הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

תאי גזע תכנות טיפולי אנגיוגנזה שימוש אורגניים פולימריים חלקיקים

10.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/50736

⸱

27 בספטמבר 2013

 ,  , 
1Department of Orthopaedic Surgery, Stanford University , 2Department of Bioengineering, Stanford University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

אנו מתארים את השיטה של ​​תאי גזע תכנות לביטוי יתר גורמים טיפוליים לאנגיוגנזה באמצעות חלקיקים פולימריים מתכלים. תהליכים שתוארו כוללים סינתזת פולימר, transfecting בתאי גזע שמקורם בשומן במבחנה, ומאמת את היעילות של תאי גזע מתוכנתים לקדם אנגיוגנזה במודל איסכמיה hindlimb עכברי.

תקציר

צמיחת כלי דם מבוקרת היא קריטית עבור התחדשות רקמות מוצלחת וריפוי פצעים, כמו גם לטיפול במחלות איסכמי כגון שבץ, התקף לב או מחלות עורקים היקפיים. מסירה ישירה של גורמי גדילת angiogenic יש הפוטנציאל לעורר צמיחת כלי דם חדשה, אבל קשורה לעתים קרובות עם מגבלות כגון חוסר המיקוד וזמן מחצית חיים קצרים בגוף חי. ריפוי גנטי מציע גישה חלופית על ידי אספקת הגנים מקודדים גורמי angiogenic, אבל לעתים קרובות דורש שימוש בוירוס, והוא מוגבל על ידי חששות בטיחות. כאן אנו מתארים את האסטרטגיה שפותחה לאחרונה לעידוד צמיחת כלי דם על ידי תאי גזע תכנות לביטוי יתר גורמי angiogenic באתרו באמצעות חלקיקים פולימריים מתכלים. באופן ספציפי את האסטרטגיה שלנו מנוצל בתאי גזע כאספקת כלי רכב על ידי ניצול של היכולת שלהם נודדות לעבר רקמות איסכמי in vivo. שימוש בווקטורים פולימריים אופטימיזציה, נגזר שומןתאי גזע שונו כדי overexpress גן angiogenic קידוד כלי דם גורם אנדותל צמיחה (VEGF). אנחנו תיארתי את התהליכים לסינתזת פולימר, היווצרות nanoparticle, transfecting תאי גזע במבחנה, כמו גם שיטות לאימות היעילות של תאי גזע המבטא-VEGF לקידום אנגיוגנזה במודל איסכמיה hindlimb עכברי.

מבוא

המטרה הכללית של טכניקה זו היא לקדם אנגיוגנזה הטיפולית שימוש בתאי גזע שאינו באופן ויראלי מתוכנת ביתר גורמים טיפוליים באתר של איסכמיה. תאי גזע שונו vivo לשעבר ראשון באמצעות חלקיקים מתכלים מסונתזים במעבדה, ולאחר מכן הושתלו במודל עכברי של איסכמיה hindlimb כדי לאמת את הפוטנציאל שלהם לשיפור אנגיוגנזה והצלה רקמות.

צמיחת כלי דם נשלט היא מרכיב חשוב של התחדשות רקמות מוצלחת, כמו גם לטיפול במחלות איסכמי שונים, כגון שבץ, איסכמיה איבר, ואוטם שריר הלב. מספר אסטרטגיות פותחו כדי לקדם את הצמיחה של כלי דם, כוללים משלוח גורם גדילה וטיפול מבוסס תאים. 1 למרות היעילות שנצפתה במודלים של בעלי החיים המחלה, שיטות אלה עדיין עומדות בפני מגבלות כגון צורך במינוני supraphysiological למסירת גורם גדילה, או לא מספיק אוטוקרינילשחרר על ידי תאים בלבד. אסטרטגיה פוטנציאלית אחד כדי להתגבר על המגבלות הנ"ל היא לשלב טיפול בתאי גזע וריפוי גנטי, לפיה תאי גזע מתוכנתים גנטי vivo לשעבר לפני השתלה לביטוי יתר גורמים טיפוליים רצויים. גישה זו באה לביטוי במודלים של מחלה שונות, כולל hindlimb איסכמיה 2, מחלות לב 3, ריפוי עצם 4 ופגיעה עצבית 5, וכו '. עם זאת, רוב טכניקות ריפוי גנטי מסתמכות על וקטורים ויראליים, אשר קשור עם חששות בטיחות, כגון immunogenicity הפוטנציאל וmutagenesis insertional. Biomaterials תיווך מסירת הגן אינו נגיפית יכול להתגבר על המגבלות האלה, אבל לעתים קרובות סובלים מיעילות transfection נמוכה. כדי לזרז את הגילוי של חומרים ביולוגיים חדשניים למסירת גן אינו נגיפית יעילה, מחקרים שנעשו לאחרונה הועסקו כימיה קומבינטורית וגישת הקרנת תפוקה גבוהה. ספריות פולימר מתכלים כגון פולי (es β-אמינוters) (PBAE) פותחו והוקרן, שהוביל לגילוי של פולימרים מובילים ביעילות transfection המשופרת במידה ניכרת בהשוואה לעמיתיהם וקטור פולימרים הקונבנציונלי. 6-7

במסמך זה, אנו מתארים את הסינתזה של PBAE והאימות של היכולת שלהם transfect תאי גזע שמקורם בשומן (ADSCs) במבחנה, ואחרי ההשתלה הבאה של ADSCs גנטי שונה overexpressing כלי דם גורם אנדותל צמיחה (VEGF) במודל עכברי של איסכמיה hindlimb . התוצאות הוערכו על ידי מעקב אחר גורל תא באמצעות הדמיה פליטת אור, הערכת reperfusion רקמות באמצעות ההדמיה זלוף לייזר דופלר (LDPI), וקביעת ההצלה אנגיוגנזה ורקמה על ידי היסטולוגיה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. פולימר סינתזה

  1. במנדף, לשקול את 3,523 מ"ג של diacrylate butanediol (C) ולהעביר לבקבוקון נצנץ זכוכית המכיל בר ומערבב.
  2. טרום חום 5-אמינו-1-pentanol (32) ל90 ° C לsolubilize מלח, ולאחר מכן במנדף, לשקול את 1,533 מ"ג 32 ולהוסיף לבקבוקון הנצנץ המכיל ג שיטה זו תגרום ליחס טוחנת של C: 32 = 1:1.2.
  3. מייד מניח את הבקבוקון המכיל את שני הפתרונות על גבי צלחת ומערבבים. הגדר את מהירות ומערבבים ב600 סל"ד.
  4. העבר את בקבוקון הנצנץ לתנור ב90 ° C. מהירות ערבוב מוגדר 1,000 סל"ד במשך 4 שעות. אם בר והמערבב נתקע, להנמיך את המהירות. לאחר 4 שעות, מהירות נמוכה יותר כדי 300 סל"ד ולשמור על 90 מעלות צלזיוס עוד שעה 12-16.
  5. הוסף 5 גרם של C32 ל10 מיליליטר של tetrahydrofuran נטול מים (THF) בבקבוקון נצנץ זכוכית המכיל בר ומערבב. עוטף בנייר כסף ועל מערבולת גבוהה עד שהיא נמסה באופן מלא.
  6. בconta בקבוקון נצנץ זכוכית נפרדining בר ומערבב, מוסיף 10 מ"מ של Tetraethyleneglycoldiamine (122). הוסף 40 מיליליטר של THF.
  7. הנח שני הבקבוקונים (C32 ו122) על צלחת ומערבבים במשך 5 דקות לאחר מכן לשלב ביחד. כסה בנייר כסף ומשאיר בטמפרטורת חדר תוך ערבוב ב400 סל"ד 24 שעות. המוצר הסופי נקרא C32-122.
  8. לשקול את 5 x 50 צינורות מיליליטר פלקון עבור כל אצווה 5 גרם של C32-122. שים לב למסה של כל צינור במחברת.
  9. העברת 30 מיליליטר של אתר diethyl נטול מים לכל צינור פלקון 50 מיליליטר.
  10. העברה 10 מיליליטר של C32-122 לכל צינור פלקון 50 מיליליטר.
  11. צינורות פלקון וורטקס במרץ אז צנטריפוגות ב 2,500 סל"ד במשך 2 דקות. הערה: הפולימר המופק יאסוף בבסיס של הצינור.
  12. מחק את הפתרון העליון וחזור על שלבים 1.9 ו1.11 עוד פעמיים.
  13. מניחים את הצינורות הפתוחים המכילים C32-122 חולצו בייבוש וואקום הלילה. ודא כי כל הצינורות מוגנים מפני אור.
  14. לשקול את כל הצינורות המכילים C32-122 כדי לקבוע את המסה הסופית שלפולימר שחולץ.
  15. ממיסים את הפולימר המופק בDMSO נטול מים בריכוז של 100 מ"ג / מיליליטר.
  16. אחסן את הפולימר המומס ב -20 ° C המוגנים מפני אור ולחות.

2. זריעת תאים

  1. טרום מעיל הבסיס של בקבוק תרבות רקמת T-150 עם ג'לטין 0.1% (wt / כרך). ג'לטין צריך להישאר בבקבוק במשך 30-45 דקות. ציפוי ג'לטין עוזר הידבקות של ADSCs.
  2. ג'לטין לשאוב מהבקבוק T-150 המצופה מראש.
  3. הוסף 4 x 10 6 ADSCs (≤ קטע 3) לבקבוק ב20 מיליליטר של DMEM המכיל 10% FBS, 1% פניצילין / סטרפטומיצין ו10 ng / ml bFGF.
  4. מניחים את בקבוק T-150 בחממה על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 לילה.
  5. תתחיל בהליך transfection ביום המחרת.

3. Nanoparticle הכנה וTransfection

  1. ההליך הבא הוא עבור ההכנה של חלקיקים המכילים DNA פלסמיד 16.1 מיקרוגרם ל1.0 x 10 6 תאים בפולימר לפלסמיד יחס משקל של 30:1.
  2. לדלל פלסמיד דנ"א (1 מ"ג / מיליליטר, pVEGF165, Aldevron, ND, ארה"ב) לריכוז סופי של 120 מיקרוגרם / מיליליטר בנתרן אצטט (25 מ"מ) בצינור פלקון 15 מיליליטר.
  3. לדלל C32-122 (100 מ"ג / מיליליטר) לריכוז סופי של 3.6 מ"ג / מיליליטר בנתרן אצטט (25 מ"מ) בצינור פלקון שני 15 מיליליטר.
  4. לשלב את התוכן של כל צינורות פלקון לתוך צינור אחד 15 מיליליטר בז ומערבולת באופן מיידי על גבוה עבור 10 שניות.
  5. בואו הצינור לשבת בטמפרטורת חדר למשך 10 דקות להיווצרות nanoparticle להתרחש.
  6. בעוד דוגרים, להחליף בינוני בבקבוק תרבות רקמות עם DMEM בתוספת 7.8 מיליליטר מלא ל1.0 x 10 6 תאים transfected.
  7. מעביר את פתרון nanoparticle לבקבוק תרבית הרקמה ולהטות קדימה ואחורה כדי להתפשט באופן שווה.
  8. מניחים את הבקבוק בתרבית רקמה בחממה על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 למשך 4 שעות.
  9. לאחר 2 שעות, החלף את nanoparticle מכיל תקשורת עם DMEM.
  10. בעקבות דגירה 2 שעות נוספות על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, התאים מוכנים in vivo הזרקה.

4. Hindlimb איסכמיה נוהל

  1. כל הניסויים בוצעו בהתאם להנחיות אוניברסיטת סטנפורד הטיפול בבעלי חיים ועדת שימוש ופרוטוקולי APLAC אושרו. יצירת המודל העכברי של איסכמיה hindlimb מתבצע כפי שתואר לעיל. 8 אנא עיינו בהתייחסות להוראות מפורטות. תיאור קצר מסופק בהמשך.
  2. מניחים את העכבר תחת הרדמה עם 1-3% isoflurane מינון על ידי שאיפה וקצב זרימת חמצן של 1 ליטר / דקה. ודא עומק הרדמה על ידי קמצוץ הבוהן, ירידה בקצב נשימה, ועייפות.
  3. להסיר שיער מאזור הבטן ושני אזורי hindlimb של העכבר עם קצף גילוח.
  4. לעשות חתך במרכז המדיאלי ירך לכיוון קו האמצע ולאחר מכן חתך את כרית שומן שמעליה לשעברלהוות עורק הירך.
  5. ולקשור את העורק בשני אתרים: אתר הדיסטלי (קרוב לברכיים) ואתר הפרוקסימלי (דיסטלי רק לרצועה מפשעתי).
  6. כדי ליצור ligations, להפריד את העורק מהווריד וחוט תפר משי 5-0 סביב העורק. לקשור את העורק עם שני קשרים כדי להפוך את קשירה.
  7. הסר את העורק בין שתי נקודות קשירה.
  8. שטוף את אזור הניתוח עם PBS ולאחר מכן תפר את החתך נסגר.
  9. ניתן להסיר בהרדמה עכשיו. שמור חם העכבר עד ההתעוררות מחודשת. לטיפול שלאחר ניתוח, ניתן להזריק 2-4 מ"ג / קילוגרם לידוקאין תת עורי באתר החתך לפני מחדש התעוררות. ניהול כאב נוסף עשוי לכלול משלוח תת עורית של 0.05-0.1 מ"ג / קילוגרם עצירות ב12 ו24 שעות. לנטר את מצב בריאותם של העכברים פעם ביום למשך שבעה ימים על ידי התבוננות שינויים בדפוס נשימה, כאב או מצוקה גלוי, וצבע עור.
  10. לאשר איסכמיה hindlimb ידי ההדמיה זלוף דופלר לייזר.

5. זריקות תא

  1. כאשר תאי transfected והעכברים מוכנים, לשטוף תאי transfected עם PBS, trypsinize, צנטריפוגה, ולאחר מכן לספור.
  2. Resuspend תאים בצפיפות של 10 x 10 6 תאים למ"ל ב-PBS.
  3. השעיות תא צריכה להיות מופרדות לתוך צינורות Eppendorf נפרדים בהיקף של 110 μl. זה יבטיח כי כל עכבר מקבל כמות שווה של תאים.
  4. מניחים כל עכבר תחת הרדמה (isoflurane 2.5%, קצב זרימת L 1 / חמצן דק ').
  5. נקה את אזור ההזרקה עם מגבוני אלכוהול.
  6. ניצול מזרק טוברקולין 27 G, לצייר את התאים למעלה ולמטה לתוך המזרק כדי להבטיח השעיה הומוגנית מושגת. צייר את תא ההשעיה הנפח 100 μl לתוך המזרק.
  7. הזרק מחצית ההשעיה התא לאזור השרירים adductor ואז מזריק את החצי השני לאזור שריר שוק. לאחר הזרקה, השאר את המזרק במקום לפחות 15-30 שניות ללמנוע דליפה של ההשעיה התא.
  8. בקרות נאותות למחקר בבעלי החיים כוללות: 1) תאים transfected עם פלסמיד ללא קידוד (למשל פלסמיד ללא פעילות ביולוגית); 2) תאים לבד: 3) PBS.
  9. כאשר זריקות הושלמו, הסר את העכבר מההרדמה ולהתחמם עד מחדש Awakes העכבר.

6. הדמיה פליטת אור

  1. כדי להתחיל הדמיה פליטת אור (BLI), להרדים עכברים כפי שתואר לעיל.
  2. נקה את אזור ההזרקה עם מגבוני אלכוהול.
  3. מזרק ניצול אינסולין, 15 D-וציפרין מ"ג / מיליליטר (המצע לגחלילית בלוציפראז) עומס 100 μl. שמור על מצע מהאור.
  4. כדי לבצע זריקות intraperitoneal, להחזיק עכברים בעור הגב שלהם כדי למשוך את העור הקדמי שלהם מתוח. הכנס מחט intraperitoneally לאזור הבטן ולהזריק של מצע 100 μl.
  5. מניחים את העכבר בחדר ההדמיה לוציפראז IVIS תחת הרדמה.
  6. תמונת העכברים עם זמן חשיפה של 1.0 דקות. כאשר פרמטרים מוגדרים, להתחיל לרכוש תמונות.
  7. כאשר התמונה שנרכשה, לסמן את האזור של עניין על מנת למדוד את אות לוציפראז. במקרה זה, תסמן את איבר איסכמי באתר תא ההזרקה.
  8. המשך למדוד את אות לוציפראז כל דקות 3-5 עד האות מגיע לשיא ומתחיל לרדת. זהו הערך מנוצל להשוואה על פני עכברים ועל פני כמה נקודות זמן.
  9. כאשר יושלמו, להסיר את העכברים מהאולם וההרדמה. שמור על עכברים חמים עד ההתעוררות מחודשת.

7. לייזר דופלר זלוף הדמיה

  1. ההדמיה זלוף דופלר הלייזר מתבצעת כפי שתואר לעיל. 8 ההליך מתואר כאן בקצרה.
  2. לפני דופלר הדמיה העכבר צריך להיות נקי ומגולח באזורים שמעל שניהם hindlimbs ואזור הבטן כדי למנוע חפץ בשל שיער.
  3. כשהכין לתמונת דופלר, mouצריך להיות מורדם se כפי שתואר לעיל.
  4. לחמם את העכבר כדי 36 ° C על צלחת חמה תוך ניטור טמפרטורת גוף על ידי מדחום רקטלי.
  5. הנח את העכבר על משטח שחור שאינו רעיוני ולשמור בהרדמה על ידי חרטום. העכבר צריך להיות ממוקם על פני השטח הגבי שלה עם איבריה החשופים באופן שווה.
  6. מקם את חיישן הלייזר דופלר בערך 15 ס"מ מעל העכבר ולכוון את מצביע הלייזר מהחיישן כלפי אזור המפשעה של העכבר.
  7. כאשר סמן העכבר וחיישן דופלר נמצאים בעמדה, ניתן למצוא תמונות של ניצול תוכנת LDPIwin ידי לחיצה על הכפתור 'התחל'.
  8. מדידות זלוף יחסית יכולים להילקח על ידי המצביע על שתי hindlimbs (איסכמי וללא איסכמי) כאזור של אינטרסים (ROI). היחס של זלוף הממוצע של איסכמי לhindlimb אינו איסכמי יציין זלוף היחסי.

8. רקמת קציר נוהל

  1. כאשר מוכן tis עכבר קצירלתבוע היסטולוגיה ו / או עיבוד ביוכימיים, צריך להיות מורדמים בעכבר. הנה, את העכבר הוא מורדמים על ידי החשיפה לisoflurane 5% ל3-5 דקות, ולאחר מכן הרדמת חסד העכבר על ידי נקע בצוואר הרחם.
  2. חותכים את העור שמעל מקיף את hindlimb circumferentially באזור הדיסטלי הבטן ופרוקסימלי לhindlimb. העור נחתך מהגחון למשטחי הגב, כך שהעור יכול להיות אסוף מעל hindlimb לכף הרגל.
  3. על מושך את עור גב, הגפיים יכולים להיות קטועים על ידי ניצול מספריים לנתיחה בוטים לחתוך במפרק האגן וירך.
  4. שתי רקמות עיקריות נלקחות לניתוח: שרירי adductor המדיאלי ושרירי הגסטרוקנמיוס.
  5. לבדיקת רקמות, כדי לשבץ את הרקמות אחת או בשתי בטמפרטורה אופטימלית חיתוך (אוקטובר) לcryosectioning.
  6. לאנליזה ביוכימית, לאסוף רקמות אחד או שני למיליליטר Eppendorf 1.5 ולצלול לתוך אמבט של חנקן נוזלי לפחות 2 דקות. הדגימות יכולות להיותמאוחסן ב -80 מעלות צלזיוס במשך עיבוד עתיד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

לאחר ערבוב יחד, הפולימר החיובי טיעונים (C32-122) וטעון שלילי עצמי מרכיב פלסמיד דנ"א לתוך חלקיקים. היווצרות Nanoparticle ניתן לאשר באמצעות ניתוח אלקטרופורזה כלומר complexation בין C32-122 ופלסמיד דנ"א ימנע התגייסות של ה-DNA באלקטרופורזה. הפולימר משמש כמגיב transfection כדי להקל על ספיגה משופרת של ה-DNA לתוך תאי היעד ואת הביטוי הבא של חלבוני קידוד (איור 2). ניתן transfected תאים עם כל גנים טיפוליים או DNA כתב כגון חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) כדי ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כאן אנו מדווחים שיטה לתכנת תאי גזע בוגרים לביטוי יתר גורמים טיפוליים באמצעות חלקיקים שאינם נגיפיים, מתכלים. פלטפורמה זו שימושית במיוחד לטיפול במחלות בו תאי גזע באופן טבעי יכולים בבית, כגון איסכמיה וסרטן. 9-10 כמו כן, פלטפורמת מסירת הגן אינו נגיפית מאפשרת לביטוי יתר חולף של גורמים טיפוליים, אשר מתאים למרבית ההתחדשות ופצע הרקמות תהליכי ריפוי. תהליך transfection תלוי בכניסת ה-DNA יעילה לתאים, ובאופן כללי עובד היטב בסוגים באופן פעיל, חלוקת תא, אך לא כמו גם בתאים שאינם מתחלק...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

המחברים רוצים להכיר איגוד לב האמריקאי הלאומי מדען הפיתוח גרנט (10SDG2600001), סטנפורד Bio-X הבינתחומי יוזמת תכנית, וחוקרי הרפואה של אוניברסיטת סטנפורד תכנית מחקר למימון.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
DMEMInvitrogen11965
סרום בקר עובריInvitrogen10082
פניצילין/סטרפטומיציןInvitrogen15070
גורם גדילה בסיסי פיברובלסטיםפפרוטק100-18B
1,4-בוטנדיול דיאקרילט (90%)סיגמא אולדריץ'411744ראשי תיבות: C
5- אמינו-1-פנטנול (97%)אלפא אסאר2508-29-4ראשי תיבות: 32
טטרה-אתילן גליקולדיאמין > 99 %)Molecular Biosciences17774ראשי תיבות: 122
נתרן אצטטG-BiosciencesR010
פוספט חוצץ מי מלחInvitrogen14190-144
טטרהיופוראן נטול מים (> 99.9%)סיגמא אולדריץ'401757
דיאתיל אתר נטול מים (> 99%)Fisher ScientificE138-4
DMSO נטול מים (> 99.9סיגמא אולדריץ'276855
ג'לטיןסיגמא אולדריץ'G9391
טריפסין-EDTAInvitrogen25200
D-לוציפריןGoldBio
טמפרטורת חיתוך אופטימלית (O.C.T)Tissue-Tek4583
Rat Anti-Mouse CD31BD Pharmingen550274
Alexa פלואור 594 נגד חולדות IgGInvitrogenA11007
%

מקורות

  1. Deveza, L., Choi, J., Yang, F. Therapeutic angiogenesis for treating cardiovascular diseases. Theranostics. 2, 801-814 (2012).
  2. Yang, F., et al. Genetic engineering of human stem cells for enhanced angiogenesis using biodegradable polymeric nanoparticles. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 3317-3322 (2010).
  3. Mangi, A. A., et al. Mesenchymal stem cells modified with Akt prevent remodeling and restore performance of infarcted hearts. Nat Med. 9, 1195-1201 (2003).
  4. Lee, J. Y., et al. Enhancement of bone healing based on ex vivo gene therapy using human muscle-derived cells expressing bone morphogenetic protein 2. Hum. Gene Ther. 13, 1201-1211 (2002).
  5. Park, K. I., et al. Neural stem cells may be uniquely suited for combined gene therapy and cell replacement: Evidence from engraftment of Neurotrophin-3-expressing stem cells in hypoxic-ischemic brain injury. Exp. Neurol. 199, 179-190 (2006).
  6. Green, J. J., Langer, R., Anderson, D. G. A combinatorial polymer library approach yields insight into nonviral gene delivery. Acc Chem Res. 41, 749-759 (2008).
  7. Yang, F., et al. Gene delivery to human adult and embryonic cell-derived stem cells using biodegradable nanoparticulate polymeric vectors. Gene Ther. 16, 533-546 (2009).
  8. Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. Murine model of hindlimb ischemia. J. Vis. Exp. , e1035(2009).
  9. Ceradini, D. J., et al. Progenitor cell trafficking is regulated by hypoxic gradients through HIF-1 induction of SDF-1. Nat. Med. 10, 858-864 (2004).
  10. Kidd, S., et al. Direct evidence of mesenchymal stem cell tropism for tumor and wounding microenvironments using in vivo bioluminescent imaging. Stem Cells. 27, 2614-2623 (2009).
  11. Sunshine, J., et al. Small-molecule end-groups of linear polymer determine cell-type gene-delivery efficacy. Adv. Mater. 21, 4947-4951 (2009).
  12. Sunshine, J. C., Akanda, M. I., Li, D., Kozielski, K. L., Green, J. J. Effects of base polymer hydrophobicity and end-group modification on polymeric gene delivery. Biomacromolecules. 12, 3592-3600 (2011).
  13. Lynn, D. M., Langer, R. Degradable poly(β-amino esters): Synthesis, characterization, and self-assembly with plasmid DNA. J. Am. Chem. Soc. 122, 10761-10768 (2000).
  14. Eltoukhy, A. A., et al. Effect of molecular weight of amine end-modified poly(beta-amino ester)s on gene delivery efficiency and toxicity. Biomaterials. 33, 3594-3603 (2012).
  15. Glover, D. J., Lipps, H. J., Jans, D. A. Towards safe, non-viral therapeutic gene expression in humans. Nat. Rev. Genet. 6, 299-310 (2005).
  16. Dave, U. P., Jenkins, N. A., Copeland, N. G. Gene therapy insertional mutagenesis insights. Science. 303, 333(2004).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

תכנות תאי גזעביטוי יתר של VEGFתאי גזע נגזרים מרקמת שומןסינתזת פולימריםיצירת ננו-חלקיקיםטרנספקציה של תאי גזעמודל איסכמיה של הגפה האחוריתדימות ביו-לומניסנציה
תאי גזע תכנות טיפולי אנגיוגנזה שימוש אורגניים פולימריים חלקיקים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.