תאי גידול במחזור (CTCs) הם פרוגנוסטיים במספר סוגי הסרטן גרורתי. כתב יד זה מתאר את מערכת הזהב סטנדרטית CellSearch (CSS) פלטפורמת ספירת CTC ומדגיש שגיאות סיווג מוטעות נפוצות. בנוסף, שני פרוטוקולים מותאמים מתוארים לאפיון סמן מוגדר על ידי משתמש של ספירת CTCs וCTC בעכברי מודל פרה של גרורות שימוש בטכנולוגיה זו.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
עיבוד של semiautomated מחזור תא גידול מבחני (CTC) ליישומים קליניים ומחקר הקליני
במאמר זה
סיכום
תקציר
רוב מקרי מוות הקשורים לסרטן מתרחשים לאחר התפתחות המחלה גרורתית. שלב מחלה הקטלני ביותר זה קשור לנוכחות של תאים סרטניים במחזור (CTCs). תאים נדירים אלה כבר הוכיחו להיות בעל משמעות קלינית בשד גרורתי, סרטן ערמונית, סרטן מעי גס. תקן הזהב הנוכחי בזיהוי CTC קליני וספירה הוא במערכת ה-FDA פינה CellSearch (CSS). כתב יד זה מתאר את הפרוטוקול הסטנדרטי מנוצל על ידי פלטפורמה זו, כמו גם בשני פרוטוקולים נוספים מותאמים המתארים את התהליך מפורט של סמן אופטימיזציה של משתמש מוגדר לאפיון חלבונים של CTCs מטופל ופרוטוקול דומה ללכידת CTC בכמויות נמוכות מאוד של דם, באמצעות תקן ריאגנטים CSS, ללימוד בעכברי מודל פרה vivo של גרורות. בנוסף, הבדלים באיכות CTC בין דם תורם בריא זינקו עם תאים מתרבית רקמה לעומת SAMP דם חולהles מודגשים. לבסוף, כמה פריטים בדרך כלל סותרים שיכול להוביל לטעויות סיווג מוטעות CTC מפורטים. יחדיו, פרוטוקולים אלה יספקו משאב שימושי עבור משתמשים בפלטפורמה זו מתעניינת במחקר פרה קליני הנוגע לגרורות וCTCs.
מבוא
בשנת 2013 הערכה הוא כי 580,350 אנשים ימותו מסרטן וש1,660,290 מקרים החדשים של מחלה זו יאובחנו בארצות הברית לבדה 1. רוב מקרי המוות הללו מתרחשים לאחר התפתחות המחלה גרורתית 2. חוסר הנוכחי של טיפולים יעילים בטיפול בגרורות ובהבנה מוגבלת של המפל גרורתי הופך שלב זה של מחלה קטלני ביותר. נוכחותם של תאים סרטניים במחזור (CTCs) בתוך זרם הדם הוכח לתאם עם מחלה גרורתית 3. תאים אלה הם נדירים ביותר וזיהוי שלהם מעיד על הישרדות כוללת בשד גרורתי 4, 5 ערמונית, וסרטן מעי גס 6. בחולים אלה, הנוכחות של ≥ 5 (שד וערמונית) או ≥ CTCs 3 (מעי גס) ב7.5 מיליליטר של דם מעיד על פרוגנוזה גרועה יותר בהשוואה לאו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל המחקרים בבני האדם שתוארו בכתב היד הזה בוצעו תחת פרוטוקולים שאושרו על ידי אדם מחקר האתיקה מועצת המנהלים של האוניברסיטה המערבית. כל המחקרים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להמלצות של המועצה הקנדית על טיפול בבעלי חיים, על פי פרוטוקולים שאושרו על ידי אוניברסיטת מערב השימוש בבעלי חי ועדת המשנה.
1. CTC ספירה סטנדרטית מדגימות דם חולה באמצעות CSS
1. איסוף דם אדם לדוגמא והכנה לעיבוד בכלי ההכנה
- באמצעות שימוש בטכניקות phle....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
תקן CTC ספירת Assay
הרגישות והסגוליות של CSS תועדה היטב בספרות. עם זאת, כדי לאמת את התאוששות CTC שווה ערך, זינק (תאי סרטן ערמונית אנושית 1,000 LNCaP) ודגימות דם של בני אדם unspiked מתורמים מתנדבים בריאים עובדו על CSS באמצעות פרוטוקול CSSCTC הסטנדרטי. כצפוי, דגימות unspiked היו חופשיות של CTCs, 0.00 ± 0.00%, והתאוששות CTC הודגמה להיות 86.9 ± 4.71% עבור דגימות ממוסמר (איור 1 א). תמונות בגלריה CSS מתקב.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
למרות ההתפתחות של טכנולוגיות רבות CTC חדשים מאז כניסתה של CSS ב2004, טכניקה זו היא עדיין הטכנולוגיה שאושרה קליני רק על השוק היום, ולכן זה נחשב תקן הזהב הנוכחי לאיתור CTC ופקידה. כתב היד הזה הוכיח שלמרות שיש לו את CSS תקני בקרת איכות קפדניים זה יכול להיות כפוף להטית פרשנות וכי זיהוי CTC בדגימות מטופל הוא שונה בהרבה מזיהוי בדגימות ממוסמר. שש קטגוריות של פריטים נפוצים סותרים זוהו שיכול לגרום misclassifications CTC להתרחש. פריטים סותרים אלה מדגישים את הצורך במספר בודקים בכל דגימת מטופ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחבר (ALA) זכה למימון שהועמד על ידי Janssen אונקולוגיה, אשר חברה האם של חברת Johnson & Johnson גם בעלי Janssen אבחון LLC, אשר מייצר ריאגנטים ומכשירים המשמשים במאמר זה.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים ממכון אונטריו לחקר הסרטן (# 08NOV230), קרן קנדה עבור חדשנות (# 13199), סרטן ערמונית קנדה, Janssen אונקולוגיה, התכנית למלחמה בסרטן האזורית בלונדון, ותמיכת תורמים מג'ון ודונה בריסטול דרך קרן לונדון למדעי בריאות (לALA). LEL נתמך על ידי בנטינג פרדריק ומלגות לתארים מתקדמים צ'רלס בסט קנדה דוקטורט פרס. ALA נתמך ניו פרס חוקר CIHR ופרס חוקר מוקדם ממשרד אונטריו של מחקר וחדשנות על ידי.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.5 M EDTA | |||
| אנטי אנושי CD44-FITC | BD Pharmigen | 555478 | |
| אנטי אנושי CD44-PE | BD Pharmigen | 555479 | |
| אנטי אנושי HLA-Alexa Fluor 488 | BioLegend | 311415 | |
| Anti-Mouse CD45-APC | eBioscience | 17-0451-82 | |
| Bond נוגדן ראשוני מדלל | Leica | AR9352 | |
| CellSave שפופרות משמרות | Veridex | 952820 (20 חבילות) 79100005 (100 חבילות) | |
| ערכת בקרת CTC CellSearch | CTC Veridex | 7900003 | |
| CellSearch | בקרת Veridex | ||
| CellSearch CXC ערכת בקרת | Veridex | 7900018RUO | |
| ערכת CXC CellSearch | Veridex | 7900017RUO | |
| מאגר מכשירים | Veridex | 7901003 | |
| Streck Cell Preservant (aka CytoChex) | Streck | 213350 | |
| 1 מ"ל מזרק | |||
| סרולוגית | |||
| 1,000 ומיקרו; l פיפטה | |||
| 1,000 ומיקרו; l קצות | |||
| 12 מ"מ x 75 מ"מ צינורות זרימה | |||
| 200 ומיקרו; l טיפים | |||
| 200 ומיקרו; l פיפטה | |||
| 22 גרם מחט | |||
| 5 3/4 בצינור פסטר חד פעמי | VWR | 14672-200 | |
| 5 מ"ל פיפטה | |||
| פיפטור | |||
| איסוף דם נימי (EDTA) | BD Microtainer | 365974 | |
| CellSearch Analyzer II | Veridex | 9555 | כולל מגנסטים ועגלות אימות |
| מערכת CellSearch AutoPrep | Veridex | 9541 | |
| צנטריפוגה | |||
| MagCellect Magnet | מו"פ D Systems | MAG997 | |
| נורת לטקס קטנה | VWR | 82024-550 | |
| מערבולת |
מקורות
- Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. Cancer statistics. 63 (1), 11-30 (2013).
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat. Rev. Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).
- Pantel, K., Brakenhoff, R. H.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
