עכברי צוואר הרחם לב השתלת דגם שימוש בטכניקת חפתים השתנה

סיכום

מודל השתלת לב בצוואר הרחם העכברי הוא גם מתאים חיסוני, כמו גם מחקרי פציעת reperfusion איסכמיה. שינינו את התהליך תוך שימוש בטכניקת שרוול שאינו תפר וביצעו יותר מ 1,000 השתלות מוצלחות עם גישה זו.

במסמך זה, אנו מספקים פרטים נוספים בטכניקה זו כדי להשלים את הווידאו.

תקציר

מודלים של עכברים הם בעלי עניין מיוחד במחקר מאז מגוון רחב של נוגדנים חד שבטיים ומוגדרים באופן מסחרי טהור וזני נוקאאוט זמינים לביצוע מכניסטית במחקרי vivo. בעוד מודלים השתלת לב תוך שימוש בטכניקת תפר היו ראשון שפותחו בהצלחה בחולדות, התרגום למקבילה עכברית משומשת באותה מידה נרחבת מעולם לא הושגה בשל המורכבות הטכנית של הליך מייקרו. בניגוד לכך, טכניקות שרוול שאינו תפר, גם פיתחו בתחילה בחולדות, הותאמו בהצלחה לשימוש בעכברי ^1-3. טכניקה זו לrevascularization כוללת שני גדולים צעדי I) everting כלי המקבל על שרוול פוליאתילן; II) מושך את כלי התורם להשתלט על כלי שיט נמען everted לשעבר ומחזיק אותו במקום עם עניבה היקפית. זה מבטיח המשכיות של שכבת האנדותל, זמן פעולה קצר ושיעורי patency גבוהים מאוד ^4. t "> שימוש בטכניקה זו להשקת כלי דם שבצעו יותר מ 1,000 השתלות לב בצוואר הרחם עם שיעור הצלחה כולל של 95%. לעורקי זרימה בעורק התרדמה המשותף וקשת אב העורקים הפרוקסימלי היו anastomosed וכתוצאה מכך זלוף מדרדר של הלב המושתל. לניקוז ורידי עורק הריאה של השתל היה anastomosed עם וריד הצוואר החיצוני של הנמען ^5.

במסמך זה, אנו מספקים פרטים נוספים בטכניקה זו כדי להשלים את הווידאו.

מבוא

השתלת לב מייצגת את טיפול בחירה בחולים הסובלים ממחלות לב בשלב סופי שונות. התקדמות בטכניקות כירורגיות, טיפול מונע יעיל יותר של זיהומים, ומשטרי דיכוי המערכת החיסונית רומן הביאה תוצאה בשיפור ניכרת של השתלת איברי ^6. עם זאת, הישרדות שתל לטווח ארוך לא השתפרה בקפדנות בשנים האחרונות ^7. הדחייה כרונית, מאופיינת בטרשת עורקת השתלה ממשיכה להיות מכשול עיקרי להישרדות שתל לטווח ארוך ^8-11.

המודל של השתלת לב heterotopic בעכברים מספק כלי חשוב ותקף לניתוח של מנגנון חיסוני במהלך אקוטי כמו גם דחייה כרונית ^12-15.

נכון להיום מודל ההשתלה השכיח ביותר היא עדיין השתלת לב עכבר הבטן תוך שימוש בטכניקת התפר. אב העורקים העולה של לב תורם anastomosed לאב העורקים bdominal ועורק הריאה הוא anastomosed לווריד הנבוב הנחות של הנמען. חלק ניכר מהקושי מייקרו של מודל התפר מבוסס על גודלו הקטן של כלי השיט, אשר נתפרו ^16,17.

בניגוד למודל תפר הלב ממוקם באזור הצוואר של הנמען בי וריד הצוואר החיצוני anastomosed לעורק הריאה ועורק תרדמה המשותף אב העורקים של התורם.

הרציונל של פיתוח מודל השתלת לב בצוואר הרחם תוך שימוש בטכניקת השרוול היה לי מודל חיה, אשר מאפשר השגת אחוזי הצלחה גבוהה עם מיומנויות מייקרו בסיסיות שתאפשר יישום רחב של מודל זה. היתרונות העיקריים של שיטה זו הם ההשקה מתרחשת באופן משמעותי פחות קשורות לסיבוכים כמו דימומים ופקקת בהשוואה למודל התפר ^18.

פרוטוקול

בעלי חיים הם שוכנו במתקן הפתוגן ללא מחסום. כל בעלי החיים לקבל טיפול אנושי בקנה אחד עם "המנהלים של מעבדה טיפול בבעלי חיים", שגובשו על ידי האגודה הלאומית למחקר רפואי "ואת" המדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה "שהוכנו על ידי האקדמיה הלאומית למדעים ופורסמו על ידי הלאומי מכוני בריאות (NIH הפרסום לא. 86-23, מתוקנים 1985). כל הניסויים אושרו על ידי המשרד האוסטרי של חינוך, מדע ותרבות.

.1 נמען הכנה

1. להרדים את החיה הנמען עם הזרקת im של xylazine (5 מ"ג / קילוגרם משקל גוף) וקטמין (100 מ"ג / קילוגרם משקל גוף).
2. הסר את כל השיער באזור צוואר הרחם לרוחבו של בעל החיים ולשפשף את שדה ניתוח שלוש פעמים באמצעות chlorhexdine.
3. מניחים את העכבר בעמדת פרקדן על שדה הניתוח.
4. הבא לעשות חתך בעור מצוואר incision ללסת התחתונה הימנית התחתונה.
5. בהמשך לכך, בבוטות לגייס את הווריד הנכון החיצוני הצוואר (EJV) ולחלק את הסניפים בין חיבורי אותיות.
6. ואז לחלק את EJV בין חיבורי אותיות והקפד להשאיר מספיק אורך לאוורט הגדם הפרוקסימלי מעל גוף השרוול.
7. הבא להסיר את האונה הימנית של בלוטת submandibular.
8. להשקת הוורידים להעביר את הקצה הפרוקסימלי של EJV דרך שרוול פוליאתילן ולתקן אותה בידית של השרוול עם מהדק מיקרו.
9. הסר את הקשירה בסוף של כלי השיט, אוורט לומן על השרוול ולתקן את זה עם 8-0 משי לולאה (איור 1 א).
10. בהמשך לכך יחצה את שריר sternocleidomastoid תקין עם כויה דו קוטבית כדי לקבל גישה לעורק התרדמה המשותפת.
11. הבא לגייס את עורק תרדמה המשותף ולחתוך את הספינה בין חיבורי האותיות.
12. הבא לגייס את עורק תרדמה המשותף ולחתוך את הספינה בין חיבורי האותיות.
13. Pass דיססוף הטל של כלי דרך השרוול ולתקן אותה עם מהדק העורק.
14. הסר את הקשירה בסוף של כלי השיט ולהתנפח לומן באמצעות dilatators כלי דם. בשלב הבא, באנלוגיה לEJV, אוורט העורק מעל השרוול ולתקן את זה עם לולאת 8-0 משי.

רכש לב .2

1. להרדים את העכבר התורם עם הזרקת im של xylazine (5 מ"ג / קילוגרם משקל גוף) וקטמין (100 מ"ג / קילוגרם משקל גוף). ואז להסיר את כל השיער באזור הבטן של בעלי החיים. לשפשף שדה שלוש זמן הניתוח באמצעות chlorhexdine. המקום הבא בעכבר במצב שכיבה על המגרש האופרטיבי כפי שתואר לעיל.
2. בעקבות חתך בבטן קו האמצע, לחזור בו מהקרביים עם Q-טיפים לשמאל במטרה לחשוף את נחות הווריד הנבוב (IVC).
3. הזרק 400 μl של 1: פתרון sodium- 4 heparin- לIVC לheparinization.
4. לבצע פתיחת בית החזה ולקפל את דופן בית החזה הקדמית מעל cranially להשיג ACCESS ללב.
5. בשלב הבא, להסיר את בלוטת התימוס ולעשות אוורור חתכים בווריד הנבוב העליון ימין ועל השמאל.
6. בהמשך לכך, ינקב לבו באופן מדרדר עם 4 מעלות צלזיוס HTK פתרון על ידי cannulation של קשת אב העורקים עם מזרק G 27 ברמה של סניף brachiocephalic.
7. ולקשור את הווריד הנבוב הנחות ומעולה עם 8-0 משי ולחלק אותם distally ליגטורה.
8. הבא לחלק את קשת אב העורקים ברמה של cannulation הקודם ולנתח חופשי תא המטען ריאתי ולחלק אותו כמה שיותר רחוק distally ככל האפשר.
9. בעקבות כך, לקשור את ורידי ריאה עם קשירה בתפזורת ולחלק אותם distally ליגטורה.
10. לבסוף, להסיר את הלב מאתר התורם ולאחסן אותו ב4 מעלות צלזיוס פתרון HTK (איור 1b).

.3 השרשה

1. מניחים את שתל לב באזור צוואר נמען במורד עמדה הפוכה (איור 1 ג ).
2. הבא למשוך את תא המטען ריאתי של הלב על פני מבנה שרוול וריד של הנמען ולתקן את זה עם משי לולאה (1D איור).
3. לבצע ההשקה בין אב העורקים של השתל והעורק מופנה החוצה של החיה הנמען באותו אופן (איור 1e).
4. בהמשך לכך, להסיר את מהדק הוורידים ראשון, ואחריו את המהדק העורק. לב reperfused ומתחיל לפעום בתוך 1-2 דק '. במהלך reperfusion ללחלח את הלב עם מי מלח חמים (35 מעלות צלזיוס).
5. לבסוף לסגור את פצע הניתוח עם 6-0 תפרים רציפים (איור 1e).

.4 לאחר ניתוח טיפול, Endpoint

1. תן עד 0.3 מ"ל ip מלח הרגיל לאחר הניתוח להחלפת נוזל.
2. מניחים את החיה תחת מנורת חום עד שהתעורר מהרדמה.
3. ברגע ער, להחזיר את בעל החיים למתקן הדיור שבו הם מקבלים כרצונך מזון ומים.
4. לmiכאב המזער במהלך 7 הימים לאחר הניתוח הראשונים לנהל carprofen (4mg / קילוגרם כל תת עורי 12 שעות (sc). בנוסף, לתת Buprenorphin (0.1 מ"ג / קילוגרם) מייד אחרי הפעולה בכל שעה 12 במשך 5 ימים.
5. להשיג המשקל (גרם) של כל שבוע חיה נמען להעריך לצריכת תזונה נכונה. אם יש ראיות של יותר מ 10-15% ירידה במשקל בהשוואה למשקל בניתוח עדכני, אדישות, משתק או גב מאוד כפוף, להקריב החיה באמצעות שאיפת isoflurane מסוף לפני שהגיע לנקודת הסיום הקלינית. גם להקריב את החיה אחרי הלב נדחה.

תוצאות

איור 2 מראה נתוני הישרדות נציג allografts לב מתורמי BALB / ג לאחר ההשתלה לתוך C57BL / 6 המקבלים תואמים MHC באופן מלא. לבבות נדחים ביום 7 ± 1 לאחר השתלה. מישוש אצבע של השתל המושתל הוא שיטה רגישה לגילוי כמובן תלויות בזמן של דחיית שתל. כל השתלות לב syngeneic מבוצעות בסדרה שלנו שרדו ללא הגבלת זמן (> 150 ימים).

דיון

דחייה של allografts כלי הדם כרוך שפע של צעדים שונים שניתן להעריך רק באמצעות מספיק במודלים חוץ גופית. תופעות כמו הרגישות של המקבלים, עיבוד אנטיגן באיברי הלימפה משניים אלא גם הבידול וההתפשטות של תאים חיסוניים המוסמכים הן טובים יותר מאופיינות in vivo. מודלים של בעלי החיים הם בכך הכלי האידיאלי למחקר translational ^16. מודלים של עכברים עדיין מייצגים את הסטנדרט בהשתלה בסיסית ומחקר חיסוני זהב מאז מגוון רחב של עכברים הטרנסגניים ונוקאאוט הגן זמין, ומספר גדול של ...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Yasargil קליפ מיני קבוע 7 מ"מ	Aesculap	FE720K
מיקרו כלי קליפ	S & T	B1 00396 V
מיקרומספריים	FST	14075-11
מרחיב כלי	S & T	D-5a.2 00125
מיקרו-מלקחיים	FST	Dumont 11271- 30
קליפקטור	S & T	CAF-4 00072
קליפ מיקרו-כלי	S & T	B1 00396 V