ניתוח של תפקוד תא שיער שיווי משקל הוא מסובך בשל מיקומם העמוק בתוך החלק הקשה ביותר של הגולגולת, העצם הטמפורלית petrous. רוב מחקרי תא שיער פונקציונליים השתמשו בחריפות תאי שיער מבודד. כאן אנו מתארים הכנה למחצה שלמה של האפיתל שיווי משקל עכבר למחקרי מיקרוסקופיה אלקטרו ושני פוטונים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הכנה חצי שלמות מבודדת של האפיתל החושית שיווי משקל העכבר למיקרוסקופיה שני הפוטונים אלקטרופיזיולוגיה והרזולוציה גבוהה
במאמר זה
סיכום
תקציר
לתפקד תאי שיער שיווי המשקל הבנה בתנאים רגילים, או איך טראומה, מחלה, הזדקנות ולשבש את הפונקציה הזו היא צעד חיוני בהתפתחות של גישות ו / או אסטרטגיות טיפוליות חדשניות מונעת. עם זאת, הרוב המכריע של מחקרים שמסתכלים על תפקוד שיווי משקל נורמלי לא היה ברמה התאית, אבל התמקד בעיקר במבחני התנהגות של תפקוד שיווי משקל כגון הליכה וניתוח ביצועי רפלקס vestibulo-עיניים. אמנם עבודה זו הניבה נתונים יקרי ערך לגבי מה שקורה כאשר דברים משתבשים, מעט מידע שלקט בנוגע לגורמים הבסיסיים של בעיות בתפקוד. מהמחקרים שיתמקדו בתהליכים התאיים וsubcellular העומדים בבסיס תפקוד שיווי משקל, רוב הסתמכו על החריפות בודדו תאי שיער, נטולי הקשרים סינפטיים ואת סביבת תאי תמיכה. לכן, אתגר טכני גדול כבר גישה לתאי שיער שיווי המשקל הרגישים להפליא בהכנהaration ששבש לפחות, מבחינה פיזיולוגית. כאן אנו מדגימים הכנה למחצה שלמה של האפיתל חושי שיווי משקל העכבר ששומר על מיקרו הסביבה המקומית הכולל תא שיער / מתחמים מביא עיקריים.
מבוא
למרות התרומה המשמעותית של מערכת שיווי המשקל לחיי היומיום שלנו, יש הבנה ברורה של התהליכים האחראים לירידה שנצפתה בתפקוד שיווי משקל עם גיל נשארת חמקמקה. אחת סיבות לחוסר הידע הזה הוא שהירידה בתפקוד שיווי משקל יש באופן בלעדי כמעט נחקרה באמצעות מבחני התנהגות, כוללים רפלקס vestibulo-העיני (VOR), חיווי מדויק של תפקוד שיווי משקל חיצוני, אך מספקת תובנות מוגבלות לשינויים של מרכיבים מהותיים . זהו מכשול עיקרי להבנה שלנו של תפקוד תא שיער שיווי משקל בבריאות, מחלה, או הזדקנות.
אמנם יש כבר מחקרים רבים של תאי שיער שיווי המשקל בודדים, חסרון גדול היה ההסתמכות על הכנות תא שיער חרי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. בעלי חיים
- עכברים התקבלו ממרכז מכרסמים האוסטרלי (ARC; פרת', אוסטרליה) ונערכו באוניברסיטת בית החיות בוש סידני על מחזור אור / חושך של 12 שעות נורמלי עם העשרה סביבתית. כל הניסויים שתוארו אושרו על ידי ועדת אתיקה של אוניברסיטת סידני בעלי החיים.
- עכברי זכרים ונקבה (C57/Bl6) שמשו לכל הניסויים שכן זן זה משמש בדרך כלל כרקע למניפולציה גנטית, ויכולים להיחשב שווה הערך ל wildtype 8-9.
2. הכנת רקמה
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
את המאפיינים אלקטרו של תאי שיער שיווי המשקל תלויים בארכיטקטורה המורכבת שבתוכה הם משובצים 7. ניתן לראות בתרשים 5, כי הכנת האפיתל שיווי המשקל חצי שלמותם ניתן להשתמש כדי להבדיל בין סוג I תאי שיער (איור 5 א), תאי שיער מסוג II (איור 5), וגביע עיקרי מביא (איור 5 ג) המבוסס על דגנים conductances הסלולרי אופייני. מאפיינים אלה כוללים "לשקוע" מבוטא בשלילת קוטביות וזרמים גדולים "קורסת" זנב בסוג .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מנגנוני תחושת האיזון שלנו זכו לתשומת לב מוגבלת בהשוואה למערכות חושיות אחרות, למשל את מערכות ראייה ושמיעה. מהמחקרים שחקרו שינויים בתפקוד שיווי משקל או איזון, רוב התמקדו באמצעים התנהגותיים כולל את רפלקס vestibulo-העיני, עם ידע לא שלם מאבני הבניין הבסיסיים של מאזן תאי שיער שיווי המשקל בעצמם. אלה מחקרים שהתמקדו בתאי השיער שכמעט תמיד עשו זאת באמצעות תאי שיער בחריפות מבודדים שהוצאו מהסביבה הטבעית שלהם. במאמר זה אנו מדגימים הכנה למחצה שלמה של האפיתל חושי שיווי משקל העכבר שמרחיב .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
מימון עבור עבודה זו סופק על ידי מאטה גארנט ורודני וויליאמס קרן זיכרון לפרויקט מענק לר 'לים ומחנה AJ.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| REAGENTS | |||
| Leibovitz medium L-15 | Sigma Aldrich | L4386-10X1L | |
| BAPTA-1-oregon green | Invitrogen | O6806 | |
| EQUIPMENT | |||
| Stereo microscope | Leica Microsystems | A60S | |
| מיקרוסקופ זקוף | אולימפוס | BX51WI | |
| מיקרוסקופ דו-פוטוני | אולימפוס/La Vision | BX51WI/ TriMScope II | |
| Dumont #5 מלקחיים SF | FST | 11252-00 | |
| Friedman-Pearson Rongeurs | FST | 16221-14 | |
| מספריים דפוס סטנדרטי | FST | 14001-12 | |
| ממיר InstraTECH A-D | HEKA | ITC-18 | |
| Sutter מיקרומניפולטור | Sutter | MP-225/M | |
| מגבר רב-מהדק | Axon Instruments | 700B | |
| תוכנת רכישת נתונים (אלקטרופיזיולוגיה) | Axograph | N/A | |
| ספקטור תוכנת רכישת נתונים (שני פוטונים) | מקס פלאנק חדשנות | N/A |
מקורות
- Dulon, D., Safieddine, S., Jones, S. M., Petit, C. Otoferlin is critical for a highly sensitive and linear calcium-dependent exocytosis at vestibular hair cell ribbon synapses. J. Neurosci. 29, 10474-10487 (2009).
- Simultaneous pre- and post-synaptic recording from the peripheral vestibular calyx and its included type I hair cell. Highstein, S., Art, J., Holstein, G., Rabbitt, R. 32nd Mid Winter Research M....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
