קביעת ריקון קיבה עם לא פולשנית [ 13 C]-octanoic בדיקת נשימת חומצה לgastroparesis מעקב בעכברי NOD LtJ נשיים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הערכה של ריקון קיבה בעכברים סוכרתיים ללא שימוש בשמנים [
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחקרי ריקון קיבה בעכברים היו מוגבלים על ידי חוסר היכולת לעקוב אחר שינויי ריקון קיבה באותה בעלי החיים מאז הטכניקות הנפוצות ביותר דורשות הרג של בעלי החיים וההתאוששות שלאחר מוות של 1,2 ארוחה. גישה זו מונעת מחקרים ארוכים טווח על מנת לקבוע שינויים בהתרוקנות קיבה עם גיל והתפתחות המחלה. שימוש נפוץ [13 C]-octanoic בדיקת נשימת חומצה לבני אדם 3 כבר שונה לשימוש בעכברים וחולדות 4-6 7 והראינו בעבר כי המבחן הזה הוא אמין ומגיב לשינויים בהתרוקנות קיבה בתגובה לתרופות ובמהלך התקדמות מחלה סוכרתית 8. במצגת וידאו זה העיקרון והיישום מעשי של מבחן שונה זה הסביר. כמו במחקר הקודם, עכברי NOD LtJ משמשים, מודל מהסוג 1 9 סוכרת. חלקם של עכברים אלו מפתחים תסמינים של gastroparesis, סיבוך של diabetes מאופיין על ידי עיכוב בהתרוקנות קיבה ללא חסימה מכאנית של הקיבה 10.
מסמך זה מדגים כיצד לאמן את העכברים לבדיקה, כיצד להכין את ארוחת מבחן ולקבל נתוני 4 hr קיבה מרוקנת וכיצד לנתח את הנתונים שהתקבלו. מנתח איזוטופ פחמן השתמש במחקר הנוכחי הוא מתאים לדגימה האוטומטית של דגימות אוויר מהמרחק של עד 12 עכברים באותו הזמן. טכניקה זו מאפשרת אורך מעקב של ריקון קיבה מקבוצות גדולות של עכברים הסובלים מסוכרת או מחלות אחרות כבר שנים רבות.
מבוא
כתב יד זה מתאר את השיקולים הטכניים ומתודולוגי מעורבים במדידה לא פולשנית של ריקון קיבה בעכברים. על ידי ביצוע הפרוטוקול מתואר כאן, חוקרים יכולים לעקוב באופן מהימן וreproducibly שינויים בקיבה מרוקנת בשל התפתחות המחלה, ללמוד את ההשפעה של סוכנים תרופתיים בהתרוקנות קיבה ובצע את התגובה של ריקון קיבה לטיפול במחלות או מומי 6,8 בסיסיות, 11,12. בפרסומים קודמים, היישום של 13 C מבחני נשימה octanoic חומצה הוצג להיות דרך יעילה למדידת ריקון קיבה בבני אדם ובעלי חי 3,8. מאמר זה מתאר בפירוט, לצעדים הדרושים כדי להשיג נתונים אמינים על 6-8 חודשים דרושים למחקר אורך של ריקון קיבה בעכברים עם סוכרת. היתרונות של ביצוע פרו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הדרכה והרגלה של העכברים
- לפני הניתוח, שם את כל העכברים בתאי הבדיקה עבור 2-4 שעות עם זרימת אוויר קבועה כדי להרגיל אותם לתנאי הבדיקה. זה משמעותי מפחית את רמות לחץ שעלול לגרום לזיהוי חריג של עיכוב בהתרוקנות קיבה. פנק את העכברים באותו אופן כאילו ניסוי ריקון הקיבה היה פועל. הכן את חלמון ביצה (ראה עוד) מבלי להוסיף octanoic חומצה ולהאכיל 0.2 גרם לכל עכבר.
- חזור על תהליך זה עד לעכברים מאומנים במידה מספקת (בדרך כלל 2-3 פעמים). העכברים בדרך כלל הם מורגלים בקלות, כל עוד התנאים הסביבתיים נשמרים אותו ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
נתונים יציגים נקבעו משלושה עכברים שונים מוצגים באיור 2. הגרף השחור מייצג את נקודתי נתונים מעכבר עם התרוקנות קיבה תקינה. זה מראה את החלק היחסי של 13 C שהוא התאושש באוויר הננשף המבוטאים כאחוז של המינון מנוהל לשעה הביע כפונקציה של זמן. העקומה הכחולה היא מעכבר עם קיבה מואצת רוקן עם ערך 1/2 T של 40 דקות והעקומה האדומה הוא מעכבר עם ריקון קיבה מעוכבת בשווי 1/2 T של 168 דקות. כפי שנקבע במחקר קודם ב7 המעבדה שלנו, במחצית זמן הקיבה הרגילה לרוקן גיל עכבר.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הטכניקה המתוארת כאן מאפשרת חוזר ובלתי פולשנית למדידת vivo של ריקון קיבה המוצקה בעכברים. במערכת זו יש יתרון בכך שבעלי החיים אינם מרוסנים בתא המדידה, המאפשרת להם לנוע בחופשיות ולהפוך. מכיוון שזו סביבה לא מוכרת, העכברים עדיין צריכים להיות מאומנים ומורגל לתאי הבדיקות כדי למנוע תופעות של לחץ בהתרוקנות קיבה. באופן כללי, אנו מניחים את נתוני ריקון הקיבה הם אמינים אם שונות התוך העכבר בין בדיקות רצופות קיבה מרוקנת הן פחות מ 10%.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
פרסום וידאו זה התאפשר על ידי מימון מהמכון הלאומי לסוכרת ומחלות עיכול וכליות (NIDDK) ל" Pathobiology של מערכת המעיים "תכנית פרויקט גרנט DK 68055. כריסטופר ט קרידון נתמך על ידי תכנית החונכות האישיות רוצ'סטר בתי הספר.
אנו מודים למר גארי סטולץ לתמיכה טכנית, הגב 'קריסטי Zodrow למזכירות וסיוע ד"ר דאגלס בער מלוס גאטוס מחקר, Inc (Mountain View, קליפורניה).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שם | חברה | מספר CAT | תגובות |
| מקור לאספקת אוויר, זרימה מתמדת, כמו גם הרכב | אספקת אוויר המרכזי במתקן המחקר | ||
| קאמרי דגימת מ"ל 130 שיש אוויר בכניסה, אוויר לשקע, ופתיחת ממשל מזון צינורות פלסטיק לאספקת אוויר | בבית שנבנה | ||
| Octanoic חומצה | קיימברידג' איזוטופ מעבדות (אנדובר, תואר שני) | CLM-293-1 | |
כדי להכין את ארוחת ביצה:
| כל ספק | נסהלהיות עקבי עם ספק הביצה שכן תוכן והטעם הערב לחך התזונתי של הביצים יכולים להשפיע על התרוקנות קיבה ובליעה של הארוחה | |
| איזוטופ פחמן דו חמצני מנתח | לוס גאטוס מחקר בע"מ (Mountain View, קליפורניה) |
מקורות
- Yeung, C. K., McCurrie, J. R. A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).
- Osinski, M. A., Seifert, T. R., Cox, B. F., Gintant, G. A.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
