמשך למתכון). השתמש pipettes זכוכית חד פעמי להעברת בעלי חיים, כפי שהם יידבקו לצד טיפי פיפטה פלסטיק.

3. מבחני טרנסלוקציה גרעיני ריח לטווח ארוך מושרה

  1. שטוף את pyIs500 החיות 3 פעמים ב- Basal S כדי להסיר חיידקים. אל סרכזת חיות בין כביסות, אלא לאפשר לבעלי החיים להתיישב על ידי הכח הכביד בצינור microcentrifuge נייח 1.5 מ"ל. זה קריטי כדי להבטיח את כל החיידקים הוסרו, וכי פאטה NGM חופשי מזיהום, כשיירי חיידקים ישפיעו לרעה על תוצאותיה של בדיקת טרנסלוקציה. כמו כן, מצאנו כי מעוקר של 1.5 צינורות מיליליטר microcentrifuge מייצר רכוש "דביק" על הקירות הפנימיים של הצינור שגורם לבעלי חיים כדי להיצמד לצדדים, ואז להשתמש בצינורות 1.5 מיליליטר microcentrifuge הלא autoclaved.
  2. בעוד בעלי חיים ליישב בין כביסות, איפור לאהוא התאמת פתרון. הוסף 100 מ"ל של חיץ S-Basal לצילינדר לימודיו 100 מ"ל. הוסף להתאים ריח ל- S אסאל ולאטום את הגליל באמצעות רצועה של Parafilm. אם ביצוע התאמת benzaldehyde להוסיף 7.5 μl של benzaldehyde עד 100 מ"ל של-S אסאל, להסתגלות butanone להוסיף 11 μl של 2-butaone עד 100 מ"ל של-S אסאל. בעדינות להפוך (לא לנער) הגליל סיים המכיל S-בסיס וריח פי 30 כדי ליצור אמולסיה אחידה.
  3. לאחר השטיפה הסופית ב- S אסאל, לאפשר את בעלי החיים כדי להתיישב ולהסיר את כל הנוזלים. צינור תווית 1 "+ יש" או "להתאים" וצינור "יש" או "unadapt" האחר. ואז להוסיף 1 מ"ל של תערובת ההסתגלות לצינור microcentrifuge ההסתגלות (+ יש), ולהוסיף 1 מ"ל של-Basal S לצינור microcentrifuge שליטת unadapted (-VE). נסה לשמור על מספר בעלי החיים בין 100 ל 200 בכל צינור. בעזרת תרגול מסוים, ניתן להעריך את המספר המשוער של בעלי חיים בגלולה על ידי עין.
  4. הנח 1.5 מ"ל microcentrifuge צינור כובע מגןלכל צינור (מונע מעפעפיים פתוחים popping) ולמקם את הצינורות במסובב ל80 דקות. מצאנו כי חשיפת ריח בין 60 דקות ו 80 דקות מניבה תוצאות דומות (שניהם התוצאה בתגובות הסתגלות לטווח ארוך). עם זאת, 80 דקות חשיפה מספקת תוצאות עקביות יותר בידות שלנו. לכן כל מבחני ההסתגלות ארוך הטווח שלנו הם טופלו באמצעות חשיפת ריח דקות 80 (איור 2).
  5. לאחר 80 דקות, לשטוף את החיות 3 פעמים ב- S אסאל. אפשר חיות להתיישב על ידי כוח המשיכה בין כל שטיפה.

4. מבחני טרנסלוקציה גרעיניים קצר טווח ריח מושרה

  1. במקרה של ריח הסתגלות לטווח קצר, השתמש באותו פרוטוקול של מבחנים לטווח ארוך-Induced ריח טרנסלוקציה (צעדים 3.1-3.4), לעומת זאת, במקום דוגר את pyIs500 חיות בהתאמת ריח ל80 דקות, השתמש חשיפת 30 דקות . כימות של מבחני טרנסלוקציה גרעיניים ריח מושרים מפורטים להלן (שלב 5) היא זהה לטווח ארוך וקצר terחשיפות מ.

5. בקיע אירוע טרנסלוקציה הגרעיני ריח המושרה

  1. הפוך רפידות המכילות 2% agarose יזיד הנתרן mM 5 (3 NaN) על ידי המסת ג'ל אלקטרופורזה agarose בDH 2 0. הנח טיפה אחת של agarose המותך המכילה 3 NaN בשקופית מיקרוסקופ זכוכית. מייד למקם את שקופית מיקרוסקופ עוד כוס בשקופית הראשונה לשטח טיפת agarose המותך. השאר למשך 30 שניות, ואז בעדינות להקניט מלבד מיקרוסקופ מחליק עוזב שקופית מיקרוסקופ אחד עם משטח שטוח של agarose ~ 1 מ"מ.
  2. לאחר השטיפה הסופית ב- S אסאל, לאפשר את התולעים להתיישב בצינור microcentrifuge המ"ל 1.5 ולהסיר את כל הנוזלים. ואז להוסיף את החיות החכמות שחרר את הכריות על agarose של כמה שקופיות מיקרוסקופ. זה חשוב כדי לשמור את מספר בעלי חיים לכל שקופית לבין 50 ל 100. בעלי חיים רבים מדי לכל שקופית יסבכו את הניקוד ולעתים קרובות ליצור זוהר פיזור לאחר עירור אור כחול. נוזל עודף רשאילהיות רשע מagarose המשטח באמצעות קטן קים-לנגב. הנח זכוכית 0.5 מ"מ כיסוי החלקה על המשטח ולתת לעמוד ל2 דקות כדי לאפשר ל3 NaN, כדי לשתק את בעלי החיים. שים לב, בעלי חיים יכול להיות התאושש מהשקופיות לאחר ניקוד. בעלי החיים יתאוששו מNaN 3 ההרדמה לאחר שעות ~ 1 אם הועברו לצלחת NGM seeded לירידה של מאגר M9.
  3. בנקודה זו הוא הכרחי כי כל ניסוי להמציא מפתח כדי לעקוב אחר איזו שקופית היא ניסיונית השקופית (+ יש) ואיזו שקופית הוא השליטה (-ve) שקופית, ולהעביר את השקופיות לאדם אחר שיהיה עיוור להבקיע GFP: 4-EGL דפוס לוקליזציה. זה יהיה לשלוט על כל הטיות נסיין.
  4. ציון בין 50 ל 100 חיות לכל שקופית באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי זקוף עם יעדי גדלה 10x, 40X ו63X ומסנני GFP / RFP. ראשית, אתר חיות בהגדלת 10X באמצעות תאורה בהירה שדה. שנית, אתר נוירון AWC ידי כיבוי brighתאורת t-תחום ובאמצעות RFP המסנן. את (p) ODR-1 :: כונני dsRed ביטוי בשטרי מטען ונוירונים AWC. הנוירונים AWC יש גופי תא ייחודיים סגלגלים בצורה בהשוואה לגופי תא AWB שהם קטנים ומעוגלים (איור 2).
  5. ברגע שגוף התא AWC כבר נמצא, לעבור לGFP המסנן ולהקליט הלוקליזציה של ה-GFP: EGL-4 כגרעיניים או cytoplasmic. שימוש בדלפק מאפשר הנסיינית להמשיך לחפש לעיני בעוד בקיע השקופית. הערה: 5.1-5.5 צעדים הם חוזרים לפחות 3 פעמים בימים נפרדים להפקת נתונים סטטיסטיים משמעותיים (איורים 1-2).

6. ניטור GFP-tagged EGL-4 במהלך השחזור מהסתגלות ריח לטווח הארוך

  1. לאחר השלב 3.5, לחלק את האוכלוסיות של בעלי חיים לpyIs500 aliquots המרובים וציון לGFP הגרעיני לעומת cytoplasmic :: EGL-4 בAWC בנקודת אפס זמן (כלומר, לאחר חשיפה דקה 80) ומטרנקודתי ultiple עוקבות בזמן (איור 3).
  2. להעביר גם את השליטה (-VE) וניסיוניות חיות (+ יש) באמצעות pipettes זכוכית חד פעמי על צלחות NGM.
  3. אפשר חיות להתאושש לאורכים שונים של זמן והלוקליזציה לבחון מחדש של ה-GFP :: EGL-AWC 4in בכל נקודת זמן כמו בשלבים 5.1 עד 5.5.

7. חומרים

צלחות NGM: עבור 1 ליטר להוסיף עד 1 ליטר DDH 2 0: 21 Bacto-אגר גרם, 3 גרם כלוריד הנתרן (NaCl); 2.5 גרם Bacto-Peptone. מדיה חיטוי. לאחר מעוקר, המגניב אגר עד שהטמפרטורה קוראה 54 ° C. הוסף את הפתרונים הבאים: מאגר 25 מ"ל 1M אשלגן פוספט; 1 סולפט מ"ל 1 ז מגנזיום (MgSO 4); 1 כלוריד מ"ל 1 ז סידן (CaCl 2); כולסטרול 1 מ"ל באתנול (5 מניות מ"ג / מ"ל).

1 ז Dibasic K 2 HPO 4 174.2 g / mol: עבור 500 מ"ל: 400 מ"ל בDDH 2 O, להמס 87.1 גרם Dibasiג K 2 HPO 4. התאם נפח 500 ליטר עם DDH 2 O. סנן לעקר באמצעות יחידת סינון סטרילי 500 מ"ל.

1 ז Monobasic KH 2 PO 4 136.1 g / mol: עבור 1 ליטר: 800 מ"ל בDDH 2 O, לפזר 136.1 גרם Monobasic KH 2 PO 4. התאם נפח 1 ליטר עם DDH 2 O. סנן לעקר באמצעות יחידת סינון סטרילי 500 מ"ל.

פוספט אשלגן 1 ז (3 K PO 4) 6.0 pH Buffer: עבור L 1: ביחידת סינון סטרילי 1 ליטר, 868 מ"ל להוסיף M Monobasic KH 1 2 PO 4. אפשר לסנן הדרך יחידה, ואז מוסיף 132 מ"ל של 1 M Dibasic K 2 HPO 4. אפשר יחידה כדי לסנן את כל הנוזלים. הסר יחידת סינון ולהתאים את רמת חומציות עד 6.0. לאחסן בטמפרטורת חדר.

S-Basal: עבור L 1: להוסיף 50 1M 3 4 הצפת מיליליטר K PO, pH ~ 6.0; ו5M המ"ל NaCl aq 20. מלא ל1 ליטר עםDDH 2 O. חיטוי פתרון.

M9: עבור 1 ליטר: 3 גרם KH 2 PO 4, 6 גרם Na 2 4 HPO, 5 גרם NaCl, 1 מ"ל 1 ז 4 MgSO, H 2 O. מלא ל1 ליטר עם DDH 2 0. לעקר ידי מעוקר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

דוגמה לדפוס הלוקליזציה של ה-GFP :: EGL-4in AWC לפני ואחרי חשיפה ממושכת ריח מוצגת באיור 2. לפני החשיפה ממושכת ריח, GFP :: EGL-4 הוא מקומי לcytosol של AWC (איור 2 ב '), ולאחר 80 דקות ריח החשיפה GFP :: EGL-4 הם מקומי לגרעין של AWC (האיור 2D). ברמת ההתנהגותית, חיות עם cytosolic GFP :: EGL-4 בAWC נמשכות לנקודת מקור של ריח (האיור 2C גרפי נציג תוצאות ממבחני Chemotaxis של חי unadapted - לב מדד chemotaxis 3 ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הכניסה הגרעינית ריח המושרית של EGL-4 מולקולת ה-GFP-tagged המתואר כאן מספק readout מולקולרי חזק של הסתגלות חוש ריח בג elegans. מבחני טרנסלוקציה הגרעיניים ריח המושרים הם פשוטים ודורשים רק כמה ימים ארוכים של הכנה. PyIs500 החיה שבנינו עבור מבחנים אלה, מבטאת את סמן שמאיר את הנוירון AWC כמו גם מבטא את חלבון ה-GFP מתויג-EGL-4. לפיכך, אנו סבורים כי ניסוי עם מעט ניסיון בעבודה עם המעמד הזה של נוירון יכול מהר מאוד (אולי לאחר שבחן כמה עשרות בעלי חיים) מתחיל להרגיש בנוח זיהוי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

תודות

ברצוננו להודות לסקוט המילטון, וחברי המעבדה 'האלורן לקריאה מדוקדקת של כתב היד הזה. אנו מודים גם למבקר האנונימי שלנו לקבלת הצעות מצוינות והערות תובנה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
שם המגיב חברה מספר קטלוגים תגובות
אגר Bacto Difco DF0140-07-4 צלחות NGM
כלוריד הנתרן פישר כימי S671-10 צלחות NGM
Bacto Peptone Difco DF0118-07-2 צלחות NGM
אשלגן זרח Dibasic פישר כימי S375-500 חיץ S-Basal וצלחות NGM
אשלגן זרח Monobasic פישר כימי P285-500 חיץ S-Basal וצלחות NGM
Kimwipes - קטן קימברלי קלארק LS2770
אתנול 100% זהב מגן כימיושות 43196-115 ריחות דילול עבור מבחני Chemotaxis
כלוריד סידן סיגמה אולדריץ C8106-500G צלחות NGM
מגנזיום סולפט Biomedicals MP 150136-500G צלחות NGM
יזיד הנתרן 99% הפישר סיינטיפיק ICN10289180 חומר מרדים
Agarose - ultrapure Invitrogen 16500-500 רפידות agarose
Benzaldehyde סיגמה אולדריץ B1334-100G ריח AWC
Butanone, ACS כיתה סיגמה אולדריץ 360473-500 מ"ל ריח AWC
צינורות microcentrifuge - 1.5 מ"ל צבעוני Denville LS8147
5-3/4 פסטר Pipet פנויים זכוכית " הפישר סיינטיפיק 13-678-20B
Stratalinker Stratagene Stratalinker 2400 שילוב UV
בקבוק ריק מסנן - 500 מ"ל Nalgene 09-740-25B

מקורות

  1. Colbert, H. A., Bargmann, C. I. Odorant-specific adaptation pathways generate olfactory plasticity in C. elegans. Neuron. 14 (4), 803(1995).
  2. Colbert, H. A., Bargmann, C. I. Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans. Learning and Memory. 4 (2), 179(1997).
  3. Bargmann, C. I., et al. Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Neuron. 74 (3), 515(1993).
  4. L'Etoile, N. D., et al. The cyclic GMP-dependent protein kinase EGL-4 regulates olfactory adaptation in C. elegans. Neuron. 36, 1079-10 (2002).
  5. Lee, J. I., et al. Nuclear entry of a cGMP-dependent kinase converts transient into long-lasting olfactory adaptation. PNAS. 107 (13), 6016(2010).
  6. O'Halloran, D. M., et al. Regulators of AWC-mediated olfactory plasticity in Caenorhabditis elegans. PLoS Genetics. 5 (12), e1000761(2009).
  7. O'Halloran, D. M., et al. Changes in cGMP levels affect the localization of EGL-4 in AWC in Caenorhabditis elegans. PLoS ONE. 7 (2), e31614(2012).
  8. Mello, C. C., et al. Efficient gene transfer in C.elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences. EMBO Journal. 10, 3959-39 (1991).
  9. Miyabayashi, T., et al. Expression and function of members of a divergent nuclear receptor family in Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 215, 314(1999).
  10. L'Etoile, N. D., Bargmann, C. I. Olfaction and odor discrimination are mediated by the C. elegans guanylyl cyclase ODR-1. Neuron. 25 (3), 575(2000).
  11. Mello, C., Fire, A. DNA transformation. Methods Cell Biol. 48, 451(1995).
  12. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. Wormbook. , (2006).
  13. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77 (1), 71(1974).
  14. Kauffman, A., Parsons, L., Stein, G., Wills, A., Kaletsky, R., Murphy, C. C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays. J. Vis. Exp. (49), e2490(2011).
  15. Berkowitz, L. A., Hamamichi, S., Knight, A. L., Harrington, A. J., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. Application of a C. elegans Dopamine Neuron Degeneration Assay for the Validation of Potential Parkinson's Disease Genes. J. Vis. Exp. (17), e835(2008).
  16. Pittenger, C., Kandel, E. R. In search of general mechanisms for long-lasting plasticity: Aplysia and the hippocampus. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 358 (1432), 757(2003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

AWCGFPG
Readout מולקולרי של הסתגלות חוש ריח לטווח הארוך ב
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.