מאמר שיטה

Assay המבוסס תא זרימת cytometry תפוקה גבוהה לזיהוי נוגדנים לN-מתיל-D-aspartate קולטן דופמין או-2 קולטן בסרום אדם

DOI:

10.3791/50935

⸱

23 בנובמבר 2013

 ,  ,  ,  ,  , 
1Institute for Neuroscience and Muscle Research, The Kids Research Institute at the Children's Hospital at Westmead, The University of Sydney, 2Flow Cytometry Centre, Westmead Millennium Institute for Medical Research

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במהלך השנים האחרונות, מבחני מבוססי תאים חיים כבר השתמשו בהצלחה כדי לזהות נוגדנים כנגד פני השטח ואנטיגנים קונפורמציה. כאן, אנו מתארים שיטה באמצעות זרימת cytometry תפוקה גבוהה המאפשר הניתוח של קבוצות גדולות של חולים. זיהוי של נוגדני רומן ישפר את האבחון וטיפול בהפרעות חיסונית בתיווך.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במהלך השנים האחרונות, נוגדנים כנגד פני השטח וחלבונים המעורבים בקונפורמציה העצבית זוהו במחלות של מערכת העצבים המרכזית אוטואימונית בילדים ומבוגרים. נוגדנים אלה היו בשימוש כדי להדריך את האבחון וטיפול. מבחני מבוססי תאים שיפרו את זיהוי של נוגדנים בסרום חולה. הם מבוססים על הביטוי על פני השטח של מוח אנטיגנים על תאי אוקריוטים, אשר לאחר מכן מודגרת עם סרה מטופל מדוללת ואחריו נוגדנים משני fluorochrome-מצומדות. לאחר כביסה, נוגדנים משני מחייבים מנותחים לאחר מכן על ידי cytometry זרימה. הקבוצה שלנו פיתחה זרימת תפוקה גבוהה cytometry assay מבוסס תאים חיים כדי לזהות באופן מהימן נוגדנים כנגד קולטני הנוירוטרנסמיטר ספציפי. שיטת cytometry זרימה זו היא ישר קדימה, כמוני, יעיל, והשימוש במערכת סמפלר תפוקה גבוהה מאפשר למחזורי מטופל גדולים להיות assayed בקלות בפרק זמן קצר של זמן. בנוסף, זו המבוססת על תא כלומר ניתן להתאים בקלות לאיתור נוגדנים למטרות רבות ושונות אנטיגני, שניהם ממערכת העצבים המרכזית והפריפריה. גילוי סמנים ביולוגיים נוגדן רומן נוספים יאפשר אבחון מהיר ומדויק ולשפר את הטיפול בהפרעות חיסונית בתיווך.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בשנים האחרונות, טפסים אוטואימונית של מערכת עצבים המרכזית מחלות (CNS) זוהו. הוכח כי מחלות אלה קשורים ומוגדרים על ידי הנוכחות של נוגדנים עצמיים. נוגדנים אלה נקשרים לקולטנים עצביים או חלבונים סינפטיים המעורבים ב1,2 העצבית. אנטיגנים שונים שכבר זוהו, כגון קולטן N-methyl-D-aspartate (NMDAR) 3-5, חומצת B קולטן γ-aminobutyric (GABA-B) קולטן 6, α-אמינו-3-hydroxy-5-methyl-4- קולטן חומצת isoxazolepropionic (AMPA) 7, ערוץ אשלגן תלוי מתח (VGKC) חלבונים הקשורים: חלבון לאוצין עשיר מופעלת גליומה 1 (LGL-1) וקשורים contactin החלבון 2 (capsr2) קולטן 8,9, גלוטמט 5,10 , ודופאמין-2 קולטן (D2R) 11. בעבר, הפרעות אלה אוטואימונית של מערכת העצבים המרכזית (בעיקר בשם דלקת קרום המוח) היו לעתים קרובות לא מאובחנים ואינם מטופלים. סמנים ביולוגיים נוגדנים אלה רומן, למשלנוגדן NMDAR או נוגדן D2R, השתפר באופן משמעותי אבחנה ומודעות, ופתח אפשרויות טיפול בחולים. ואכן, טיפול מוקדם עם immunotherapies קשור בתוצאות משופרות 11,12.

שיטות מסורתיות לאיתור נוגדנים, כגון assay enzyme-linked immunosorbent (ELISA) וכתם מערבי שימשו לזיהוי של נוגדנים בסרום. עם זאת, הם לא בקלות יאפשר זיהוי של אפיטופים תאיים או משטח ו, ולא, עשוי לחשוף immunoreactivity כלפי epitope תאיים. יתר על כן, נוגדנים שנקשרים לתחום תאי של חלבונים חשובים המעורבים בהעברה עצבית עשויים להיות 2,3,7,13,14 פתוגניים. לכן, הפיתוח של מבחני מדויקים ורגישים כדי לגלות תא שטח רלוונטי או מטרות נוגדנים תאיים בחולים הוא בעל חשיבות עליונה. שיטת תקן זהב בתחום מתבססת על השימוש בתאים חיים, במה שמכונה "תא-baמבחני SED ". שיטה זו כרוכה בביטוי של אנטיגן על פני השטח של תאי יונקים (לרוב 293 תאים עובריים אנושיים בכליות (HEK293)) בצורה המקורית שלו על ידי transfection של וקטורים המכילים את רצף cDNA המלא של אנטיגן של עניין. לאחר מכן תאי nonpermeabilized בשידור חי מודגרת עם סרום מטופל מדולל ואחריו אימונוגלובולינים אנטי אנושיים fluorochrome מצומדות (איג) נוגדנים משני. העצמה או רמת הקרינה לאחר מכן זוהתה והיא קשורה לרמה של נוגדן מחייב. טכניקה זו היא ספציפית, אלא כאחד אנטיגן הוא ביטוי יתר בתאים. שימוש נרחב ביותר "לקריאה מתוך" כבר ניתוח מיקרוסקופיה confocal לאחר immunocytochemistry 4,5,8-10. עם זאת, cytometry זרימת מבחני מבוססי תאים שימשה בהצלחה לאיתור נוגדנים בחולים עם מחלות demyelinating 15-17. בפרט, ווטרס ואח'. 15 לעומת זיהוי של נוגדנים באמצעות מחבתאל של שיטות לזיהוי נוגדנים כוללים מבחני מבוססי תאים ואחריו במיקרוסקופ או cytometry זרימת מנתח, והוכיח cytometry זרימת assay מבוסס תאים להיות השיטה רגישה ביותר, מדויקת ואמינה. לכן, cytometry זרימת assay מבוסס תאים היא יתרון כפי שהיא כמוני, לא חוקר תלוי, ואינו כרוכים בשימוש בחומר רדיואקטיבי. זה גם נוח שכן היא מאפשרת מחזורי מטופל גדולים להיות מאושרים בפרק זמן קצר.

לאחרונה, יש לנו מותאם זרימת תפוקה גבוהה cytometry assay מבוסס תאים כדי לזהות נוגדני NMDAR ונוגדני D2R בחולים עם מחלות אוטואימוניות של מערכת העצבים המרכזית 11. הקבוצה שלנו לאחרונה זוהתה נוגדני NMDAR בסרה מטופל באמצעות cytometry זרימת assay מבוסס תאים. סרום הנוגדנים חיוביים NMDAR אלה נותחו בעבר באמצעות מיקרוסקופיה confocal ונמצא גם להיות חיובי 11. פרוטוקול זה מתאר cytometry זרימה assay מבוסס תאים לצורך זיהוי של גנוגדן onformation רגיש במערכת העצבים המרכזית בסרום חולה ניצול סמפלר תפוקה גבוהה אוטומטי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Subcloning אסטרטגיה לבניית pIRES2-EGFP וקטור הקידוד D2R או NMDAR

  1. השג שיבוט cDNA באורך מלא של D2R אדם או למקטע NMDAR 1 (NR1).
  2. בחר וקטור ביטוי, כגון pIRES2-EGFP, אשר מתאים לביטוי של חלבונים הטרנסממברני עם חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר כתב (GFP) תחת שליטה של ​​אתר פנימי הריבוזום כניסה (IRES), מה שמאפשר שני אנטיגנים וGFP להיות coexpressed ב תאים בנפרד.
  3. Subclone cDNA האנושי בתוך וקטור pIRES2-EGFP.
    1. לsubclone cDNA, השתמש אנזימי הגבלה מתאימים (לדוגמא NheI וXhoI לאדם D2R cDNA).
    2. cDNA לחתוך ולקשור להכניס בתוך וקטור pIRES2-EGFP מוגבל.
    3. רצף ligated pIRES2-EGFP D2R או וקטור NMDAR כדי לבדוק אם הווקטור מכיל את הרצף הנכון.
    4. לטהר ולהגביר D2R pIRES2-EGFP או וקטור NMDAR לשימוש מאוחר יותר בtransfection.
itle "> 2. transfection תא HEK293 על ביטוי העצבי Antigen

  1. תרבות תאי HEK293 בצלוחיות תרבית רקמה עם הנשר בינוני של Dulbecco הטרי השונה (1x) (DMEM) להשלים עם L / 4.5 גרם D-גלוקוז, L-גלוטמין ו110 מ"ג / פירובט נתרן L בתוספת 10% בסרום שור העובר (FBS), 2 מ"מ Glutamax, ו50 מיקרוגרם / מיליליטר גנטמיצין.
  2. ניתוק תאי HEK293 באמצעות טריפסין והעברת צינור חרוטי.
    1. שטוף ידי צנטריפוגה תאים ב 250 XG במשך 6 דקות ו resuspend התא גלולה ב DMEM המלא הטרי.
  3. ספירת התאים זרע 6 צלחות גם בסביבות 8 x 10 5 תאים היטב / ותרבות הלילה בDMEM 2ml על 37 ° C ו 5% CO 2 באינקובטור.
  4. ברגע שהם הגיעו confluency סביב 70%, transfect HEK293 התאים עם pIRES2-EGFP NR1 (HEK293 NMDAR + תאים), pIRES2-EGFP D2R (HEK293 D2R + תאים), ו( HEK293 תאי CTL; בקרת וקטור) pIRES2-EGFP כדלקמן. לשמור על כמה תאי HEK293 untransfected לפיצוי בשלב מאוחר יותר.
    1. הכן את הנפח הנדרש של תערובת transfection הכולל 2.5 מיקרוגרם DNA, 200 μl 0.9% נתרן כלורי ו4 מיקרוגרם / מיליליטר polyethylenimine / טוב (כל אחד המכיל 2 מיליליטר DMEM להשלים טרי).
    2. מייד מערבולת התערובת ל10 שניות ו דגירה בטמפרטורת חדר (RT) עבור 10 דקות, לפני שמוסיף נפח של תערובת transfection לבארות המתאימות.
    3. מכסה את הצלחת, לעטוף את הצדדים עם Parafilm, ו צנטריפוגות ב XG 280 למשך 5 דקות כדי לסייע transfection תא.
    4. הסר את Parafilm ולאחר מכן למקם בחממה לתרבות ב 37 ° C.
    5. החלף תקשורת תרבות 18 שעה מאוחר יותר עם DMEM המלא טרי, ולשמור בתרבות לעוד 72 שעה.
    6. אופציונאלי: לאחר transfection 72 שעה, ניתן לבחור תאי transfected על ידי התרבות בDMEM המלא בתוספת 250 מיקרוגרם / מיליליטר Geneticin, על מנת לקבל transfectant יציב polyclonal.

class = "jove_title"> 3. לזרום assay המבוסס תא Cytometry לאיתור של נוגדנים לאנטיגנים במשטח עצביים

  1. ניתוק HEK293 NMDAR +, HEK293 D2R +, וHEK293 תאי CTL על ידי דגירה עם 500 μl / טוב Versene למשך כ 5 דקות על 37 ° C.
    1. Resuspend ב 2ml/well של PBS (-Ca 2 + /-Mg 2 +) בתוספת 2% FBS (PBS / FBS) והעברה ל15 מיליליטר או 50 מיליליטר צינור חרוטי.
    2. שטפו תאים על ידי צנטריפוגה ב250 XG במשך 6 דקות ו resuspend התא גלולה ב 15-50 מיליליטר PBS / FBS. חזור על לשטוף 2x.
    3. ספירת התאים ולאחר מכן resuspend ב PBS / FBS ב1 x 10 6 תאים / מיליליטר.
  2. עיצוב תבנית 96, גם לרכישת cytometry הזרימה, בהתחשב בכך שHEK293 D2R + או HEK293 NMDAR + תאים, כמו גם תאי HEK293 CTL יהיו חייבים להיות הודגרו עם כל דגימת חולה או נוגדן ראשוני.
  3. תאי זרע בצלחת 96 היטב V-תחתון ב50,000 תאים /ll פי cytometry זרימת תבנית רכישה.
  4. גלולה התאים על ידי צנטריפוגה צלחת 96 היטב ב450 XG במשך 5 דקות ולהסיר בעדינות את supernatant באמצעות פיפטה רבה אלקטרונית או ידנית, מטה את הצלחת על זווית ונזהר שלא לשאוב את התא גלולה.
  5. דגירה HEK293 D2R +, HEK293 NMDAR +, וHEK293 תאי CTL עבור שעה 1 ב RT בחושך עם:
    1. דילולים סדרתי של נוגדן ראשוני על מנת להעריך את הביטוי על פני השטח אנטיגן.
    2. דגימות חולה כדי לזהות נוגדנים.
  6. השתמש בזרימה מתאימה cytometry בקרות פיצוי, למשל. תאי HEK293 untransfected בלא כתם, ה-GFP + HEK293 תאים (AF647 -), וAF647 + HEK293 תאי untransfected (GFP).
  7. שטפו תאים על ידי צנטריפוגה ב450 XG במשך 5 דקות ו resuspend התא גלולה ב μl 170 PBS / FBS. חזור על שלב לשטוף פעמים נוספות.
  8. דגירה תאים עבור h 1r ב RT בחושך עם 1:100 דילול של נוגדנים משני AF647 מצומדות (IgG אנטי אנושי לסרום מטופל ואנטי העכבר IgG לנוגדנים עיקריים נגד NR1 או אנטי D2R).
  9. לשטוף את התאים שלוש פעמים, כמו בשלב 3.7, ו resuspend ב35 μl PBS / FBS עבור cytometry זרימת רכישת תא.
  10. הגדרת סמפלר התפוקה גבוהה (HTS) על cytometer הזרימה (BDLSRII).
  11. לרכוש 10,000 אירועים / טוב פי cytometry זרימת תבנית רכישה.
  12. יצוא ולאחר מכן לנתח את הנתונים לניתוח באמצעות cytometry זרימת חבילת תוכנה, כגון v7.5 FlowJo:
    1. ראשית, שער HEK293 התאים חיים המבוסס על קדימה (גודל) וצד (גרעיניות) מפזר.
    2. תאי שער נוסף חיים HEK293 מבוססים על ה-GFP-חיוביות גבוהה לנתח רק את תאי transfected.
    3. לקבוע את עוצמת הקרינה הממוצעת (MFI) של ערוץ AF647 בתוך התאים GFP חיובי בשידור חי.
    4. נתוני יצוא לאקסל או פריזמה לניתוח:
      1. מגרש גoncentrations של נוגדן ראשוני (אנטי NMDAR או נוגדן אנטי D2R) לעומת MFI המתקבל מהתאים הודגרו עם נוגדנים אלה.
      2. עבור כל דגימת חולה ובקרה, לקבוע את ΔMFI ידי הפחתת MFI של HEK293 תאי CTL מMFI של HEK293 D2R + או HEK293 NMDAR + תאים, בהתאמה.
      3. לחשב את הסף של חיוביות נוגדנים על ידי הוספת שלוש סטיות תקן מעל ΔMFI הממוצע של קבוצת הביקורת.
      4. דגימות בודדות עלילה קובצו לפי סוג הדם שלהם על גרף ומייצגות את הסף כקו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תאי חי HEK293 D2R + וHEK293 CTL נרכשו בcytometer הזרימה באמצעות סמפלר תפוקה גבוהה. במהלך ניתוח, תאים היו מגודרות המבוססים על פיזור קדימה (גודל) ופיזור בצד פרמטרים (גרעיניות) (איורים 1 א ו1D). HEK293 תאי transfected הביעו מולקולת הכתב, ה-GFP, בציטופלסמה, ותאי untransfected הוצאו מניתוח (איורים 1B ו 1E). בתוך ה-GFP + השער, MFI הקשורים לנוגדן AF647 מצומדות אנטי אנושי IgG המשני מחייב נמדד (1C ד...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאמר זה מתאר יישום רומן של cytometry זרימת assay מבוסס תאים חיים כדי לזהות נוגדני מיקוד חלבונים עצביים תא שטח ספציפיים באמצעות סמפלר תפוקה גבוהה. באמצעות טכניקה זו, אנו מדווחים כי תת קבוצה של חולים שנפגעו במחלות במערכת העצבים המרכזית אוטואימוניות יש נוגדנים בסרום על פני השטח NMDAR או על פני השטח D2R.

צעדים חיוניים לגילוי נוגדנים אופטימלי באמצעות זרימת תפוקה גבוהה זה cytometry assay המבוסס על תא החי כוללים 1) קבלת...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ניגוד עניינים: פטנט הוגש על ידי FB וRCD (אוניברסיטת סידני) בטענה D2R כמטרה לנוגדנים עצמיים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי המועצה האוסטרלית הלאומית לבריאות והמחקר רפואי, קרן סטאר סיינטיפיק (אוסטרליה), תסמונת טורט האגודה (ארה"ב), הטרשת הנפוצה טריש קרן מחקר והטרשת הנפוצה אוסטרליה מחקר, קרן Petre (אוסטרליה), ל 'רבקה קרן קופר למחקר רפואית (אוסטרליה). אנו מודים לכל חולים ובני משפחה שסיפקו דגימות למחקר שלנו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
pIRES2-EGFP וקטורClontech6029-1
קולטן HA-Dopamine-2 אנושי (D2R) cDNAמיזורי S& מרכז המשאבים T cDNADRD020TN00
תת-יחידה אנושית 1 של NMDAR (NR1) cDNAמתנה מפרופ' א. וינסנט  (אוקספורד, בריטניה)
נוגדן NR1 מטוהר חד-שבטי נגד עכבר (שיבוט: 54.1)BD Pharmingen556308
עכבר מטוהר חד-שבטי אנטי-DRD2 IgG (שיבוט: 1B11)Sigma-AldrichWH0001813M1-50UG
Alexa Fluor 647 חמור נגד עכבר IgG (H + L)InvitrogenA31571
Alexa Fluor 647 עז אנטי-אנושי IgG (H + L)InvitrogenA21445
דולבקו s Modified Eagle Medium (1x) 4.5 גרם/ליטר D-גלוקוז, L-גלוטמין ו-110 מ"ג/ליטר נתרן פירובטInvitrogen11995-065
סרום בקר עובריInvitrogen10099-141
GentamicinInvitrogen15710-072
GlutaMAXInvitrogen35050-061
פניצילין-סטרפטומיציןInvitrogen15140-122
GeneticinInvitrogen10131-035
Dulbecco's Sulbecco's Phosphate-Buffered Salt (1x) (-Ca2+/-Mg2+)Invitrogen14190-144
TrypLE Express (1x) עם פנול אדוםInvitrogen12605-028
0.9% נתרן כלוריבקסטרAHF7975
פוליאתילנימיןPolysciences Inc9002-98-6
VerseneInvitrogen15040-066
PureLink PCR ערכת טיהורInvitrogenK3100-01
JetQuick Gel Extraction Spin KitGenomed420050
T4 DNA LigaseRoche
פלסמיד  פלוס  Maxi KitQiagen12963
שם הציוד/תוכנהמספר קטלוגישל החברהדגם/גרסה
ציטומטר זרימה עם מערכת דגימה בתפוקה גבוההBD BiosciencesBDLSRII עם מיקרוסקופ הפוך HTS
OlympusCKX41 (עם מנורת כספית וספק כוח U-RFLT50)
פיפטה רב-ערוצית אלקטרונית (15-300 μ l)Eppendorf613-2240P12 ערוצים Xplorer Plus
ExcelMicrosoft2010
PrismGraphPad Software, Inc.v4
FlowJoTreestarv7.5
50 מ"ל צינורות חרוטיים מפוליפרופילןBD Biosciences352070
צלחת 6 בארותBD Biosciences353046
בקבוק תרבית רקמות (T75)BD Biosciences353136
ParafilmPechiney אריזות פלסטיקPM-992
V-bottom 96 בארות צלחתקורנינג651180

ערכת טיהור 10899194001 PureLink 10885843001 10481220001

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lancaster, E., Martinez-Hernandez, E., Dalmau, J. Encephalitis and antibodies to synaptic and neuronal cell surface proteins. Neurol. 77, 179-189 (2011).
  2. Vincent, A., Bien, C. G., Irani, S. R., Waters, P. Autoantibodies associated with diseases of the CNS: new developments and future challenges. Lancet Neurol. 10, 759-772 (2011).
  3. Dalmau, J., et al. Anti-NMDA-receptor encephalitis: case series and analysis of the effects of antibodies. Lancet Neurol. 7, 1091-1098 (2008).
  4. Dalmau, J., et al. Paraneoplastic anti-N-methyl-D-aspartate receptor encephalitis associated with ovarian teratoma. Ann Neurol. 61, 25-36 (2007).
  5. Dale, R. C., et al. N-methyl-D-aspartate receptor antibodies in pediatric dyskinetic encephalitis lethargica. Ann Neurol. 66, 704-709 (2009).
  6. Lancaster, E., et al. Antibodies to the GABA(B) receptor in limbic encephalitis with seizures: Case series and characterisation of the antigen. Lancet Neurol. 9, 67-76 (2010).
  7. Lai, M., et al. AMPA receptor antibodies in limbic encephalitis alter synaptic receptor location. Ann Neurol. 65, 424-434 (2009).
  8. Irani, S. R., et al. Antibodies to Kv1 potassium channel-complex proteins leucine-rich, glioma inactivated 1 protein and contactin-associated protein-2 in limbic encephalitis, Morvan’s syndrome and acquired neuromyotonia. Brain. 133, 2734-2748 (2010).
  9. Lai, M., et al. Investigation of LGI1 as the antigen in limbic encephalitis previously attributed to potassium channels: a case series. Lancet Neurol. 9, 776-785 (2010).
  10. Lancaster, E., et al. Antibodies to metabotropic glutamate receptor 5 in the Ophelia syndrome. Neurol. 77, 1698-1701 (2011).
  11. Dale, R. C., et al. Antibodies to surface dopamine-2 receptor in autoimmune movement and psychiatric disorders. Brain. , (2012).
  12. Titulaer, M. J., et al. Treatment and prognostic factors for long-term outcome in patients with anti-NMDA receptor encephalitis: an observational cohort study. Lancet Neurol. 12, 157-165 (2013).
  13. Hughes, E. G., et al. Cellular and synaptic mechanisms of anti-NMDA receptor encephalitis. J Neurosci. 30, 5866-5875 (2010).
  14. Bien, C. G., et al. Immunopathology of autoantibody-associated encephalitides: clues for pathogenesis. Brain. 135, 1622-1638 (2012).
  15. Waters, P. J., et al. Serologic diagnosis of NMO: a multicenter comparison of aquaporin-4-IgG assays. Neurol. 78, 665-671 (2012).
  16. McLaughlin, K. A., et al. Age-Dependent B Cell Autoimmunity to a Myelin Surface Antigen in Pediatric Multiple Sclerosis. J Immunol. 183, 4067-4076 (2009).
  17. Probstel, A. K., et al. Antibodies to MOG are transient in childhood acute disseminated encephalomyelitis. Neurol. 77, 580-588 (2011).
  18. Cho, D., et al. N-terminal Region of Dopamine D2 Receptor, a Rhodopsin Family GPCR, Regulates Proper Integration into Plasma Membrane and Endocytic Routes. British journal of pharmacology. , (2011).
  19. Zhou, D., et al. Identification of a pathogenic antibody response to native myelin oligodendrocyte glycoprotein in multiple sclerosis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 19057-19062 (2006).
  20. Brilot, F., et al. Antibodies to native myelin oligodendrocyte glycoprotein in children with inflammatory demyelinating central nervous system disease. Ann Neurol. 66, 833-842 (2009).
  21. Boronat, A., et al. Encephalitis and Antibodies to Dipeptidyl-Peptidase-Like Protein-6, a Subunit of Kv4.2. Potassium Channels. Ann Neurol. 73, 120-128 (2013).
  22. Hinson, S. R., et al. Aquaporin-4-binding autoantibodies in patients with neuromyelitis optica impair glutamate transport by down-regulating EAAT2. J. Exp. Med. 205, 2473-2481 (2008).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

HEK 293GFP

מאמרים קשורים