דלקת של הערמונית עלולה להיות גורם תורם בתיווך כאב באגן בערמונית כרונית. אנו מתארים את הליך ההכנה של בידוד חיידקים טופל, החדרה של חיידקים לתוך השופכה של עכברי זכרים ומתודולוגיה למדידת allodynia מישוש בעכברים לאורך זמן.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מדידה של Allodynia משושים בדגם Murine של ערמונית קטריאלי
במאמר זה
סיכום
תקציר
coli Escherichia Uropathogenic (UPEC) הם פתוגנים שמשחקים תפקיד חשוב בדלקות בדרכי שתן וערמונית חיידקי 1. אנחנו הראינו לאחרונה שUPEC יש תפקיד חשוב בייזום של כאבי אגן כרוניים 2, תכונה של ערמונית כרונית / תסמונת כאב כרונית באגן (CP / CPPS) 3,4. הדלקת של הערמונית על ידי UPEC הרלוונטי קליני יכולה ליזום ולהקים כאב כרוני דרך מנגנונים שעשויים לכלול ניזק לרקמות וחניכה של מנגנוני אוטואימוניות 5.
אתגר להבנת הפתוגנזה של UPEC בערמונית הוא נגישותו היחסית של בלוטת הערמונית למניפולציה. אנו מנוצלים שיטה שתוארה לעיל intraurethral זיהום 6 כדי לספק מתח קליני של UPEC לעכברים ממין זכר ובכך הקמת זיהום עולה של הערמונית. כאן, אנו מתארים הפרוטוקולים שלנו לתקנון bacterial 7 בידוד, כמו גם את ההליך לcatheterizing עכברי זכרים מורדמים להחדרה של חיידקים.
CP / CPPS מאופיין בעיקר על ידי הנוכחות של המישוש allodynia 4. בדיקת התנהגות הייתה מבוססת על הרעיון של hyperalgesia עורית כתוצאה 8-10 כאבים קרביים הופנו. התמקדות ברקמות מעי רגיז מפחיתה את סף כאב עוריות המאפשרים לתגובה מוגזמת לגירויים בדרך כלל אינם כואבים (allodynia). יישום של כוח נורמלי לתוצאות בעור תגובות חריגות שנוטות להגדיל עם עוצמת כאב הבטן הבסיסית. אנו מתארים מתודולוגיה בעכברי NOD / ShiLtJ לנצל סיבי פון פריי לכמת allodynia מישוש לאורך זמן בתגובה לזיהום חיידקים בודד עם UPEC.
פרוטוקול
1. הכנת חיידקים להרכבת חיסון מאוס
הבא חייב להיעשות בתנאים אספטיים.
- קח 1 17 100 צינורות פוליפרופילן מ"מ x עם כובעים ולהוסיף 3 מ"ל של תקשורת הטריה וריא מרק (LB). באמצעות טיפי autoclaved, לקחת כמה מניות גליצרול חיידקים קפוא של זן CP1 2 ולהעביר כמות קטנה של התרבות לתוך המבחנה המכילה את המדיה LB. החזר את מכסה צינור החמצן כך שעדיין תוכל להיכנס לצינור - התרבות צריכה לגדול בתנאים אירוביים. צינור מקום ב 37 ° C בחממה רועדת ב220 סל"ד לילה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
בחנו הנהון / ShiLtj וC57BL/6J עכברי זכרים לנוכחות של כאב כרוני על זיהום חיידקים. עכברי זכרים (5 עד 7 שבועות ישנים) החדירו עם מי מלח או חיידקים לתוך השופכה (איור 1). גירוי מכאני של אזור האגן עם חוטי פון פריי של עכברים מלוחים החדירו C57BL/6J ועכברי C57BL/6J UPEC נגועים הביא לתדירות תגובה, כי לא השתנה במהלך 28-היום של הניסוי (איור 1). לעומת זאת, בעכברי NOD UPEC נגועים הציגו תגובות לגירוי אגן שהיו גדולים באופן משמעותי ונשארו גבוה באופן משמעותי ע.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
דלקת של ערמונית העכבר עם UPEC מאפשרת בדוגמנות vivo של אירועים שעשויים להיות מעורב בפתוגנזה של ערמונית חיידקים, CP / CPPS או כאירוע predisposing בדלקת כרונית. השיטות מתוארות להכנת חיידקים ותיקו החדרה על גוף גדול של ספרות על מודלי UPEC בדלקת בדרכי שתן נשית 7,14. המודל יש תחולה רחבה ללימוד פתוגנזה, בודק מועמדים פוטנציאליים ומנגנוני חיסון של אפנון חיסוני. היכולת לעקוב אחר התנהגות כאב באופן מדיד מאפשרת לחקר היווצרות כאב זיהום הנגרם על ידי ובאופן פוטנציאלי כמודל קלינ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
תודות
מחקר זה נתמך על ידי המענק 1K01DK079019A2 (PT) מ-NIH / NIDDK.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שם המגיב | חברה | מספר קטלוגים | |
| צינורות תרבות | BD פלקון | 352059 | |
| LB מרק מילר | EMD | EM1.10285.0500 | |
| צינורות Nalgene צנטריפוגות | Thermo | 3118-0050 | |
| Isoflurane | שיין באטלר | NDC 11695-6776-1 | |
| 30G המחט קטטר | המילטון | 91030 | |
| PE10 צינורות | BD intramedic | 427400 | |
| חוטי זכרונות פון פריי | Stoelting | 58025-31 |
מקורות
- Yamamoto, S. Molecular epidemiology of uropathogenic Escherichia coli. Journal of infection and chemotherapy official journal of the Japan Society of Chemotherapy. 13, 68-73 (2007).
- Rudick, C. N., et al. Uropathoge....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
