הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ההדמיה InlC הפרשה לחקר זיהום נייד על ידי פתוגן החיידקים

9.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/51043

⸱

19 בספטמבר 2013

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Unité des Interactions Bactéries Cellules, Pasteur Institute, 2INSERM U604, 3Institut National de la Recherche Agronomique (INRA), USC2020, 4Institute of Biochemistry, ETH Zürich, 5Focal Area Infection Biology, Biozentrum, University of Basel

במאמר זה

הודעת תיקון

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

סיכום

חיידקי ליסטריה הוא פתוגן חיידקים גראם חיובי משמש לעתים קרובות כמודל עיקרי לחקר טפילות תאית. הדמיה מאוחר L. חיידקי לשלבי זיהום בהקשר של מסכי RNA התערבות קטנים מאפשר למחקר העולמי של מסלולים הסלולר נדרשים לזיהום חיידקים של תאי מארח יעד.

תקציר

ניתן לתפוס פתוגנים תאיים חיידקים ככלים מולקולריים לנתח מפלי איתות הסלולר בשל יכולתם לתמרן להפליא ולחתור תחת פונקציות תא הנדרשות להדבקת רקמות יעד מארח. בין החיידקים פתוגנים אלה, חיידקי ליסטריה הוא מיקרואורגניזם גראם חיובי ששמש כפרדיגמה לטפילות תאית באפיון של תגובה חיסונית תאית, ואשר מילאו תפקידים מרכזיים בגילוי מסלולים המולקולריים שליטה דינמיקת סחר cytoskeletal וקרום. במאמר זה, אנו מתארים assay Microscopical חזק לצורך זיהוי של שלבים מאוחרים של זיהום סלולארי L. חיידקי המבוססים על תיוג הניאון של InlC, חלבון מופרש חיידקים שמצטבר בציטופלסמה של תאים נגועים; assay זה יכול להיות בשילוב למסכים אוטומטיים תפוקה גבוהה קטנים מפריעים RNA כדי להשחירacterize מסלולי איתות תאיים מעורבים בוויסות מעלה מטה או לזיהום.

מבוא

החיידק גראם החיובי חיידקי ליסטריה הוא פתוגן שמקורן במזון שפולש לתאי מארח, משבש vacuole ההפנמה ומשכפל בציטופלסמה של תאי מארח 1. L. חיידקי הקלות של מניפולציה בהקשר המעבדה (צמיחה מהירה, הרעילות נמוכה לאנשים בריאים) קשור עם ההתמדה של תכונות ארסיות חיידקים שנצפו בדגמים סלולריים ובעלי חיים (פעילות המוליטית, ריבוי תאי דם לבנים) התירו השימוש הראשוני שלה ב1960s כמודל עיקרי ל המחקר של טפילות תאית ולהקמתן של היסודות התיאורטיים של חסינות הסלולר נגד זיהום 2. בסוף 1980s ותחילת 1990, הנתיחה של מחזור החיידקים תאיים 3, כמו גם האפיון המולקולרי של ארסי חיידקי גורמים החשובים ביותר 4-7 העדיף את השימוש של L. חיידקי ככלי מולקולרי מרכזי למניפולציה וגם החתיךy של פונקציות תא מארחות. נוכחותם של לא אלים (innocua ל ') ומינים ארסיים (חיידקי L.) בסוג ליסטריה סללו את הדרך למחקרים גנומית השוואתיים 8 זה, יחד עם ההקמה האחרונה של L. המלא חיידקי transcriptome 9, גדלו ההבנה של האבולוציה שלנו ל ' חיידקי כהפתוגן אנושי וכמערכת מודל לזיהום לומדים 10.

חיידקי L. גורם הפנמתו לתוך תאי מארח על אינטראקציה של חלבוני פני השטח של חיידקי InlA וInlB עם קולטני תא המארח שלהם E-cadherin והמטרופוליטן, בהתאמה 11-12. מחקרים מבוססי מועמד ראשוניים הובילו לזיהוי של הקישור catenins-אקטין α / β כמרכיב משמעותי של מסלול InlA פלישת 13 ושל phosphoinositide 3-קינאז (PI 3-K) כמפעיל קריטי של InlB- casca פלישה תלויהדה 14-15. מבחני proteomic ומבוססי פונקציונליים אפשרו לאחר מכן את זיהוי של גורמי רומן cytoskeletal 16 ושליחים שני שומנים 17 דרושים לפלישת תא מארח. מחקרי תעתיק 18 ופרוטאומיקה מבוססת ספקטרומטריית המסה כמותית 19 לאחרונה שופכים אור חדש בנוגע להפעלה של מפלי מארח איתות והדיכוי של מערכת החיסונית במהלך L. חיידקי לזיהום. ביולוגיה של מערכות המבוססת על גישות איון של קבוצות גדולות של גנים (kinomes, הגנום מלא) על ידי RNA התערבות קטן השתקה (siRNA) לאחרונה פתחה אפיקים חדשים לניתוח המארח הגלובלי איתות מפלים בהקשר של תפקודים תאיים ספציפיים, כולל phagocytosis ו הפנמת הפתוגן 20. מסכי siRNA הגנום כבר בוצעו בעבר לחקור מפלים סלולריים הנדרשים לזיהום של L. חיידקי בדרוזופילה phagocytic תאי S2 21-22, אבל זה סוג של ניתוח לא שבוצע בתאים שאינם phagocytic, המייצגים מטרות קריטיות לזיהום בגוף חי.

יש לנו אופטימיזציה פרוטוקול לזיהוי Microscopical של שלבים מאוחרים של זיהום על ידי ל חיידקי שמתאימים ללימודי siRNA תפוקה גבוהה של כניסת חיידקים בתוך תאי אפיתל. assay שלנו מנצל L. פולשני מאוד חיידקי לזן שמציג מוטציה נקודתית בPrfA, רגולטור תעתיק העיקרי של L. חיידקי ארסי גורמי 6: מוטציה זו (בשם PrfA *) הופכת PrfA פעיל 23 constitutively ומובילה לביטוי מוגבר של חלבוני פלישת InlA וInlB, ולכן העדפת כניסת חיידקים בתאים שאינם phagocytic אחרת גרוע נגועים. קריאת הנתונים שלנו לזיהום מבוסס על זיהוי של הצטברות cytosolic של InlC חלבון החיידקים המופרש: מולקולה זו היאמפעיל pleiotropic שבא לידי ביטוי באופן מועדף על ידי ל 'התוך cytoplasmic חיידקי 9 ובו משתתף לא רק בתא תא אל החיידקים להתפשט 24 אך גם מודולציה תגובות חיסונית מארח 25. ניאון התיוג של הפרשת InlC ידי חיידקים תאיים לא רק מאפשר להבחין נגוע מהתאים שאינם נגועים באופן ברור, אלא גם מייצג readout נקודת סיום שיכול לשמש כדי לנתח לאחר מכן זיהום בשלבים השונים שלה: כניסה, בריחת vacuolar, חיידקי cytosolic ריבוי והתפשטות תא אל התא. פרוטוקול מבוסס מיקרוסקופיה זה יכול להיות בשילוב למסכי siRNA לכן ללמוד מסלולי הסלולר מעורבים בזיהום של תאי מארח של ל ' חיידקי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. תרבויות הכנת נייד וחיידקיים, כלים Transfection ונוגדנים ראשוניים

  1. הכן צלחת אגר טרי לבודד ל בודד חיידקי ממושבות חיידקי מניית גליצרול (50% glycerol/50% רוויים תרבות לילה נוזלית חיידקים) המשיכו ב -80 ° C.
    1. שימוש במתלת אלומיניום (שמרה ב -80 מעלות צלזיוס) להובלת מניית גליצרול חיידקים, חיידקי פס קפוא בלב עירוי מוח (BHI) צלחת אגר.
    2. דגירה את הצלחת על 37 מעלות צלזיוס במהלך 48 שעה (או עד שניתן לבודד מושבות חיידקים בודדים).
    3. שמור על צלחת עבודה זו לאחר מכן על 4 מעלות צלזיוס בזמן מרבי של 1 חודש (זה ישמש לזרע תרבויות נוזליים).
    4. בפרוטוקול שלנו, אנו משתמשים בL. חיידקי סרוטיפ 1/2a EGDe.PrfA * מתח, אבל כפי שמודגם באיור 1, ל ' סרוטיפ חיידקי 4b P14.PrfA * זן נותן תוצאות דומות.
  2. הואתאי CCL2 La ATCC גדלים בנשר בינוני השתנה Dulbecco (DMEM) בתוספת 10% בסרום שור העובר (FBS) בהיעדר האנטיביוטיקה.
  3. בריכות עצמאיות של מקושקשת (שליטה) ואנטי Met-siRNAs נטענים בצלחות תרבית התאים במיקרוסקופ 384 גם שחורות.
    1. לדלל 160 pmol של siRNA ב500 μl מים RNase חינם ולהוסיף 5 μl של פתרון זה לכל טוב (ריכוז סופי: 1.6 pmol).
    2. שמור על צלחת זה ב -20 מעלות צלזיוס למשך תקופה מקסימלית של השנה 1.
  4. נוגדני ארנב polyclonal נגד חלבון חיידקי InlC התקבלו על ידי חיסון באמצעות חלבון רקומביננטי InlC-GST כפי שתואר לעיל 25.

2. הפוך transfection תא siRNA

  1. 72 שעה לפני הדלקת מביאה לטמפרטורת חדר צלחת תרבית התאים במיקרוסקופ שחורה 384 גם מכילה 1.6 pmol siRNA ב5 μl מים RNase חינם בכל טוב.
  2. צנטריפוגה את הצלחת במשך 3 דקות ב300RCF בטמפרטורת חדר כדי להפיל siRNA שהיה יכול להיות מופקד בקירות של הבארות.
  3. הכן DMEM טמפרטורת חדר בתוספת 0.4% RNAiMAX Lipofectamine.
  4. הוסף 25 μl של מדיום transfection DMEM / RNAiMAX היטב כל אחד (לא דגירה בינונית transfection זמן רב יותר מאשר 20 דקות לפני הוספתו לsiRNA).
  5. הזז את הצלחת קדימה ואחורה כדי לערבב את siRNA עם פתרון transfection, ואז לשמור את הצלחת במשך שעה 1 בטמפרטורת חדר כדי לאפשר קומפלקסי siRNA-Lipofectamine לטופס.
  6. שטוף תאי הלה מבקבוק ומחוברות או תרבית תאים תת מחוברות אחת עם 10 מיליליטר 37 ° PBS מראש חימם C.
  7. ניתוק תאי הלה על ידי הוספת 1 מיליליטר 37 ° C prewarmed טריפסין לבקבוק תרבית תאי דגירה במשך 3 עד 5 דקות ב37 ° C.
  8. תאי Re-להשעות ב10 מיליליטר 37 ° C prewarmed DMEM FBS בתוספת 16%.
  9. ספירת תאים ולהכין את השעיה תא של 12,000 תאים לכל מיליליטר DMEM בתוספתFBS 16%.
  10. הוסף 50 μl של ההשעיה התא היטב כל אחד בצלחת 384 גם.
  11. הזז את הצלחת במהירות קדימה ואחורה כדי להפיץ את התאים ולתת תאים להתיישב ל10 דקות בטמפרטורת חדר.
  12. חותם את הצלחת עם Parafilm ולשמור אותו ל72 שעות באווירה של 5% CO 2 humidified המכילה ב37 ° C.

3. זיהום סלולארי ומכתים

  1. היום לפני הזיהום, לקחת מושבה אחת של L. חיידקי מהצלחת אגר BHI ו resuspend את זה ב 5 מיליליטר של מדיום BHI נוזל בצינור קלקר 15 מיליליטר.
  2. דגירה הלילה בשעה 37 מעלות צלזיוס במכשיר יתביית על מנת לאפשר להתפתחות חיידקים.
  3. היום של הזיהום, לשטוף 1 מיליליטר של ל 'הלילה חיידקי לתרבות על ידי צנטריפוגה 2 דקות ב 10,600 RCF בצנטריפוגה בטבלה העליונה.
  4. בטל supernatant (המכיל O listeriolysin cytotoxin המופרש) מחדש להשעות גלולה ב 1 מיליליטר של PBS (repeat שלב הכביסה 3 פעמים נוספות).
  5. קרא את הצפיפות האופטית בקטריאלי ב600 ננומטר ולהעריך את מספרם של החיידקים (OD = 1 הוא שווה ערך למ"ל / חיידקי 1E9).
  6. הכן ל נאות חיידקי לדילול DMEM בתוספת 1% FBS: באמצעות זנים פולשני מאוד כמו EGDe.PrfA *, אנו ממליצים על השימוש בחיידקי 5E4 ב30 μl של מדיום בכל טוב (הריבוי של זיהום נאמדת 25 ל2,000 תאים).
  7. הסר את המדיום הסלולרי התרבות בכל טוב (80 μl) ולהחליף אותו על ידי הוספת 30 μl של L. חיידקי המכילים בינוני.
  8. צנטריפוגה את הצלחת ב200 RCF במשך 5 דקות בטמפרטורת חדר כדי לסנכרן את תהליך ההדבקה.
  9. דגירה את הצלחת לשעה 1 באווירת 5% humidified CO 2 המכילה על 37 מעלות צלזיוס בבלוק אלומיניום prewarmed.
  10. הסר את L. חיידקי המכילים בינוני מכל טוב ולהוסיף 30 μl של DMEM prewarmed תוספת 10% FBS ו40 מיקרוגרם / מיליליטר גנטמיצין להרוג את L. תאי חיידקי.
  11. דגירה של 4 שעות באווירה של 5% CO 2 המכילה על 37 מעלות צלזיוס בגוש מתכת prewarmed.
  12. הכן פתרון של PBS בתוספת פורמלדהיד 8% (פתרון זה צריך להיות מוכן טרי, כך שמונומרים פורמלדהיד, ולא הפולימרים paraformaldehyde, נמצאים בשימוש).
  13. בלי לזנוח את מדיום תרבית תאים, להוסיף 30 μl של PBS בתוספת פורמלדהיד 8% (ריכוז סופי: 4%) ו דגירה של 15 דקות בטמפרטורת חדר.
  14. הסר את מקבע ולשטוף את התאים שלוש פעמים עם 80 μl של PBS לכל טוב (לשמור על התאים בנפח סופי של μl 80 של PBS לכל טוב).
  15. הכן 1:250 דילול של הסרום אנטי InlC הארנב בPBS בתוספת saponin 0.2%.
  16. הוסף 10 μl של פתרון הנוגדן הראשוני לכל אחד גם לאחר הסרת PBS ו דגירה במשך 30 דקות בטמפרטורת חדר.
  17. מחק את עיקריפתרון נוגדן ולשטוף ארבע פעמים עם 40 μl של PBS לכל טוב.
  18. לדלל את הנוגדנים משני אלקסה פלואוריד 546 בשילוב נגד ארנב (1:250), פתרון DAPI (1:1,500) וphalloidin-Dy647 (1:150) בPBS בתוספת saponin 0.2%.
  19. הוסף 10 μl של פתרון מכתים המשני זו לכל היטב דגירה במשך 30 דקות בטמפרטורת חדר.
  20. מחק את הפתרון מכתים המשני ולשטוף ארבע פעמים עם 40 μl של PBS לכל טוב (להשאיר נפח סופי של μl 40 בכל טוב ולאטום את הצלחת).
  21. הצלחת יכולה להיות צילמה מייד או יכולה להיות מאוחסן על 4 מעלות צלזיוס המוגנת מפני אור (מכסה ברדיד אלומיניום) לניתוח שלאחר מכן.

4. תמונת רכישה וניתוח

  1. לרכוש תמונות בשלושה ערוצים שונים (350 ננומטר, 546 ננומטר ו647 ננומטר) באמצעות מטרת 10X רכוב על מיקרוסקופ אוטומטי (לרכוש מעדיף 9 תמונות בכל טוב).
  2. אות InlC ניתן למדוד באמצעות תמונהתוכנה כמו CellProfiler המאפשר פילוח אוטומטי של גרעינים וגופי תא באמצעות DAPI ומכתים phalloidin, בהתאמה ניתוח.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

ניאון תיוג של InlC cytoplasmic מספק readout חזק לזיהום תא על ידי ל ' חיידקי, כפי שמודגמים באיור 1: התא המרכזי במיקרוסקופ נגוע מאוד על ידי זן P14.PrfA * 23 כפי שניתן לראות בתמונה בניגוד השלב (ראשי חץ, איור 1 א) והוא אושר על ידי אות DAPI בי חיידקים בודדים ניתן להבחין בבירור (איור 1). מכתים InlC (superposed למכתים DAPI באיור 1C) מתאר כיצד חלבון מופרש זה צפוף מצטבר בcytosol של תאים נגועים ומאפשר זיהוי חד משמעי ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מספר פרמטרים הם קריטיים להצלחתו של פרוטוקול InlC איתור שלנו, כוללים השימוש בשורות תאים בריאים מוצגות ציטופלסמה גדולה מספיק כדי לאפשר זיהוי חד משמעי של אות InlC. ב assay אנו מציגים במאמר זה אנו מציעים את השימוש בתאי הלה CCL2, שהם גם מתאימים במיוחד עבור assay שלנו בעקבות ההארכה של מרחב cytosolic; שיבוטים הלה אחרים כגון תאי הלה קיוטו להציג הציטופלסמה קטנה יותר, אך ניתן להשתמש בם עם פרוטוקול הזיהום שלנו (תאי הלה קיוטו הם במיוחד מותאמים היטב לניתוח פילוח שכן תאים אינם חופפים עם תאי שכנ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

יש לנו מה למסור.

תודות

מחקר במעבדה פ Cossart נתמך על ידי מכון פסטר, Institut National de la סנטה et de la משוכלל ונדיר Médicale, Institut National de la משוכלל ונדיר Agronomique, ERC Advanced Grant (233,348), Nationale de la משוכלל ונדיר סוכנות הידיעות (גרנט מ.י.- SignRupVac), קרן לואי ז'נטה וFondation Le Roch Les Mousquetaires. AK הוא נמען של מלגה מInfectieuses פסטר בפריז הבינלאומית באוניברסיטה לתואר השלישי תכנית / Institut החוליים קרנו. אנו מודים ג'ייסון מרסר לייעול פרוטוקול transfection הסלולרי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Bacto מוח לב עירויBD237500להכנת BHI נוזלי
Bacto AgarBD214010תוסף לנוזל BHI לצלחות אגר BHI
סרום בקר עוברי מושבתבחום Biowest51830-500
DMEMInvitrogen61965-026
ליפופקטמין RNAiMaxInvitrogen13778-100
GentamicinSigmaG1397-10ML
פורמלדהיד (16%)EMS15710הכן טרי לפני כל ניסוי
Anti-Rabbit Alexa Fluor 546InvitrogenA-11035
DAPIInvitrogenD-1306
Phalloidin Dy647Dyomics647-33
siRNA ScrambleDharmaconD-001810-10
siRNA MetDharmaconL-003156-00-0005
שחור 384 בארות מיקרוסקופיה צלחת תרבית תאיםקורנינג3985
AxioObserver Z1 מיקרוסקופZeiss431007 9901
מצלמת sCMOSAndorNeo
Metamorph תוכנה לניתוחהתקנים מולקולריים4000
תוכנת ניתוח CellProfilerBroad Instituteתוכנה ציבורית זמינה בכתובת http://www.cellprofiler.org/

מקורות

  1. Pizarro-Cerdá, J., Kühbacher, A., Cossart, P. Entry of Listeria monocytogenes in mammalian epithelial cells: an updated view. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2, 1-17 (2012).
  2. Mackaness, G. B. Cellular resistance to infection. Journal of Experimental Medicine. 116, 381-406 (1962).
  3. Tilney, L. G., Portnoy, D. A. Actin filaments and the growth, movement, and spread of the intracellular bacterial parasite, Listeria monocytogenes. Journal of Cell Biology. 109, 1597-1608 (1989).
  4. Mengaud, J., Chenevert, J., Geoffroy, C., Gaillard, J. L., Cossart, P. Identification of the structural gene encoding the SH-activated hemolysin of Listeria monocytogenes: listeriolysin O is homologous to streptolysin O and pneumolysin. Infection and Immunity. 55, 3225-3227 (1987).
  5. Gaillard, J. L., Berche, P., Frehel, C., Gouin, E., Cossart, P. Entry of L. monocytogenes into cells is mediated by internalin, a repeat protein reminiscent of surface antigens from gram-positive cocci. Cell. 65, 1127-1141 (1991).
  6. Mengaud, J., Dramsi, S., Gouin, E., Vazquez-Boland, J. A., Milon, G., Cossart, P. Pleiotropic control of Listeria monocytogenes virulence factors by a gene that is autoregulated. Molecular Microbiology. 5, 2273-2283 (1991).
  7. Kocks, C., Gouin, E., Tabouret, M., Berche, P., Ohayon, H., Cossart, P. L. monocytogenes-induced actin assembly requires the actA gene product, a surface protein. Cell. 68, 521-52 (1992).
  8. Glaser, P., et al. Comparative genomics of Listeria species. Science. 294, 849-852 (2001).
  9. Toledo-Arana, A., et al. The Listeria transcriptional landscape: from saprophytism to virulence. Nature. 459, 950-956 (2009).
  10. Cossart, P. Illuminating the landscape of host-pathogen interactions with the bacterium Listeria monocytogenes. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 108, 19484-19491 (1073).
  11. Mengaud, J., Ohayon, H., Gounon, P., Mege, R. -M., Cossart, P. E-cadherin is the receptor for internalin, a surface protein required for entry of L. monocytogenes into epithelial cells. Cell. 84, 923-932 (1996).
  12. Shen, Y., Naujokas, M., Park, M., Ireton, K. InIB-dependent internalization of Listeria is mediated by the Met receptor tyrosine kinase. Cell. 103, 501-510 (2000).
  13. Lecuit, M., Hurme, R., Pizarro-Cerda, J., Ohayon, H., Geiger, B., Cossart, P. A role for alpha-and beta-catenins in bacterial uptake. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 97, 10008-10013 (2000).
  14. Ireton, K., et al. A role for phosphoinositide 3-kinase in bacterial invasion. Science. 274, 780-782 (1996).
  15. Ireton, K., Payrastre, B., Cossart, P. The Listeria monocytogenes protein InlB is an agonist of mammalian phosphoinositide 3-kinase. Journal of Biological Chemistry. 274, 17025-17032 (1999).
  16. Pizarro-Cerdá, J., Jonquières, R., Gouin, E., Vandekerckhove, J., Garin, J., Cossart, P. Distinct protein patterns associated with Listeria monocytogenes InlA- or InlB phagosomes. Cellular Microbiology. 4, 101-115 (2002).
  17. Pizarro-Cerdá, J., Payrastre, B., Wang, Y. -J., Veiga, E., Yin, H. L., Cossart, P. Type II phosphatidylinositol 4-kinases promote Listeria monocytogenes entry into target cells. Cellular Microbiology. 9, 2381-2390 (2007).
  18. Hamon, M. A., et al. Histone modifications induced by a family of bacterial toxins. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 104, 17555-17559 (2007).
  19. Ribet, D., et al. Listeria monocytogenes impairs SUMOylation for efficient infection. Nature. 464, 1192-1195 (2010).
  20. Rämet, M., Manfruelli, P., Pearson, A., Mathey-Prevot, B., Ezekowitz, R. A. Functional genomic analysis of phagocytosis and identification of a Drosophila receptor for E. coli. Nature. 416, 644-648 (2002).
  21. Agaisse, H., Burrack, L. S., Philips, J. A., Rubin, E. J., Perrimon, N., Higgins, D. E. Genome-wide RNAi screen for host factors required for intracellular bacterial infection. Science. 309, 1248-1251 (2005).
  22. Cheng, L. W., Viala, J. P., Stuurman, N., Wiedemann, U., Vale, R. D., Portnoy, D. A. Use of RNA interference in Drosophila S2 cells to identify host pathways controlling compartmentalization of an intracellular pathogen. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 102, 13646-13651 (2005).
  23. Ripio, M. T., Domínguez-Bernal, G., Lara, M., Suárez, M., Vazquez-Boland, J. A. A Gly145Ser substitution in the transcriptional activator PrfA causes constitutive overexpression of virulence factors in Listeria monocytogenes. Journal of Bacteriology. 179, 1533-1540 (1997).
  24. Rajabian, T., et al. The bacterial virulence factor InlC perturbs apical cell junctions and promotes cell-to-cell spread of Listeria. Nature Cell Biology. 11, 1212-1218 (2009).
  25. Gouin, E., et al. The Listeria monocytogenes InlC protein interferes with innate immune responses by targeting the IκB kinase subinit IKKα. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 107, 17333-17338 (2010).
  26. Pizarro-Cerdá, J., Lecuit, M., Cossart, P. Measuring and analysing invasion of mammalian cells by bacterial pathogens: the Listeria monocytogenes system. Methods in Molecular Microbiology. 31, 161-177 (2002).
  27. Snijder, B., Sacher, R., Rämö, P., Damm, E. M., Liberali, P., Pelkmans, L. Population context determines cell-to-cell variability in endocytosis and virus infection. Nature. 461, 520-523 (2009).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תיקון


Formal Correction: Erratum: Imaging InlC Secretion to Investigate Cellular Infection by the Bacterial Pathogen Listeria monocytogenes
Posted by JoVE Editors on 6/25/2014. Citeable Link.

A correction was made to Imaging InlC Secretion to Investigate Cellular Infection by the Bacterial Pathogen Listeria monocytogenes. Three authors were omitted from the article at the time of publication. The acknowledgments section was also updated. The author list has been updated from:

Andreas Kühbacher1,2,3, Edith Gouin1,2,3, Pascale Cossart1,2,3, Javier Pizarro-Cerdá1,2,3
1Unité des Interactions Bactéries Cellules, Pasteur Institute, 2INSERM U604, 3Institut National de la Recherche Agronomique (INRA), USC2020

to

Andreas Kühbacher1,2,3, Edith Gouin1,2,3, Jason Mercer4, Mario Emmenlauer5, Christoph Dehio5, Pascale Cossart1,2,3, Javier Pizarro-Cerdá1,2,3
1Unité des Interactions Bactéries Cellules, Pasteur Institute,2INSERM U604, 3Institut National de la Recherche Agronomique (INRA), USC2020, 4Institute of Biochemistry, ETH Zürich 5Focal Area Infection Biology, Biozentrum, University of Basel

The acknowledgments where update from:

Research in P. Cossart laboratory is supported by the Pasteur Institute, the Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, the Institut National de la Recherche Agronomique, ERC Advanced Grant (233348), the Agence Nationale de la Recherche (Grant MIE-SignRupVac), the Louis-Jeantet Foundation and the Fondation Le Roch Les Mousquetaires. A.K. is a recipient of a scholarship from the Pasteur-Paris University International Doctoral Program/Institut Carnot Maladies Infectieuses. We thank Jason Mercer for optimizing the cellular transfection protocol.

to

Research in P. Cossart laboratory is supported by the Pasteur Institute, the Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, the Institut National de la Recherche Agronomique, ERC Advanced Grant (233348), the Agence Nationale de la Recherche (Grant MIE-SignRupVac), the Louis-Jeantet Foundation and the Fondation Le Roch Les Mousquetaires. A.K. is a recipient of a scholarship from the Pasteur-Paris University International Doctoral Program/Institut Carnot Maladies Infectieuses. We acknowledge support by grant 51RT 0_126008 for the Research and Technology Development (RTD) project InfectX in the frame of SystemsX.ch, the Swiss Initiative for Systems Biology (to C.D.).

תגיות

בדיקת אימונופלואורסצנציהסריקת siRNAפלישת תאי מאכסןדינמיקה של השלד התאימיקרוסקופיה אוטומטיתמדד זיהוםסימון חלבונים בקטריאליים
ההדמיה InlC הפרשה לחקר זיהום נייד על ידי פתוגן החיידקים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.