Gavaging דג הזברה למבוגר

סיכום

השימוש הגובר של דג הזברה כמודל חיה דורש פיתוח שיטות יעילות לאספקה ​​של כמויות ידועות של תרכובות ופתרונות. ההליך המתואר להלן gavage מאפשר משלוח האוראלי של כמויות מדויקות של פתרון אמין, בטוח ויעיל לדג זברה מבוגר.

תקציר

דג הזברה הפכה חשובה במודל vivo במחקר ביו. שיטות יעילות חייבים להיות מפותחות ומנוצלות כדי לספק תרכובות או סוכנים בפתרונות למחקר מדעי. שיטות קיימים כיום למתן דרך הפה לתרכובות דג הזברה למבוגרים הן לא מדויקות בגלל שונות בצריכה בהתנדבות על ידי הדג. הליך gavage פותח כדי לספק כמויות מדויקות של חומרים מזהמים לדג הזברה למחקר במחקר ביו. דג הזברה מבוגר מעל גיל 6 חודשים היו מורדם עם 150 מ"ג / ליטר של נאגר MS-222 וgavaged עם 5 μl של פתרון באמצעות צינורות השתלת צנתר גמישים המחובר לקצה מחט 22-G לחתוך. הצינור גמיש שהוריד לתוך חלל הפה של דג הזברה עד הקצה של הצינור הוארך בעבר את הזימים (כ 1 ס"מ). הפתרון היה לאחר מכן הזריק לאט לתוך המעי. שיטה זו הייתה יעילה 88% מהזמן, עם דג מחלים ללא אירועים מיוחדים. זההליך הוא גם יעיל כאדם אחד יכול gavage 20-30 דגים בשעה אחת. שיטה זו יכולה לשמש לניהול סוכנים דווקא ללימודי מחלות זיהומיות, או מחקרים של תרכובות אחרות בדג זברה מבוגר.

מבוא

שיטות קיימים כיום למתן דרך הפה לדג זברת תרכובות כוללות תרכובות בניהול עליונה מצופות על הזנה, מעורבב לדיאטות ג'לטין ^1, bioencapsulated למלח שרימפס ^2, מעורבב עם שומני דיאטות כמוס ^3, שעוות חרוזים תרסיס ⁴ ובאמצעות דיאטות המבוססות על גלוטן. ⁵ מגבלות שיטות של אוראלי אלה כוללות שיעורי שטיפה גבוהים וצריכת מתחם שלמה או בלתי צפויה על ידי דגים בודדים. המשתנים האלה הם בעייתיים, כי במחקרים למחלות זיהומיות, ביודעו את מינון התולעת ניתן לדגים עשוי להיות קריטי להצלחת מחקר. כמו כן, עבודה קודמת הראתה כי תרכובות מסוימות המנוהלות באמבטיות מים לגרום לנגע רעיל לדג הזברה זימים לפני שפעת המעיים שעשויות להיות תחת מחקר להתרחש. ⁶

Gavage הוא שיטה סטנדרטית המשמשת במינים של בעלי חיים במעבדה אחרים כדי לנהל את הכמויות מדויקות של מוצר עם AKריכוז Nown למחקר במחקר ביו ותרופות. רק לאחרונה יש שיטות לgavaging דג הזברה תואר בספרות. טכניקה אחת היא שיטה שתוארה שני אדם באמצעות נדן קטטר 24-G המחובר לפיפטה μl 2-20 כדי לספק 5 μl של פתרון. ⁷ השיטה המתוארת היה שיעור תמותה של 8.7% ו -39% ביום הראשון והשני משפט, בהתאמה; ביותר של התמותה יוחס לנשים הרות להולדת. הטכניקה השנייה gavage תאר מזרקים gavage קהה שקצהו המשמש לניהול של 5 μl פתרון לmedakas (latipes Oryzias). ⁸ מידע על תמותה לא היה קיים ואת התהליך של ביצוע gavage לא תואר מדויק. לדברי המועצה הקנדית בטיפול בבעלי חיים ובמעבדת דג הזברה, עד 1% ממשקל גופו של הדג יכולה להינתן דרך gavage. ^9,10 המטרה שלנו הייתה לפתח שיטת הדיר, יעילה ובטוחה של אספקת כמויות מדויקות של comק"ג במתן דרך פה לדג זברה מבוגר משני המינים ובכל השלבים של רבייה. הליך זה יהיה רלוונטי לכל מחקר שבו נדרש מינון אוראלי מדויק של מתחם.

פרוטוקול

1. הכנת ההרדמה

1. הכן פתרון של 150 מ"ג / ליטר של MS-222 במערכת מים או מפתרון מניות או מצורת האבקה.
2. בדוק את ה-pH בעזרת מד pH.
3. חיץ עם סודה לשתייה לפי צורך עד pH הוא בין 7-7.5.
4. הכן את טנק של מים חופשי ממערכת MS-222 לדגים להתאושש פנימה זמן ההחלמה הוא בדרך כלל פחות מ 1 דקות.

2. מכין את מנגנון Gavage

1. חותכים את צינורות השתלת 22-G ברורים לקצת יותר מאורך משוער מן הפה אל הנורה המעיים של הדג. בתחילה, אנו מציעים הרדמת דג אחד לכל קבוצה חדשה בשימוש כדי לקבל את האומדן הטוב ביותר של אורך צורך.
2. דחוף את צינור ההשתלה חד המשמעי על ½ אינץ' 22-G המחט עד שהוא בטוח ואין סכנה של ניתוק. אם מחט ½ 22-C אינה זמינה, לחתוך מחט ארוכה יותר ליישוםroximately שאורכו.
3. כאשר שלם, צינורות השתלת הצנתר צריכים להרחיב על 1 ס"מ מקצה המחט, או קצר יותר, אם הדגים קטנים יותר.
4. צרף את רכזת מחט 22-G למזרק luerlok 1-CC.

3. הכנות לקראת Gavage

1. חורץ לתוך ספוג בלהב סכין מנתחים.
2. משרים את הספוג במי מערכת החופשי מ-MS-222.
3. הנח ספוג הלח על משטח שטוח.
4. צייר את הפתרון המתאים μl 5 לgavage לתוך צינורות צנתר 22-G ומזרק 1-CC.

4. הרדמה וGavage

1. מהר את הדגים במשך לפחות 24 שעות לפני ההליך.
2. מניחים את הדגים בפתרון של MS-222 עד שהוא מאבד את רפלקס ליישרה, ואינו מגיב לקמצוץ סנפיר זנב, אבל שומר על תנועת opercular. זה בדרך כלל לוקח בערך 2-3 דקות.
3. הסר את הדגים מההרדמה ולמקם אותו לתוךהחריץ בספוג עם הראש בולט מעט מהספוג, אבל הזימים מכוסים בספוג.
4. העבר את הספוג למצב אנכי.
5. פתח את פיו של דג הזברה באמצעות צינורות צנתר 22-G.
6. הכנס בעדינות את הצינור עד לקצה הוא בעבר את הזימים (כ 1 ס"מ או לאורכו של הצינור). צינורות ההשתלה לא צריכים שיהיה צורך בכפייה. התנגדות מצביעה על הצינור ניתן להכות את הקשת או לב הזימים.
7. אם יש התנגדות, בעדינות לסגת, למקם מחדש ונסה שוב.
8. הזרק את החומר לאט לאט.
9. בזמן הזרקה, לוודא כי הפתרון לא לצאת דרך הזימים או בפה.
10. הסר את הדגים מהספוג והמקום למכל ההתאוששות.
11. התאוששות מתרחשת בדרך כלל בדקות פחות מ 1 והוא הצביע על ידי הדגים שוחים זקוף ושמירה על שיווי משקל.
12. לעקוב אחר דגים לregurgitation כפי שמוצג על ידי הדמיה הדגים גרשו באופן פעיל מ 'aterial מהפה שלו, או שאין תנועת opercular.
13. דגים יכולים להיות מוחזרים למכל הרגיל שלהם ברגע שהם התאוששו.

תוצאות

שני המינים של דגים, כולל נשים הרות להולדת היו gavaged בהצלחה (איור 1). הליך מוצלח לוקח פחות מדקה אחת עם נוזל לא ראה יציאה מהזימים או בפה. הצינור נכנס בקלות, בלי כוח, בלי דם ראה עם הסרת הקטטר. ההליך הוא מהיר, הדורש כ -10 דקות לgavage 3 עד 4 דגים, עם ממוצע של 30-45 שניות לכל דגים.

לא צריך להיות gavaged דג הזברה עם יותר מ 5 μl של כל פתרון. Gavage עם 10 פתרונות μl הביא רק שיעור הצלחה של 50% (...

דיון

משמעות

טכניקה זו היא שיפור ומספקת מספר יתרונות על פני שתי הטכניקות המתוארות בעבר לgavaging דג הזברה מבוגר. ראשית, שימוש בספוג כדי לרסן את הדגים מאפשר לאדם אחד כדי לבצע את ההליך, בניגוד לטכניקה שתוארה לעיל דורשת שני אנשים. ⁷ שנית, צינורות השתלת צנתר הוא גמישים יותר מאשר צנתרים IV, שיכול לסייע במזעור טראומה משנית בשל לניקוב באופן דומה לשימוש במזרקים שקצהו בוטה. ^7,8 שלישית, על ידי שימוש בצינורות ב...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ציוד
מזרק ספוג
1-cc luer lock	Becton Dickinson Co
22-G Micro-Renathane Implantation Tubing (cut)	Braintree Scientific, Inc.
1 מחט 22 גרם (חתוכה, במידת הצורך)	Becton Dickinson Co
מד pH	חנה בדיקה
1 להב
[כותרת]
<חזק>מגיב / חומר< / חזק>
MS-222 (פינקל)	מעבדות

אזמל ארג'נט