פרוטוקול זה מתאר תכנון והשתלה כירורגית של מנגנון ריסון ראש לניטור פעילות עצבית במבני מוח תת-קורטיקליים בחולדות ערניות. הוא מתאר נהלים לבידוד נוירונים בודדים בתצורה הסמוכה ולזיהוי יעיל של מיקומם האנטומי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
ניטור Juxtacellular והלוקליזציה של Single נוירונים בתוך מבנים מוחיים תת-קליפת המוח של התראה, חולדות-מרוסן ראש
במאמר זה
סיכום
תקציר
ישנן מגוון טכניקות לניטור פעילות חוץ-תאית של יחידות עצביות בודדות. עם זאת, ניטור פעילות זו ממבני מוח עמוקים בבעלי חיים מתנהגים נותר אתגר טכני, במיוחד אם יש למקד את המבנים באופן סטריאוטקסי. פרוטוקול זה מתאר טכניקות כירורגיות ואלקטרופיזיולוגיות נוחות השומרות על ראש החיה במישור הסטריאוטקסי ומבודדות באופן חד משמעי את פעילות הזינוק של נוירונים בודדים. הפרוטוקול משלב ריסון ראש של מכרסמים ערניים, ניטור צמוד עם אלקטרודות מיקרופיפטות והזרקת צבע יונטופורטי כדי לזהות את מיקום הנוירונים בהיסטולוגיה פוסט-הוק. בעוד שכל אחת מהטכניקות הללו מבוססת היטב בפני עצמה, הפרוטוקול מתמקד בפרטי השימוש המשולב שלהן בניסוי יחיד. טכניקות נוירופיזיולוגיות ונוירו-אנטומיות אלו משולבות עם ניטור התנהגותי. בדוגמה הנוכחית, הטכניקות המשולבות משמשות כדי לקבוע כיצד תנועות ויבריסה שנוצרות בעצמן מקודדות בפעילות של נוירונים בתוך התלמוס הסומטוסנסורי. באופן כללי יותר, זה פשוט להתאים את הפרוטוקול הזה לניטור פעילות עצבית בשילוב עם מגוון משימות התנהגותיות בחולדות, עכברים ובעלי חיים אחרים. באופן קריטי, השילוב של שיטות אלה מאפשר לנסיין לקשר ישירות בין אותות נוירופיזיולוגיים המזוהים אנטומית להתנהגות.
מבוא
ניטור פעילות עצבית בבעלי חיים ערניים המעורבים באופן פעיל במשימה התנהגותית הוא קריטי להבנת התפקוד והארגון של מערכת העצבים. הקלטה תאית של הפעילות החשמלית מיחידות עצביות אחת כבר זמן רב כלי עיקרי של מדעי מוח ומערכות עדיין נרחב בשימוש כיום. מגוון רחב של סוגי אלקטרודה ותצורות זמינים בהתאם לדרישות המדעיות וטכניות של ניסוי מסוים. כרוני מושתל microdrives או מערכי אלקטרודה משמשים לעתים קרובות בבעלי חיים לנוע בחופשיות, כוללים ציפורים, מכרסמים, ופרימטים שאינם בני אדם 1-4. לחלופין, חדירות חריפות עם microelectrodes מתכת או זכוכית באמצעות micromanipulator חיצוני משמשות לעתים קרובות כדי להקליט מבעלי חיים מורדמים או-מרוסן ראש. יש לי אלקטרודות micropipette זכוכית היתרון שהם יכולים לשמש בjuxtacellular או "תא מצורף" תצורה לבודד באופן חד משמעיפעילות של נוירונים בודדים ללא סיבוכים של ספייק פוסט הוק-מיון 5. אלקטרודות אלה נוספים מאפשרות הקלטה מהתאים או במקומות אנטומית-מזוהים, כפי שהם יכולים להשתמש בהם כדי להזריק פיקדונות קטנים של קליעים נותבים צבע או neuroanatomical, או אפילו כדי למלא את הפרט נרשם תא. תצורה זו יושמה בהצלחה בחולדות, עכברים וציפורים 6-10. הטכניקה המתוארת כיום מתמקדת בניטור juxtacellular ופיקדונות צבע תאיים בכוננות, חולדות-מרוסן ראש. שים לב שתא בודד בניגוד juxtacellular ממלא, פיקדונות צבע אלה אינם מספקים מידע על מורפולוגיה של תאים או תחזיות axonal 11, אבל הם מאפשרים לוקליזציה אנטומי מדויקת לכ -50 מיקרומטר ו, ביקורתי, בעלי תשואה גבוהה באופן משמעותי בבעלי חיים ערניים. מידע בדבר תא בודד juxtacellular ממלא מסופק בכל זאת כאסטרטגיה חלופית לתיוג אנטומיים.
בקיצור,פרוטוקול מורכב משלושה שלבים עיקריים. בשלב הראשון, החולדה התאקלמה לריסון גוף בגרב בד (איור 1) על פני תקופה של 6 ימים. בשלב השני, מנגנון משענת ראש (איור 2) ותא הקלטה מושתל בניתוח כזה שהחולדה יכולה להישמר במטוס stereotaxic במהלך פגישות מרובות שלאחר מכן הקלטה (איור 3); הליך זה מאפשר הנסיין למקד אזורים תת-קליפת המוח מסוימים של המוח למחקר אלקטרו מבוסס על התייחסות סטנדרטית קואורדינטות 12. השלב השלישי כולל הצבת העכברוש בלנענע מתאים לביצוע ניסויים התנהגותיים ואלקטרו (איור 4), בניית האלקטרודה מצינור נימי קוורץ (איור 5), מה שהופך את הקלטות עצביות juxtacellular שבאופן חד משמעי לבודד יחידות בודדות 6-9, ו סימון locati אנטומייםבאתר ההקלטה עם צבע שיקגו סקיי בלו (איורים 6 ו -7). ההקלטות מבוצעות עם ניטור התנהגות בו-זמנית; עם זאת, לפרטים הטכניים של ההתנהגות יהיו תלויים במטרות המדעיות של כל ניסוי ולכן הם מעבר להיקף של פרוטוקול יחיד. לאחר השלמת ההליך ניסיוני, שניתן לחזור על ימים מרובים, החיה מורדמים. המוח מופק ומעובד על פי טכניקות neuroanatomical סטנדרטיים או באמצעות שדה בהיר או מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
פרוטוקולי ניסוי בוצעו על חולדות נקבות ארוכות אוונס (250-350 גר ') בהתאם להנחיות טיפול בבעלי החיים ושימוש שנקבעו פדרלי ואושרו על ידי ועדת הטיפול ושימוש בבעלי חיים המוסדיים באוניברסיטת קליפורניה בסן דייגו.
1. להתאקלם העכברוש לגוף איפוק
הערה: מניחים את החולדה בדיאטה מוגבלת. להאכיל את העכברוש פעם ביום באופן מיידי לאחר כל פגישת טיפול יומית להסתגל החולדה לריסון (שיפורט להלן). לספק מספיק מזון כדי לשמור על בעלי החיים ב- 80% מהמשקל ההתחלתי שלה. סכום זה הנו כ 6 גרם של מזון ליום לחולדה הארוך אוונס 250 נקבת g.
- להסתגל החולדה למטופל על ידי בני אדם. בעדינות לרסן את החולדה ביד לתקופות של כ 5 שניות כל 30 שניות. לעשות את זה במשך 15 דקות ביום על 2 ימים רצופים. לפקח על החולדות יומיות לסימנים של לחץ בתקופת ההכשרה. סימנים כוללים נאבקים iתגובת n לאיפוק, ניקוד, ושיניו נוקשות.
- ביום 3 rd, למקם את העכברוש בגרב בד-מגבילים גוף (איור 1) במשך 15 דקות ביום על שני ימים רצופים.
- ביום ה -5, מניח את החולדה בתוך הגרב, ולמקם את הגרב בתוך צינור נוקשה על לנענע הניסוי (איור 4). השאר את העכברוש בצינור במשך 15 דקות ביום על 2 ימים רצופים.
- להאכיל את העכברים מייד לאחר כל אימון. בסוף הפגישה האחרונה (יום ה 6) לתת גישה חופשית למזון. בחר להשתלה רק אלה חולדות שלא מראים סימנים של לחץ מוגזם על יום האימונים האחרון.
הערה: למרות שהבחירה של חולדות להשתלה היא סובייקטיבי, בידיים שלנו מעל 90% מחולדות נמצאו להיות קשובים להתרגלות ותוכל לעבור השתלה.
2. השתלת מנגנון הקלטת הלשכה וראש-איפוק
- הפוך מחדשference חוט על ידי הלחמה חוט נירוסטה חשופה לפינים. חותך את החוט כך ששרידי 3-5 מ"מ נחשפו על ידי הסיכה. החיטוי חוט ההתייחסות, יחד עם כל הכלים כירורגיים.
- לנהל קטמין / הרדמה xylazine. לנהל 95 מ"ג / קילוגרם קטמין מעורבב עם 5 מ"ג / קילוגרם xylazine intraperitoneally. המינון הראשוני נמשך ½ 1 עד 2 שעות. להשלים את כל ההרדמה דקות 30-45 לאחר מכן, במידת הצורך. לשמן את עיניו של בעל החיים עם משחת עיניים.
- בדוק את רפלקס נסיגת הבוהן כדי לקבוע את המטוס של הרדמה, ולשמור על הרדמה במידת צורך.
- מניחים את החולדה במסגרת החזקת stereotaxic עם ברים אוזן (איור 3 א). לגלח את השיער על הראש ולחטא את הפצע עם אתר povidone- יוד (פתרון של 10%). דואג להכניס את הברים האוזן כראוי, כך שהם לא גורמים נזק לעור התוף. ברים אוזן עם טיפים בוטים עדיפים.
- עושה חתך עם אזמל approxiשל דבר לאורך קו האמצע של הגולגולת מרמת rostro- הזנב של העיניים לחלק האחורי של האוזניים. השתמש במספריים כדי לחתוך ולהסיר רצועת 2-3 מ"מ של עור בכל צד של החתך.
- לגרד מן periosteum לחשוף את פני השטח של הגולגולת לרכסים לרוחב. מכסה את הגולגולת החשופה עם שכבה דקה של דבק מגע.
- לקדוח חור קטן, בקוטר מעט קטן יותר מ0-80 ברגים, באמצעות בר תרגיל ½ מ"מ קוטר (ראה סעיף חומרים). לקדוח החור אחורי מייד למקום שבי תפר גבחת עומד ברכס לרוחב, ובזווית 30-45 מעלות לתוך הגולגולת, כך שהבורג יכול ללכת עם הראש יותר לרוחב מאשר לתחתית.
- לדפוק בבורג 0-80 מכונה בעלת תחתונה לחור (תור כ 3), ב30-45 מעלות זווית. היזהר שלא ידפקו בעמוק מדי כדי למנוע נזק לרקמת המוח הבסיסי.
- חזור על תהליך זה עבור 6 ברגים נוספים בתצורה מוצגים (איור 3). החל דבק מגע לבסיס של כל הברגים.
- הנח מחט מזרק במניפולטור stereotax. מדוד מתפר גבחת, ולעשות שקע בגולגולת עם המחט ליד, אבל מחוץ למיקום craniotomy הרצוי, כסימן הפניה.
הערה: בהפגנה זו, קואורדינטות stereotaxic של הסימן 3 מ"מ אחורי ו -1 מ"מ לרוחב תפר גבחת. - סמן את השקע עם סמן קבע. שים לב לקואורדינטות stereotaxic של הסימן, כפי שהוא ישמש כנקודת התייחסות stereotaxic (איור 3).
- הפוך craniotomy התמקד בקואורדינטות הרצויות (האחורי 3 מ"מ ו -3 מ"מ לרוחב גבחת בדוגמא זו). השאר את מאטר הדורה ללא פגע. מכסה את craniotomy עם נוזל השדרה מוחין מלאכותי שונה (125 מ"מ NaCl, 10 מ"מ גלוקוז, 10 מ"מ HEPES, 3.1 מ"מ CaCl 2, 1.3 מ"מ MgCl 2, pH 7.4) 13 (איור 3 ג).
- חותך צינור 0.2 מיליליטר צנטריפוגות - 4, 5 מ"מ באורך, ולנתק את הכובע. מניחים את הצינור על הגולגולת ולמרכז אותו על פתיחת הגולגולת.
- החל מלט שיניים סביב החלק התחתון של הצינור כדי לאטום את הבסיס של הצינור לגולגולת. היזהר שלא ידלפו מלט לפתיחת הגולגולת החשופה (איור 3D).
- לקדוח חור נוסף קטן (כ ½ מ"מ קוטר) בצלחת הגולגולת הנגדית והכנס את חוט ההתייחסות בזהירות. לבנות את חוט ההתייחסות ידי הלחמה פינים ממשקים עם מגבר ההקלטה לקצה של החוט (ראה סעיף ציוד). אל תזיז את חוט התייחסות פעם אחת זה במוח כעלול לגרום לניזק זה.
- החל דבק מגע לחור שבו החוט הוכנס. זה לאטום את הסיכה ותיל במקום באופן זמני.
- מערבבים את שני חלקים של ערכת ג'ל סיליקון (ראה סעיף חומרים) במנות שווה בערך. המתן שתי דקות לערבוב וfill צינור צנטריפוגות כ ⅓ מלא עם ג'ל.
- צרף הודעה זווית מהדק תקין (ראה סעיף חומרים) לבר משענת הראש. צרף את צלחת הראש (איור 2 א) לבר ההחזקה (איור 2) בזווית של 45 מעלות המגרש, כך שהחלק התחתון של הצלחת הוא לכיוון אפו של בעל החיים. זה מועיל להשתמש שיפוע כדי לקבוע את זווית המגרש כדי להתאים את זה של לנענע ניסוי (איור 4).
- צרף את בר ההחזקה לזרוע מניפולטור stereotax כך שהבר מקביל לברים האוזן. מנמיכים את בר וצלחת כך שהצלחת היא אחורית של התפר למבדה וקדמית לזנב ביותר-הבורג.
- לתפוס את ראש הבורג הקדמי (8-32 הרבעה או בורג, ראה סעיף חומרים) בכ -45 ° זווית עם זרוע ותפס ידיים עוזרת, כך שהראש של הבורג פונה כלפי מטה וכיוון הזנב של החיה. מנמיכים את הבורג כך שהוא נוגע בנמליםerior 0-80 ברגים (איור 3F, G).
- לאבטח את הבורג וצלחת במקום עם אקריליק שיניים. החל אקריליק שיניים סביב ראשי בורג עצם, סיכת התייחסות, וסביב הצדדים של צינור צנטריפוגות. חכה כ 10 דקות לאקריליק השיניים לייבוש (איור 3H).
- למרוח שכבה של דבק דנטלי מסביב לקצוות של אקריליק השיניים, מלט העור לשתל. חכה לבטון לייבוש.
- נקוב כמה חורים במכסה של צינור צנטריפוגות, והנח את הכובע על הצינור.
- הסר את מהדק הידיים עוזר. ואז להסיר בזהירות את בר מחזיק את הראש מstereotax, ולאחר מכן להסיר את צלחת ראש משורת (איור 3I).
- הסר את החיה מstereotax ולנהל טיפול ומעקב לאחר ניתוח בהתאם לכל הכללים, תקנות והחוקים החלים (לדוגמא, גבופרנורפין 0.02 / קילוגרם, כל שעה 8-12 למינימום של 24שעה). אם דלקת שמתפתחת סביב הקצוות של השתל, למרוח שכבה דקה של משחה אנטיביוטית לאתר המושפע מדי יום עד נפתר.
3. ניטור Juxtacellular יחידות עצביים
- משוך צינור נימי קוורץ על חולץ micropipette לייזר פחמן דו חמצני (ראה סעיף ציוד) בקטרים קצה של פחות מ 1 מיקרומטר (איור 5 א).
הערה: הפרמטרים החימום ישתנו בהתאם למכשיר המסוים, ושקוטר הצוואר הנדרש ישתנה בהתאם למבנה המוח של עניין. להקלטות בתלמוס חולדה, יש לי micropipettes צוואר החל 5-7 מ"מ. - אבטח את פיפטה במקום תחת מיקרוסקופ התערבות ההפרש לעומת זאת (DIC) מצויד ביעדי מרחק עבודה ארוכה. השתמש בפלסטלינה להחזיק פיפטה במקום בשלב של מיקרוסקופ.
- לאט לאט להזיז בלוק זכוכית (0.5-1 סנטימטר עובי; חתיכת הזכוכית המשמשת לMaking סכיני אולטרה microtome נוח) לשדה ראייה עם קצה פיפטה. שימוש micromanipulator השלב, לגעת בעדינות את קצה פיפטה לזכוכית, גורם לו לשבור. חזור על צורך עד הקוטר החיצוני קצה פיפטה הוא בין 1-3 מיקרומטר (איור 5 ב, ג). ודא שיש לי micropipettes אלה עכבות בין כ 5-15 MΩ.
- הכן מלוח תאי (135 מ"מ NaCl, 5.4 מ"מ KCl, 1.8 מ"מ CaCl 2, 1 מ"מ MgCl 2, 5 מ"מ HEPES, pH 7.2 עם NaOH) 8 ולהוסיף 2% (w / v) שיקגו שמיים כחולים. באמצעות מזרק עם מחט 30 G או קטן יותר, למלא את הקצה האחורי של פיפטה עם הפתרון. לחלופין, לתיוג juxtacellular תא בודד להוסיף 2% (w / v) Neurobiotin או אמין dextran biotinylated (BDA-3000 או BDA-10000) לתמיסת מלח במקום של שיקגו שמיים כחולים.
- מניחים את החולדה בתוך גרב הבד בתוך הצינור הנוקשה על לנענע ניסוי מתאים ( איור 4) .Wait מינימום של 72 שעות לאחר ניתוח לפני הצבת בעלי החיים בלנענע את הראש-האיפוק. הדק את השרוך סביב עצם החזה העליון, ולא בצוואר, כדי להימנע מחסימה של דרכי הנשימה. אם נשימה נראה שעמלה או חסום, שחרר את השרוך או להעביר אותה בדיעבד. לבצע הליך זה בזמן שהחולדה היא ערנית.
- צרף את צלחת הראש-מרסן על החולדה לכתבה על לנענע המקבילה. כדי לעשות זאת, להצמיד ראשון צלחת הראש-איפוק במקום, ולאחר מכן לאבטח אותו באמצעות בורג 4-40. הקפד לחכות עד שהחיה היא רגועה על מנת להימנע מהחלת מומנט מוגזם לראש. בשלב הבא, מקום אגוז 8-32 בבורג ריסון-הראש שמושתל בחולדה. אז בורג במוט פלדת אל-חלד הברגה לראש הבורג. הצמד את המוט ללנענע הניסיוני באופן כזה שהוא יכול להדק במקום (איור 4).
הערה: אבטחת החיה עם הראש-בורג, כמו גם את דקות צלחת הראש-איפוקimizes כיפוף של המנגנון ומשפר את יציבות הקלטה. ברוב המקרים הקלטה יכולה להתחיל ביום הראשון של בעלי החיים הוא-מרוסן ראש. עם זאת, אם בעל החיים בעצבנות יתר על המידה או vocalizes, לספק יום אחד של אימוני התרגלות הראש-איפוק לפני תחילת כל הקלטות. במקרה זה, להשאיר את החיה על לנענע במשך 15 דקות ולאחר מכן למקם אותו בחזרה בכלוב שלה. חזור על שלב זה ביום שלמחרת ולהמשיך בפרוטוקול. - פתח את תא ההקלטה ולהסיר את ג'ל סיליקון. נקה את פתיחת הגולגולת באמצעות מלקחיים בסדר אם רקמות מחדש גדלו בפתיחת הגולגולת.
- צרף את פיפטה micromanipulator הממונע, וחבר בקדם-מגבר headstage.
הערה: בהפגנה הנוכחית, מעגל ממסר קטן על headstage משמש למעבר בין החוטים להוביל מגבר ומקור זרם חיצוני עם תאימות גבוהה (איור 6 א-ג). שימו לב שיש כמה מגברים מתאימים מובנים במקור גבוה תאימות(ראה סעיפי דיון וחומרים). - השתמש micromanipulator הממונע כדי להזיז את הקצה של פיפטה לסימן המזוהה stereotaxically בחדר ההקלטה. שים לב לקואורדינטות של מיקום זה. היזהר שלא לשבור את הקצה של פיפטה בגולגולת.
- הזז את פיפטה למיקום הרצוי בהקלטת הצירים הקדמי, האחוריים וMedio-צדדיים. לאחר מכן לקדם את פיפטה ventrally דרך הדורה עד שהוא כ 500 מיקרומטר גב למיקום ההקלטה המיועד.
- לאט לאט לקדם את פיפטה בעת ההאזנה ללהתחדד אירועים על צג שמע של המתח המוגבר נרשם בין קצה פיפטה וחוט ההתייחסות. ברגע שאירועים להתחדד מזוהים, תמשיך לנוע מיקרומטר פיפטה 0-100 עד deflections מתח הולך חיובית יותר מאשר כ -500 μV הם נצפו.
הערה: התנגדות האלקטרודה תגדל בפקטור של כ 1.5-10 ש"שen זה מתרחש. - להתחיל בהקלטה אחת ליחידה כבר מבודדת כפי צעד 3.11, יחד עם כל אמצעים התנהגותיים ופיסיולוגיים האחרים של עניין. בהפגנה הנוכחית, תנועות vibrissa עצמית שנוצר בפיקוח עם צילום וידאו במהירות גבוהה (ראה סעיף חומרים).
- לתייג את אתר ההקלטה, לעבור את האלקטרודה מובילה להתחבר למקור הזרם. יש כמה דרכים לעשות את זה, או באמצעות מעגל ממסר (איור 6 א - ג), (איור 6 ד, ראה שלב 3.8 ודיון) מובנה במקור זרם במגבר, או באופן ידני. לעבור -4 מייקרו-אמפר עם 2 פעימות לשנייה ב 50% מחזור למשך 4 דקות להזריק iontophoretically שיקגו שמיים כחולים באמצעות פיפטה.
- הרוג ואנקב את החיה לאחר מספר הליכי תיוג על פי מקובל. סעיף המוח וcounterstain כנדרש כדי לזהות את המיקום האנטומי של ההקלטה לשבתדואר. Counterstain הרקמה לתגובתיות מונואמין ציטוכרום לפי 14. לחלופין, לזהות את פיקדונות שיקגו שמיים כחולים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
הערה: כדי להבדיל באופן מדויק בין יחידות שונות שכותרתו חשובה שכל התוויות נעשות עם אותו פיפטה באותו היום, ללא unclamping פיפטה בין תוויות. במקרה זה יכול להיות מובחן אתרי הקלטה על ידי המיקומים היחסי שלהם בהיסטולוגיה פוסט-הוק יחד עם קואורדינטות מניפולטור ציינו של כל אתר (ראה שלב 3.9). לזיהוי חד משמעי, לסמן את התוויות בהפרש של לפחות 200 מיקרומטר זו מזו, ולא יותר מ3-5 תוויות לאזור במוח.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
יחידות עצביות בהמדיאלי אחורי הגחון (VPM) התלמוס לקודד את השלב של תנועת vibrissa במהלך עצמי שנוצר ומעיף 15,16. איור 7 א מציג מדגם פעילות spiking של יחידת התלמוס VPM כחולדה הנעים במהירות באופן פעיל. איור 7 מציגה היסטוגרמה של ספייק פעמים מיושרות לשלב המיידי של תנועת vibrissa 17. יש יותר קוצים בשלב ההכחשה של הנעים במהירות. לאחר ההקלטה, המיקום של היחידה שכותרתו באמצעות iontophoresis של צבע כחול השמיים שיקגו, כפי שמוצג
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
בנייה לנענע הניסיוני
התיאור של החלקים מכאניים המשמשים לבנייה לנענע הניסוי (איור 4) מושמט מן הפרוטוקול, כפי שהוא יכול להיות בנוי במגוון דרכים. בהפגנה זו סטנדרטית אופטו-מכאני חלקים ומהדק תמיכה משמש להר בר משענת הראש וצינור איפוק גוף (ראה סעיף חומרים). חלקי אופטו-מכאני דומים יכולים לשמש לעלות בעל אלקטרודה לmicromanipulator הממונע. חשוב שבר משענת הראש ב...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
אנו אסירי תודה למכונים הקנדיים לחקר הבריאות (מענק MT-5877), למכונים הלאומיים לבריאות (מענקים NS058668 ו-NS066664) ולקרן הדו-לאומית ארה"ב-ישראל (מענק 2003222) על מימון מחקרים אלה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| קטסט (קטמין HCl) | פורט דודג | N/A | |
| Anased (תמיסת קסילזין) | מעבדות לויד | N/A | |
| Betadyne (פובידון-יוד) | CVS Pharmacy | 269281 | |
| Loctite 495 | Grainger Industrial Supply | 4KL86 | 20 - 40 cp ציאנואקרילט |
| Vetbond | 3M | 1469SB | |
| מלט אחיזה אבקה | Dentsply Intl | 675571 | לבסיס תא ההקלטה |
| Grip צמנט נוזל | Dentsply Intl | 675572 | לבסיס תא ההקלטה |
| ג'ל סיליקון | Dow Corning | 3-4680 | |
| Jet Denture Repair Acrylic Powder | Lang Dental Manufacturing Co. | N/A | לאבטחת מנגנון משענת הראש לגולגולת |
| Ortho-Jet נוזל שרף אקרילי אורתודונטי מהיר ריפוי | Lang Dental Manufacturing Co. | N / A | לאבטחת מנגנון משענת הראש לגולגולת |
| שיקגו כחול שמיים | סיגמא | C8679 | |
| Paraformaldehyde | Sigma | 158127 | לזלוף וקיבוע רקמות |
| מלח חוצץ פוספט | Sigma | P3813 | לזלוף וקיבוע רקמות |
| ציטוכרום C | Sigma | C2506 | לצביעה ציטוכרום-אוקסידאז, <חזק>איור 7 |
| דיאמינובנזידין | סיגמא | D5905 | לצביעה ציטוכרום-אוקסידאז, <חזק>איור 7 |
| גרב עכברוש | לתפור אלגנטי (סן דייגו, קליפורניה) | N/A | בהתאמה אישית, <חזק>דמויות 1, 4 |
| צינור PVC 2 ½ " | חברת הפלסטיק האמריקאית | 34108 | <חזק>איור 4 |
| תת-זעירים D פינים ושקעים | Connectivity 205089-1 | <חזק>איור 3 | |
| חוט מוסיקה נירוסטה בקוטר 0.010 אינץ' | Precision Brand Products, Inc. | 21010 | <חזק>איור 3 |
| מסגרת אחיזה סטריאוטקסית | Kopf | Instruments דגם 900 | <חזק>איור 3 |
| אוזניים סטריאוטקסיים | Kopf | Instruments דגם 957 | <חזק>איור 3 |
| מניפולטור סטריאוטקסי | Kopf Instruments | דגם 960 | <חזק>איור 3 |
| ½ מקדחה מ"מ הנרי | שיין | 100-3995 | |
| מקדחה דנטלית באוויר שקט | Midwest Dental | 393-1600 | |
| נירוסטה 0-80 ו-frac18; ” בורג | אטב סופרמרקט | 247438 | <חזק>איור 3 |
| 0.2 מ"ל צינור צנטריפוגה | פישר סיינטיפיק | 05-407-8A | <חזק>איור 3 |
| מותאם אישית מוט מחזיק ראש | UCSD SIO חנות מכונות | N/A | בהתאמה אישית, <חזק>דמויות 2 - 4 |
| צלחת אחיזת ראש מותאמת אישית | UCSD SIO חנות מכונות | N/A | בהתאמה אישית, <חזק>איורים 2 - 4חזק |
| בזווית ישרה | ניופורט | MCA-1 | <חזק>איורים 3, 4; חלקים אופטו-מכניים סטנדרטיים עבור הג'יג הניסיוני (<חזק>איור 4) הם גם מחברת Newport Corp. |
| 8-32 ו-frac34; ” בורג | אטב סופרסטור | 240181 | לריסון ראש, <חזק>איור 3 |
| 4-40 ו-frac14; ” בורג | אטב סופרסטור | 239958 | למשענת ראש, <חזק>דמויות 3, 4 |
| קוורץ צינורות נימיים | Sutter Instruments | QF-100-60-10 | <חזק>איור 5 |
| פחמן דו חמצני חולץ לייזר פחמן דו חמצני | מכשירי סאטר | P-2000 | |
| מיקרומניפולטור ממונע | מכשירי סאטר | MP-285 | |
| מגבר מיקרואלקטרודה | התקנים מולקולריים | Multiclamp 700B | חלק חלופי: התקנים מולקולריים Axoclamp 900A |
| מגבר מיקרואלקטרודה שלב ראש | התקנים מולקולריים | CV-7B | חלק חלופי: HS-9Ax10 עם התקנים מולקולריים Axoclamp 900A |
| ממריץ דופק מבודד | A-M Systems | דגם 2100 | חלק חלופי: HS-9Ax10 עם התקנים מולקולריים Axoclamp 900A |
| צג שמע | רדיו שאק | 32-2040 | |
| מחזיק פיפטות | Warner Instruments | #MEW-F10T | חלקים חלופיים: ראה <חזק>דיון, <חזק>איור 6A |
| עופרת אלקטרודה | חזק> NEF34-1646 | (אופציונלי), <חזק>איור 6D | |
| ממסר למגבר טכנולוגיית | COTO | #2342-05-000 | (אופציונלי) בשימוש עם לוח מעגלים מודפסים בהתאמה אישית (UCSD Physics Electronics Shop), <חזק>איור 6A-C |
| >מצלמת וידאו דיגיטלית | Basler | A602fm | (אופציונלי) לניטור התנהגותי, <חזק>איור 7 |
| Puralube משחה וטרינרית | Amazon.com, Inc | NC0138063 |
מקורות
- Fee, M. S., Leonardo, A. Miniature motorized microdrive and commutator system for chronic neural recording in small animals. Journal of Neuroscience Methods. 112 (2), 83-94 (2001).
- Ventakachalam, S., Fee, M. S., Kleinfeld, D. Ultra-miniature headstage with 6-channel drive and vacuum-assisted micro-wire implantation for chronic recording from neocortex. Journal of Neuroscience Methods. 90 (1), 37-46 (1999).
- Szuts, T. A. A wireless multi-channel neural amplifier for freely moving animals. Nature Neuroscience. 14 (2), 263-269 (2011).
- Roy, S., Wang, X. Wireless multi-channel single unit recording in freely moving and vocalizing primates. Journal of neuroscience. 203 (1), 28-40 (2012).
- Hill, D. N., Mehta, S. B., Kleinfeld, D. Quality metrics to accompany spike sorting of extracellular signals. Journal of Neuroscience. 31 (24), 8699-8705 (2011).
- Pinault, D. A novel single-cell staining procedure performed in vivo under electrophysiological control: morpho-functional features of juxtacellularly labeled thalamic cells and other central neurons with biocytin or Neurobiotin. Journal of neuroscience. 65 (2), 113-136 (1996).
- Person, A. L., Perkel, D. J. Pallidal neuron activity increases during sensory relay through thalamus in a songbird circuit essential for learning. The Journal of neuroscience. 27 (32), 8687-8698 (2007).
- Kock, C. P., Sakmann, B. Spiking in primary somatosensory cortex during natural whisking in awake head-restrained rats is cell-type specific. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 106 (38), 16446-16450 (2009).
- Connor, D. H., Peron, S. P., Huber, D., Svoboda, K. Neural activity in barrel cortex underlying vibrissa-based object localization in mice. Neuron. 67 (6), 10481061(2010).
- Hellon, R. The marking of electrode tip positions in nervous tissue. The Journal of physiology. 214, 12P(1971).
- Furuta, T., Deschênes, M., Kaneko, T. Anisotropic distribution of thalamocortical boutons in barrels. The Journal of Neuroscience. 31 (17), 6432-6439 (2011).
- Paxinos, G., Watson, C. The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , Academic Press. (1986).
- Kleinfeld, D., Delaney, K. R. Distributed representation of vibrissa movement in the upper layers of somatosensory cortex revealed with voltage sensitive dyes. Journal of Comparative Neurology. 375 (1), 89-108 (1996).
- Wong-Riley, M. Changes in the visual system of monocularly sutured or enucleated cats demonstrable with cytochrome oxidase histochemistry. Brain research. 171 (1), 11-28 (1979).
- Moore, J. D., Deschênes, M., Kleinfeld, D. Self-generated vibrissa motion and touch are differentially represented throughout ventral posterior medial thalamus in awake, head-fixed rats. Society for Neuroscience Annual Meeting. 41 496.08/TT424 Society for Neuroscience. 41, (2011).
- Khatri, V., Bermejo, R., Brumberg, J. C., Zeigler, H. P. Whisking in air: Encoding of kinematics by VPM neurons in awake rats. Somatosensory and Motor Research. 27 (2), 344-356 (2010).
- Hill, D. N., Curtis, J. C., Moore, J. D., Kleinfeld, D. Primary motor cortex reports efferent control of vibrissa position on multiple time scales. Neuron. 72 (2), 344-356 (2011).
- Moore, J. D. Hierarchy of orofacial rhythms revealed through whisking and breathing. Nature. 497, 205-210 (2013).
- Duque, A., Zaborszky, L. Neuroanatomical Tract-Tracing 3. , Springer. 197-236 (2006).
- Neuroactive substances: Neuropharmacology by microiontophoresis. , Kation Scientific. Available from: http://kationscientific.com/fsubstances.html Forthcoming.
- Dyes and Tracers: Sitemarking and tracktracing by microiontophoresis. , Kation Scientific. Available from: http://kationscientific.com/fdyes.html Forthcoming.
- Urbain, N., Deschênes, M. Neuroactive substances: Neuropharmacology by microiontophoresis. (Kation Scientific), Dyes and Tracers: Sitemarking and tracktracing by microiontophoresis. (Kation). Journal of Neuroscience. 27 (45), 12407-12412 (2007).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
