באוב Chorioallantoic קרום (רמ"א) הוא מורכב עם רקמות טריות סרקומה הנגזרות סרטניים, השעיות התא בודדות שלהם, ושורות תאי סרקומה הוקמו כותרתו fluorescently קבועות וארעיות. המודל משמש ללמוד שתל (כדאיות, Ki67 מדד התפשטות, נמק, חדירה) ומארח (חדירה פיברובלסטים, ingrowth כלי דם) התנהגות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
סרקומה היא מחלה מאוד נדירה שהיא הטרוגנית בטבע, כל פוגעות פיתוח הטיפולים חדשים. חולי סרקומה הם מועמדים אידיאליים לרפואה אישית לאחר ריבוד, המסבירים את הריבית הנוכחית בפיתוח מודל xenotransplant לשעתק ועלות נמוכה למחלה זו. קרום chorioallantoic החומוס הוא מארח immunodeficient טבעי מסוגלים לקיים רקמות ותאים מורכבים ללא הגבלות מינים ספציפיות. בנוסף, ניתן לגשת בקלות, מניפולציות וצלם באמצעות stereomicroscopy אופטי וקרינה. היסטולוגיה נוספת מאפשרת ניתוח מפורט של אינטראקציות הסלולר heterotypic.
פרוטוקול זה מתאר בפירוט באובו השתלה של קרום chorioallantoic עם רקמות טריות סרקומה הנגזרות סרטניים, השעיות התא בודדות שלהם, וקווים קבועים וארעיים שכותרתו fluorescently הוקמו סרקומה סלולרי (Saos-2 וSW1353). עכברוש הישרדות החומוסes הוא עד 75%. המודל משמש ללמוד שתל (כדאיות, Ki67 מדד התפשטות, נמק, חדירה) ומארח (חדירה פיברובלסטים, ingrowth כלי דם) התנהגות. להשתלה מקומית של השעיות תא בודדות, ECM ג'ל מספק יתרונות משמעותיים על פני חומרי בלימה אינרטי. מדד ההתפשטות Ki67 קשור למרחק של התאים מפני שטח של CAM ואת משך הזמן של יישום ברמ"א, שהאחרון קביעת מסגרת זמן לתוספת של מוצרים טיפוליים.
מבוא
סרקומה היא גידול נדיר של רקמות החיבור עם תמותה גבוהה בשל התנגדות 1,2 הטיפול. התקדמות בהישרדות חולה הקשתה על ידי שכיחותם הנמוכה השנתית, הגיוון הרחב שלהם, ואת העובדה שתאי סרקומה הם דיווחו להיות קשים לתרבות במבחנה 3,4.
השימוש בתאים בתרבית להערכת טיפול קליני גילו כי מולקולות חדשות, ככל הנראה פעילה במבחנה לא תמיד משקפות את התוצאות בסביבה הקלינית. יתר על כן, סטיות הגנום מתגלים על ידי מערכי ביטוי גנים הן לא תמיד קשורות למאפייני התנהגות סרטניים בחולה בודדת 5-7. על מנת לנסות ולפתור את הבעיות הללו, רפואה מותאמת אישית צברה בחשיבותו, אשר באה לידי ביטוי בחיפוש המוגבר לדגמי xenograft 8-12.
ב assay vivo יש את היתרון של המשקף הגומלין המורכב בין גתאי ancer וסביבת רקמת המארח בגידולים מוצקים, הנדרשים להתפשטות הסרטן והפלישה 13. נכון לעכשיו אנחנו לומדים את השימוש של assay ממברנה Chorio-allantoic (CAM-assay) כמודל לשחזור xenograft סרקומה 14,15. assay זה נעשה שימוש נרחב למחקר של אנגיוגנזה גידול 16,17. בספרות, לעומת זאת, מצאנו פרוטוקולים שונים עבור assay זה, בעוד שמחקרים אחרים שנצפו הבדל משמעותי בצמיחה או אנגיוגנזה על פי פרוטוקולים שונים 18,19.
במאמר זה אנו לחקור את ההשפעה של משתנה תנאים של CAM-assay על התנהגות תא סרטניים, באמצעות שתלי השעיות תא בודדות שמקורם בגידול בתרביות תאי סרקומה ומבוססות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
ראה איור 1 לסקירה
חומר גידול
1. קבלת והכנת דגימות גידול
לשימוש בחומר בחולה, האישור של ועדת האתיקה הוא הכרחי, ויש לו הסכמה מדעת שמתקבלת מהמטופל.
- חומר קציר נציג (מינימום 1 ס"מ 3) בזמן של התערבות, או ביופסיה או כריתה של סרקומה. האתר הנכון של ביופסיה מוגדר באמצעות דינאמי ניגוד MRI.
- הנח את החומר באופן מיידי בבקבוקון המכיל סטרילי DMEM בתוספת 1,000 U פניצילין ו1 מ"ג / מיליליטר סטרפטומיצין.
- להעביר את הבקבוקון באופן מיידי (30-90 דקות) למעבדה.
כל הנהלים הבאים מבוצעים תחת הזרימה למינרית.
- יוצקים את התוכן של הבקבוקון לתוך צלחת פטרי סטרילית.
- שים מדגם הגידול לחלקים קטנים של מקסימאלי 1 מ 'מ '3 באמצעות אזמל סטרילי. הסר את כל החלקים המסוידים כפי שהם נוטים לפגוע בעיבוד נוסף של הרקמה.
- באופן אקראי לקחת 10 שתלי גידול ליישום ברמ"א.
2. הכנת השעיות תא בודדות שמקורם בגידול
משך משוער: 3 שעות
- לשקול את הרקמה הנותרת של המדגם.
- לשים 4 - 2 גרם של רקמה בצינור Dissociator, צינור אחד או יותר עשוי להידרש לעכל את כל רקמת הגידול שנותרה.
- לעיכול של 4 - 2 גרם של רקמה, להוסיף פתרון 2.5 מ"ל DNase (22 KU / מיליליטר RPMI 1640) פתרון 2.5 מ"ל collagenase 2 (500 U / מיליליטר RPMI 1640) ו.
- לעבד את הרקמה פי פרוטוקול h_tumor Dissociator. זה כולל 2 מחזורים של דגירה על 37 מעלות צלזיוס בCO 2 באינקובטור תוך הצינור הוא מזועזע בעדינות במשך 30 דקות.
- סנן את ההשעיה הנותרים דרך מסננת תא 150 מיקרומטר.
- צנטריפוגה lysate ב 1000 סל"ד במשך 5 ק"מn.
- הסר את supernatant.
- Resuspend גלולה ב 10 מ"ל של חיץ תמוגה הכדורית האדומה (ELB), המאפשר 10 דקות של דגירה עם השעיה קבועה.
הערה: מאגר תמוגה כדורית אדומה מיוצר באופן הבא: הוסף 0.037 גרם EDTA, 0.99 גר 'K 2 HPO 4, Cl 4 8.29 גרם NH ל1,000 מ"ל אקווה, השתמש 10 N NaOH כדי להתאים את ה-pH ל 7.3, מסנן תחת לחץ דרך 0.22 מיקרומטר לסנן. חנות ב 4 ° C.
- הוסף 25 מ"ל של מדיום התרבות (DMEM בתוספת 10% בסרום שור עוברי, 100 U / ml פניצילין, וסטרפטומיצין מיקרוגרם / מ"ל 100) כדי לעצור את התגובה.
- צנטריפוגה ההשעיה ב 1000 סל"ד במשך 5 דקות. הצבע של גלולה צריך להיות לבן עכשיו.
- הסר את supernatant.
- הוסף 5 מ"ל של מדיום לגלולה. סנן את ההשעיה דרך מסננת תא 70 מיקרומטר.
- לספור את מספר התאים / מ"ל חיות באמצעות דלפק תא אוטומטי.
3. גשורות תאי ancer
SAOS2 תאי אוסטאוסרקומה (מספר ATCC: HTB-85) לבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר היו electroporated ידי וקטור pEGFP-C1 באמצעות הסלולרי קו Nucleofector ערכת V על פי הפרוטוקול של היצרן. כדי לבסס את שורות תאי יציבות, תאי transfected נבחרו בG418 (1 מ"ג / מ"ל) למשך 4 שבועות בקנה אחד עם פרוטוקול קודם הוקם 20. בנוסף מיון נעשה על ידי מיון תאים הופעל פלואורסצנטי (FACS) על פי הוראות היצרן.
תאים משורת תאי SW1353 כונדרוסרקומה (מספר ATCC: HTB-94) או השעיות תא בודדות סרטניים טרי מוכנים מסומנים באמצעות קרום lipophilic ניאון כתם אדום.
- להסיר את התאים מבקבוק התרבות באופן קלסית באמצעות טריפסין (0.5% wt / כרך) חומצת ethylenediaminetetraacetic (EDTA; 0.2% wt / כרך) פתרון.
- צנטריפוגה ההשעיה התא במשך 5 דקות ב 1000 סל"ד.
- הסר supernatant.
- הוסף 1 מ"ל של מדיום סרום ללא ו5 DiI μl (Vybrant האדום) / 10 6 תאים.
- עטוף את הבקבוקון ברדיד אלומיניום ולשים אותו בCO 2 באינקובטור למשך 10 דקות ב 37 ° C.
- צנטריפוגה שוב במשך 5 דקות ב 1000 סל"ד ולהסיר את supernatant.
assay קרום Chorioallantoic
1. דגירה ביצה
- ביצים מופרות ממדגרה מסחרית מקומית מבטיחה הפריה 95% מהביצים נדרשות.
- ניתן לאחסן ביצים מופרות ב RT עד 10 ימים.
הערה: לפני שמתחילים דגירה, לכלוך, נוצות וצואה יוסרו בזהירות מקליפות הביצים אופן מכאני על ידי ניגוב יבש עם מגבות נייר, אשר יש מחוספסת ולא מבנה משטח רך. מנגב את הביצים עם 70% אתנול מפוגל או כל מגיב ניקוי אחר מפחית באופן משמעותי את שיעור ההישרדות של עוברי האפרוחים.
- שים את הביצים בincubator בצד אחד, מסמן את המשטח העליון. היום שבו הם שמו את הביצים בחממה מיועד 0 יום של התפתחות עוברית.
- הגדר את טמפרטורת ההדגרה ב 37.8 מעלות צלזיוס, ולחות על 47%. ודא שאפשרות הסיבוב האוטומטית כבויה.
2. פתיחה של הביצים
משך: ± 60 דקות במשך 25 ביצים
ביום פיתוח 3, את הביצים נפתחות תחת זרימת אוויר למינרית. פתיחה את הביצים בתוצאות שלב התפתחותי נוספות בניזק לרמ"א, כקרום נוטה להיצמד לקליפה. מנורת אינפרא אדום משמשת כדי לשמור את הביצים חמה במהלך ההליך. כדי לשפר את העקרות, אנו ממליצים על השימוש בכפפות יד.
- מניחים את הביצה בגביע הביצה, עם הצד המסומן יפנה כלפי מעלה.
- להוריד את הרמה של CAM על ידי הסרת שתי מ"ל של חלבון G דרך מחט 18 הוכנסה בקצה של הביצה. אם המחט היא בוטה לאחר הניקוב כמהקליפות ביצים, החליפו את המחט. אם לא, יש לו כוח רב מדי כדי להיות מופעל, וכתוצאה מכך לניזק לחלמון הביצה או שבר של הקליפה. לפעמים המחט חסומה על ידי chalazae, אחד מ2 להקות ספירלה מתלים החלמון בחלבון. זה יכול להיפתר על ידי בעדינות דוחף את הבוכנה חזרה למטה עד לגוש נפתר. אם חלמון הביצה נשאב לתוך המזרק, החלף את המחט, כמו גם את המזרק. לפעמים את העובר מת לאחר אירוע זה. אם כמות מספקת של חלבון מוסרת, CAM יהיה פגום כאשר מסירים את הקליפה.
- החל סרט דבק semipermeable בצד העליון של הקליפה המסומן כדי למנוע שפיכה של חלקיקי קליפה על CAM תוך חיתוך החלון.
- הפוך את חור כניסה עם מרצע קטן על פני השטח של הביצה.
- לחתוך חלון של 1 ס"מ 2 בקליפה, בעזרת זוג מספריים כירורגיות מחודדים סטריליים.
- הלב הפועם של העובר וכלי סמוכים ניתן לצפות במשטח דואר של חלמון הביצה. הסר את הביצים שאינן מופרות או עוברים מתים. היבט קטע של כלי הדם שמאפיין את העוברים מתים.
- לאטום את החלון עם סרט דבק semipermeable. אין זה הכרחי כדי לכסות את האתר לנקב, אלא אם כן את הקליפה נסדקה במהלך החדרת המחט.
3. נוהל חיסון
משך: ± 1 שעות בכל שורת תא
על החומוס עוברי פיתוח יום 9, את הביצים הם מחוסן תחת זרימת אוויר למינרית.
הערכה של תאים סרטניים מתפשטים ברחבי CAM דורשת בלימה של התאים למשטח מוגבל בזמן החיסון. Matrigel הוא מטריצת ג'ל (ECM) תאי מסרקומה עכבר Engelbreth-Holm-הנחיל משמשת לעתים קרובות בתנאי תרבית תאים ניסיוניים. זה נוזל כאשר התקררו, אבל יעבור פילמור הופעל תרמית כאשר הובא ל20 - 40 מעלות צלזיוס, ובכך יוצר ג'ל יציב. במהלךהניסויים, Matrigel נשמר בתיבה המכילה קרח נמס.
הערה: אנחנו מתעקשים לא להשתמש coverslips מחוררת. הבחנו קובץ מצורף וצמיחה של תאים סרטניים מורכבים על גבי דיסק הפלסטיק ובכך הטיית פוטנציאל צמיחה של התאים על הקרום עצמו.
- Resuspend תא גלולה בג'ל ECM מקורר בריכוז של 10 6 cells/100 ג'ל ECM μl. שמור פתרון זה על קרח נמס.
- חלק בלו של הקרום החדיר למחצה עם זוג כירורגית סטרילית תחת זרימת אוויר למינרית. אם הסרט דבק נמחק לחלוטין, זה יגרום לשיעור גבוה יותר של מוות עוברי עקב זיהום.
- גע בזכות CAM מתחת לחלון הקליפה בקלילות עם מוט זכוכית סטרילי, על מנת להסיר את שכבת תאי אפיתל. הנגיעה CAM עם מוט זכוכית סטרילית מוכיחה להיות פחות טראומטי מאשר באמצעות אזמל n ° 11, אשר דורש יותר handiness וניסיון. שטפי דם קטנים עלולים להתרחש.
- dding חומר גידול.
- לשתלים סרטניים: חתיכה בעדינות תחתונה של רקמה על CAM עם זוג מלקחיים סטריליות, בלי לסחוט אותו.
- להליך ג'ל ECM: הוסף 25 μl 4x-ECM של תא ההשעיה ג'ל לרמ"א, על גב אחד את השני, מה שמאפשר את הג'ל לפלמר בECM בין היישומים. בדרך זו פלאק חסיד המכיל את התאים הסרטניים נוצר.
- לאטום את חלון הפגז שוב עם סרט דבק semipermeable.
4. הדמיה וקציר של CAM
משך הפעילות: 2 שעות במשך 25 ביצים
על החומוס עוברי פיתוח יום 16, את המצלמות נקצרים. עבודה תחת זרימת אוויר למינרית היא לא הכרחית.
- להגדיל את החלון עם זוג המספריים כירורגיות. הקפד שלא לחתוך נמוך מדי, אחרת CAM יהיה פגום, וכתוצאה מכך הדימום של כלי הפצועים.
- הוסף 300-500 μl של PBS D עם טפטפת על כת CAMיון המכיל את החומר מחוסן. אם לא משתמשים בבדיקות ניאון, נאגר פורמלין יכול לשמש כזה הופך את הקרום נוקשה, להקל על החיתוך של הממברנה.
- הפוך תצלום של CAM בביצה דרך מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאו, מצויד במצלמה דיגיטלית בצבע, הן באמצעות GFP או מסנן DSR, ואין סינון. את השתלים לגידול, כל הצילומים נעשים ללא מסננים. הארה מלמעלה על ידי נורות LED מומלצת מאוד בזמן צילום (איור 2).
- נדידת תאי גידול שיא לתאים שכותרתו. הגבולות של הגידולים עלולים להיות בלתי סדירים ומרופטים. תאים מפוזרים עשויים להיות נוכחים בסמוך לגבולות גידול. בחלק מהדגימות, שורות של תאים סרטניים אפשר לראות (איור 3).
- חותכים את הקרום עם מספריים סטריליים בגבול שוכב נגד הקליפה.
- הנח את CAM נקטף בצלחת פטרי סטרילית מלאה עם PBS D או שנאגרו במשךmaldehyde.
- הפוך את תמונה של שניהם בצד העליון וצד התחתון של רמ"א, עם ובלי פילטר.
- שים את הקרום במכל שכותרתו עם פורמלין שנאגרו במשך לפחות 72 שעות.
- הטמע את המצלמות בפרפין ולהכין אותם לבדיקה היסטולוגית. תשמור על עצמך כדי לחתוך את השתלים הסרטניים במרכזו של הגוש הקטן, כדי לוודא ששטח החתך מקביל לחלקו התחתון של הקלטת. אם לא, את האינטראקציה בין CAM ושתל הגידול לא תהיה גלויה. אותה האסטרטגיה חלה על לוחות ג'ל ECM: פני השטח מול להב החיתוך צריך להיות בניצב ללוח.
5. ערכה היסטולוגית
מכתים hematoxylin-Eosin וקי 67 אימונוהיסטוכימיה בוצעו לבירור נוסף, במידת צורך. אימונוהיסטוכימיה בוצעה בסעיפי רקמות פרפין מוטבעים פורמלין-קבועים של 3.5 מיקרומטר בעובי, באמצעות שקופית Stainer אוטומטי על פילהוראות יצרן. נוגדן חד שבטי עיקרי עכבר כדי Ki-67 (שיבוט MIB-1, דילול 1/100) היה בשימוש. חום-Induced epitope אחזור בוצע באמצעות מיזוג 1 סלולרי, ויזואליזציה הושגה עם ערכת זיהוי DAB האוניברסלית, על פי הוראות יצרן. Dehydratation מסעיפי הרקמות בוצעה באמצעות coverslipper אוטומטי.
לSW1353 את שורות תאי SAOS2 ו, מספר תא nuclei/100 מיקרומטר 2 Ki67 החיובי והשלילי Ki67 נספר בשלושה אזורים: אחד קרוב לגבול של רמ"א, אחד לסגור את פני השטח ואחד במרכז פלאק ג'ל ECM. הליך זה חזר על עצמו 6x עבור כל שקופית קי 67 מוכתמת. המדד של התפשטות נקבע עבור כל שקופית על ידי חלוקת מספר התאים Ki67 חיובי במספר הכולל של תאים נספרו.
נמק מוגדר על ידי אובדן של פיזור העדין של הכרומטין בגרעין התא, בליווי פאדיng של שולי תא נפרדים. לxenografts, נמק הוא הבקיע כמלא, חלקי (לעתים קרובות על פני השטח), או ייעדר. חדירה של תאי גידול לCAM מוגדרת על ידי התצפית של תאים סרטניים בתוך המזודרם של רמ"א, והוא הבקיע כמו להיות נוכח או ייעדר.
שלושה פריטים מקבלים נקודות על התנהגות מארחת. חדירת פיברובלסטים מוגדרת כתאים מוארכים עוזבים CAM ופולש השתל / פלאק גידול, והוא הבקיע כמו להיות נוכח או ייעדר. ingrowth כלי דם יכול להיות שנצפה כingrowth של מתרבה כלי חומוס, מאופיינים על ידי הנוכחות של אריתרוציטים חומוס nucleated.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הערכה של רמ"א
שתלי גידול הפכו חסיד לרמ"א (איור 2 א). השעיות תא בודדות מחומר שהמטופל להציג שלט מיובש, מוגבה מעט (איור 2 ד) לעתים קרובות. לאחר הכריתה של רמ"א, סימן קימוט של הקרום מתרחש (איורים 2E ו2F).
לשורות התאים המסחריות פלאק הופך אטום יותר בזמן, מה שמעיד שגשוג תאים. שורות תאים שונו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
זמן של חיסון וקציר
תזמון היום של חיסון בוצע באמצעות SAOS2 בECM ג'ל (36 מצלמות) ונע בין יום התפתחות העוברי 5 ו -10.
לפני הדגירה יום 9, CAM לא באופן עקבי היה גדול מספיק כדי לתמוך ג'ל ECM אנחנו מוחלים. בקציר, תאים סרטניים לפעמים היינו צריכים להישלף מCAM העמוק יותר, וכמה דוגמאות ג'ל ECM שכבו רופפת בחלבון או ברמ"א. בימי 5 ו -6, היה קשה ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
יש מחברים אין לחשוף.
תודות
תאים משורת תאי כונדרוסרקומה SW1353 נמסרו באדיבותו של פרופ 'ד"ר PCW Hogendoorn ופרופ' ד"ר י בובי של אוניברסיטת ליידן, הולנד. אנו מודים לג' וג' Mestach Wagemans לקבלת סיוע טכני מעולה, וג' דה Bruyne לציור המקצועי של הסקירה של הפרוטוקול שלנו.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| ערכת נוקלאופקטור קו תאים V | תמיסת קולגנאז 2 Amaxa | VCA-1003 | |
| (500 U/ml RPMI 1640) | Sigma Aldrich | C6885 | |
| DMEM | Invitrogen | 41965-039 | |
| DMSO | Sigma | D8418 | |
| תמיסת Dnase | Sigma Aldrich | DN25 | |
| G418 | Invitrogen | 11811031 | |
| Matrigel | Sigma-Aldrich | E1270 | |
| עכבר נוגדן חד שבטי ראשוני Ki67 | Dako דנמרק | MIB-1 | |
| Paraformaldehyde | Fluka | D76240 | |
| PBS | Invitrogen | 20012019 | |
| PBSD | Invitrogen | 14040083 | |
| peGFP-C1 וקטור | Clontech | 632470 | |
| פניצילין/סטרפטומיצין | Invitrogen | 15140163 | |
| RPMI | Invitrogen | 22409-015 | |
| פתרון Trypsin-EDTA | Invitrogen | 25300054 | |
| Vybrant תיוג תאים DiI | Lifetechnologies | 22885 | |
| Countess מונה תאים אוטומטי | Invitrogen | C10227 | |
| מצלמה צבעונית דיגיטלית | Leica | DFC 340 FX | |
| חממת ביצים | דיגיטלית אוטומטית Elex Co | R-COM 50 | |
| FACS | BD Biosciences | FACSAriaIII | |
| Gentlemacs C-Tube | Miltenyi Biotech | 130-093-237 | |
| Gentlemacs Dissociator | Miltenyi Biotech | 130-093-235 | |
| מדריך למשתמש של Gentlemacs Dissociator מכיל פרוטוקול | h_tumor Miltenyi Biotech | ||
| [header] | |||
| סרט דבק חדיר למחצה (Suprasorb F) | Lohmann& Rauscher | 20468 | |
| מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאו | Leica | M205 FA | |
| Tissue-Tek סרט אוטומטי Coverslipper | Sakura | 6400 | |
| ultraView ערכת זיהוי DAB אוניברסלית Ventana | מערכות רפואיות בע"מ | 760-500 | |
| Ventana אוטומטי שקופיות מכתים | Ventana מערכות רפואיות | Benchmark XT |
מקורות
- Mankin, H. J., Hornicek, F. I., Rosenberg, A. E., Harmon, D. C., Gebhardt, M. C. Survival data for 648 patients with osteosarcoma treated at one institution. Clinical Orthopaedics and Related Research. 429, 286-291 (2004).
- Hoffmann, J., Schmidt-Peter, P., et al. Anticancer drug sensitivity and expression of multidrug resistance markers in early passage human sarcomas. Clinical Cancer Research. 5, 2198-2204 (1999).
- Greenlee, R. T., Hill-Harmon, M. B., Murray, T., Thun, M. Cancer statistics, 2001. CA A Cancer Journal for Clinicians. 51, 15-36 (2001).
- Gil-Benso, R., Lopez-Gines, C., et al. Establishment and characterisation of a continuous human chondrosarcoma cell line, ch-2879: Comparative histologic and genetic studies with its tumor of origin. Laboratory Investigations. 83, 877-887 (2003).
- Taylor, B. S., Barretina, J., et al. Advances in sarcoma genomics and new therpeutic targets. Nature Reviews Cancer. 11, 541-557 (2011).
- Skubitz, K. M., D'Adamo, D. R. Sarcoma. Mayo Clinic Proceedings. 82, 1409-1432 (2007).
- Nielsen, T. O., West, R. B. Translating gene expression into clinical cara: sarcomas as a paradigm. Journal of Clinical Oncology. 28, 1796-1805 (2010).
- Vaira, V., Fedele, G., Pyne, S. Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors. Proceedings of the National Academy of Science USA. 107, 8352-8356 (2010).
- DeRose, Y. S., Wang, G., et al. Tumor grafts derived from women with breast cancer authentically reflect tumor pathology, growth, metastasis and disease outcomes. Nature Medicine. 17, 1514-1520 (2011).
- Tentler, J. J., Tan, A. C., et al. Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development. Nature Reviews Clinical Oncology. 9, 338-350 (2012).
- Bertotti, A., Migliardi, G., et al. A molecularly annotated platform of patient-derived xenografts ("xenopatients") identifies HER2 as an effective therapeutic target in cetuximab-resistant colorectal cancer. Cancer Discovery. 1, 508-523 (2011).
- Decaudin, D. Primary human tumor xenografted models ('tumorgrafts') for good management of patients with cancer. Anticancer Drugs. 22, 827-841 (2011).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: The next generation. Cell. 144, 646-674 (2011).
- Sys, G., Van Bockstal, M., et al. Tumor grafts derived from sarcoma patients tumor morphology, viability, and invasion potential and indicate disease outcomes in the chick chorioallantoic membrane model. Cancer Letters. 326, 69-78 (2012).
- Armstrong, P. B., Quigley, J. P., Sidebottom, E. Transepithelial invasion and intramesenchymal infiltration of the chick embryo chorioallantois by tumor cell lines. Cancer Research. 42, 1826-1837 (1982).
- Deryugina, E., Quigly, J. Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis. Histochemistry and Cell Biology. 130, 1119-1130 (2008).
- Knighton, D., Ausprunk, D., Tapper, D., Folkman, J. Avascular and vascular phases of tumor growth in the chick embryo. British Journal of Cancer. 35, 347-356 (1977).
- Dohle, D. S., Pasa, S. D., Gustmann, S., Laub, M., Wissler, J. H., Jennissen, H. P., Dünker, N. Chick ex ovo culture and ex ovo CAM assay: how it really works. J. Vis. Exp. (33), e1620(2009).
- Balke, M., Neumann, A., et al. Morphologic characterization of osteosarcoma growth on the chick chorioallantoic membrane. BMC Research Notes. 3, 58(2010).
- Hendrix, A., Maynard, D., et al. Effect of the secretory small GTPase Rab27B on breast cancer growth, invasion, and metastasis. Journal of the National Cancer Institute. 102, 866-880 (2010).
- Ausprunk, D., Knighton, D., Folkman, J. Vascularization of normal and neoplastic tissues grafted to the chick chorioallantois: role of host and preexisting graft vessels. American Journal of Pathology. 79, 597-618 (1975).
- Lokman, N. A., Elder, A. S. F., Riciardelli, C., Oehler, M. K. Chick Chorioallantoic membrane (CAM) Assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis. International Journal of Molecular Sciences. 13, 9959-9970 (2012).
- Vargas, A., Zeisser-Labouèbe, M., Lange, N., Gurny, R., Delie, F. The chick embryo and its chorioallantoic membrane (CAM) for the in vivo evaluation of drug delivery systems. Advanced Drug Delivery Reviews. 59, 1162-1176 (2007).
- Hagedorn, M., Javerzat, S., et al. Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model. Proceedings of the National Academy of Sciences U.S.A. 102, 1643-1648 (2005).
- De Wever, O., Hendrix, A., et al. Modeling and quantification of cancer cell invasion through collagen type I matrices. International Journal of Developmental Biology. 54, 887-896 (2010).
- Albini, A., Benelli, R. The chemoinvasion assay: A method to assess tumor and endothelial cell invasion and its modulation. Nature Protocols. 2, 504-511 (2007).
- Hanahan, D., Coussens, L. Accessories to the crime: functions of cells recruited to the tumor microenvironment. Cancer Cell. 21, 309-322 (2012).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
