מאמר שיטה

שתי שיטות לקביעת אדם תאי רירית הרחם סטרומה ראשיים מדוגמאות כריתת הרחם

DOI:

10.3791/51513

⸱

23 במאי 2014

 ,  ,  , 
1Department of Pathology, University of Virginia, 2Department of Obstetrics & Gynecology, University of Virginia

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הקמת מערכות עיקריות של רירית הרחם סטרומה תא תרבות מדגימות כריתת רחם היא טכניקת ערך ביולוגית וצעד חיוני לקראת רודף מגוון רחב של מחקר שואף. כאן, אנו מתארים שתי שיטות המשמשות להקמת תרבויות סטרומה מרקמות של רירית הרחם שעברו כריתה כירורגית של חולים אנושיים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאמצים רבים הוקדשו להקמת מערכות בתרבית תאים במבחנה. מערכות אלה נועדו לבנות מודל של מספר עצום של in vivo תהליכים. מערכות תרבית תאים הנובעות מדגימות של רירית הרחם אדם אינן יוצאי דופן. יישומים נעים בין תהליכים פיסיולוגיים מחזוריים רגילים לפתולוגיות של רירית הרחם כגון סרטן גינקולוגיות, מחלות זיהומיות, וליקויי פוריות. כאן, אנו מספקים שתי שיטות להקמת תאי סטרומה רירית הרחם עיקריים מדגימות כריתת רחם רירית הרחם שעברו כריתה בניתוח. השיטה הראשונה מכונה "שיטת הגירוד" ומשלבת גירוד מכאני באמצעות סכין כירורגית או גילוח ואילו בשיטה השנייה נקראת "שיטת טריפסין." שיטה זו האחרונה משתמשת בפעילות האנזימטית של טריפסין כדי לקדם את ההפרדה של תאים והעיקריים תא תולדה. אנו מדגימים המתודולוגיה צעד אחר צעד באמצעות תמונות ומיקרוסקופ דיגיטליים. אנחנו גם providדוגמאות דואר לאימות שורות תאי סטרומה רירית הרחם באמצעות תגובות כמותיים בזמן אמת שרשרת פולימרז (qPCR) וimmunofluorescence (IF).

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קורפוס הרחם האנושי מורכב משלוש שכבות, perimetrium (או serosa), myometrium, ורירית הרחם. הבחנה כל אחת משכבות אלה הוא צעד חשוב להקמת שורות תאים של רירית הרחם. Perimetrium הוא רוב השכבה החיצונית של הרחם ומורכב של תאים דקים, הצפק. Myometrium הוא השכבה העבה, באמצע של הרחם ומורכב מתאי שריר חלק. רירית הרחם מזוהה כשכבה הפנימית של הרחם וכולל אוכלוסיות האפיתל ותאים סטרומה.

רירית הרחם הוא מחולק חלוקה נוספת לשכבת basalis גזע שאוכלוסיית תאי השערה היא לאכלס מחדש את שכבת functionalis בערך כל 28 ימים 1. שכבת functionalis של רירית הרחם האנושית עוברת שינויים ביוכימיים ומורפולוגיים משמעותיים בתגובה למחזור הורמונים. הורמונים אלה נגזרים מבלוטת יותרת המוח והשחלות.

ייצור מתואם ופרסום תוצאות הורמונים במחזור רבייה. מחזור הרבייה נועד להכין את רירית הרחם לאירועי השרשת עובר פוטנציאליים. בבני אדם, מחזור הרבייה ידוע בשם "המחזור החודשי" ומחולק לשלושה שלבים - שגשוג, הפרשה, ווסת. שלב השגשוג כרוך ההתפשטות של שכבת רירית הרחם functionalis ואילו שלב ההפרשה מתאפיין בהבשלת functionalis. באופן ספציפי, שינויים תאיים, הפרשות, והתמיינות תאים לאותת השתלה פוטנציאלית. אם השתלה אינה מתרחשת לפני תום שלב ההפרשה, שכבת רירית הרחם functionalis נשפכה במהלך שלב הווסת. חשיבותה של וסת והאירועים המפעילים את שפיכת שכבת functionalis הם עדיין נדונה. בבני אדם, זה כבר מציב כי וסת היא התוצאה של אירוע אמצע הפרשה בידול שלב מסוים ידועכ" decidualization הספונטני "2. בכתב יד זה, אנו מספקים מתודולוגיה מפורטת לשתי שיטות בידוד תא סטרומה רירית הרחם, ולהשתמש בשילוב של immunofluorescence ותמונות דיגיטליות להדגים את היעילות של גישות אלה. בנוסף, אנו מיישמים את השימוש נפוץ במודל חוץ גופית של decidualization הספונטני כדי לאשר בידוד תא סטרומה רירית הרחם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

דגימות כריתת רחם בשימוש בכתב היד הזה נאספו הקונקורדנציה עם פרוטוקול אתיקה אישר-IRB האוניברסיטה הממוספר # IRB-HSR 14424.

1. רכישה לדוגמא ממקור קליני

  1. השג ממשלה וקווים מנחים אתיים המבוסס על מוסד ותיעוד אישור לפני תחילת.
  2. לנהל את כל השלבים בתנאים סטריליים.
  3. לשמר רקמה שמקורם בחולה בתקשורת (RPMI או DMEM / גבוה גלוקוז) בצינור 50 מיליליטר ב 4 ° C, אם המדגם לא יכול להיות מעובד בתרבות באופן מיידי. דוגמאות ניתן לאחסן במצב זה לתקופה מקסימלית של 24 שעות.
  4. שטוף דגימת רקמה שלוש פעמים עם בופר פוספט סטרילי 1X (PBS) ולהשליך את הפתרון בין שוטף.

2. הכנה של שורות תאים ראשוניות בשיטת האוספות

  1. הוספת 4-10 מיליליטר של תקשורת צמיחה (RPMI או DMEM / גלוקוז גבוהה בתוספת 10% שור סרום עוברי ו -1% פניצילין, streptomyCIN) לרקמות ולהוסיף Fungizone (0.25 מיקרוגרם / מיליליטר בריכוז סופי) ל30 דקות.
  2. מחק את תקשורת הצמיחה.
  3. שטוף רקמה פעמיים עם 1X PBS.
  4. מניחים את הרקמה על צלחת תרבית תאי 6 סנטימטר להבחין בין myometrium ושכבות רירית הרחם (ראה איורים 2 א-2C לתיאור נוסף). הפרד את רירית הרחם.
  5. באמצעות להב סכין מנתחים או סכין גילוח, ויחצה את הרקמה לחתיכות קטנות תוך מגרד על צלחת תרבית תאי 6 סנטימטר. סריטות אלה להקל על ההתקשרות של תאי רירית הרחם העיקריים המתעוררים. בהשוואה לשיטת טריפסין, יש צורך יותר רקמה (ראה איור 2 ד לקירוב).
  6. בעדינות, להוסיף 2 מיליליטר של תקשורת צמיחה לצלחת שרוטה (שברי רקמה יהיו גלויים ומשותק באופן אידיאלי מתנועת הגירוד).
  7. העבר את הצלחת (ים) לחממה ייעודית תרבית תאים (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2). לייעד מקום לשורות תאים ראשוניים, מן othאה מנות תרבות תא. תרבויות עיקריות הן רגישות יותר להידבקות וזיהום.
  8. לבחון את התאים תחת מיקרוסקופ אור יומי. אוכלוסיות קטנות של תאים צריכים להופיע ביום שניים או שלושה מרחבי הרקמות הפרוסים (ראו איור 3 ב).
  9. כדי לשמור על תרבויות, לשטוף בעדינות עם 1X PBS ולהוסיף תקשורת טרי צמיחה (2ml) כל שלושה ימים. כאשר העלאות ריבית התפשטות, מדיה נוספת צמיחה (3-4 מיליליטר) ניתן להוסיף לצלחת 6 סנטימטר התרבות (ים).
    הערה: במהלך שינויי כביסה ותקשורת, חתיכות של רקמות צפויות להישאף. זו לא תשפיע על צמיחה של תאים חסיד. חתיכות של רקמה צריכה להישאף על ידי השלב שלאחר מכן (2.10) כמושבות חדשות צפויים לצאת אחרי שבוע אחד.
  10. כאשר צלחת 6 סנטימטר היא כ 75 - מחוברות 80% (ראה איור 3 ב), מעבר באמצעות טריפסין 0.05%. לא ניתן passaged תאים ראשוניים ללא הגבלת זמן - להקפיא את צלחת אחד מתאים בהקדם שתיים או שלוש צלחות הן maintained. אם יותר קטעים נדרשים, בצע את פרוטוקול הנצחה (הנסקרת ב נ"צ 3).

3. הכנה של שורות תאים ראשוניות בשיטת טריפסין

  1. מניחים פיסה קטנה של רקמת רירית הרחם (ראה איור 2 ד לקירוב) ב 2 מיליליטר של טריפסין 0.25% בתוספת Kanamycin (0.03 מ"ג / מיליליטר בריכוז סופי).
  2. דגירה רקמה על 37 מעלות צלזיוס במסתובבת פלטפורמה ל30 דקות.
  3. בקצרה מערבולת הרקמות.
  4. צנטריפוגה המדגם ב 200-400 XG במשך 2 דקות וזורקים supernatant.
  5. הוספת טריפסין הטרי וKanamycin.
  6. דגירה הרקמה על 37 מעלות צלזיוס בזמן מסתובב לשעה.
  7. מערבולת הרקמות ל5-10 שניות.
  8. הוספת 2ml של תקשורת צמיחה (בתוספת 10% שור סרום עוברי ו -1% פניצילין, סטרפטומיצין) כדי לבטל את טריפסין.
  9. תאי צנטריפוגה ב 200-400 XG במשך 2-3 דקות.
  10. בטל supernatant ולהוסיף 2 מיליליטר של לגדולתקשורת ה לתאי pelleted.
  11. צלחת על צלחת תרבית תאי 6 סנטימטר. מגרד את הצלחת כמו בשלב 2.5 של הכנת שורות תאים ראשוניות בשיטת האוספות הוא לא הכרחי, אבל משפר את הקובץ המצורף ותולדה של תרבויות עיקריות.
  12. לפקח על תאים תחת מיקרוסקופ אור יומי. תאים הם בדרך כלל גלויים תחת מיקרוסקופ אור לאחר 24-48 שעה (ראו איור 3 ג).
  13. כדי לשמור על התרבויות, לפקח על התאים ולשנות את התקשורת בכל 2-3 ימים כמו בשלב 2.9.
  14. למעבר התאים, השתמשו 0.05% או 0.25% טריפסין כאשר תאים מגיעים confluency 75-80% (ראה איור 3 ג).

4. שמירת רקמות נוספות לניתוח בהקפאה (הצמד ופורמלין קיבוע)

  1. שטוף מדגם פעמיים עם 1X PBS.
  2. לשאוב הרבה נוזלים ככל האפשר.
  3. להקפאת הצמד, למקם את דגימת רקמת רירית הרחם בצינור 1.7 צנטריפוגות (ראה 2F דמויות ו2G). הנח את 1.7צינור צנטריפוגות בחנקן נוזלי ל10 שניות או עד שניתן לראות שהרקמה הקפיאה למטה.
    שים לב: יש להיזהר שלא לגעת בחנקן נוזלי ישירות בעת הכנת דגימות. דוגמאות ניתן לאחסן ב -80 ° C עד עיבוד או ניתוח נוסף.
  4. לקיבעון פורמלין, לחתוך פיסה קטנה של רקמת רירית הרחם (ראה איור 2H), ולצלול ב10% פורמלין אבץ שנאגרו. לאחר 24 שעות, להשליך פורמלין ולהוסיף 70% אתנול לדגימות רקמה ועד עיבוד נוסף.

5. Immunofluorescence (IF)

  1. קיבוע תא
    1. הכן את התאים בשקופית תרבות או צלחת.
    2. בעדינות, לשטוף תאים עם 1X PBS.
    3. הוספת מתנול טרום צונן (4 מעלות צלזיוס) ואצטון (מעורבב ביחס של 1:1) במשך 5 דקות.
    4. אוויר יבש השקופית לפני שתמשיך. שקופית יכולה להיות מאוחסן על 4 מעלות צלזיוס במשך 1-2 שבועות במידת צורך.
  2. עיבוד IF
    1. רעננות תאים עם 1X PBS עבור 10 דקות. עבור עבורllowing שלבי 1-6, לנהל את כל הכביסות וincubations על פלטפורמה מסתובבת.
    2. בלוק באמצעות 1X PBS בתוספת 1% הסרום אלבומין שור (BSA) וסרום מיני 1% ספציפיים (מקור 2 nd נוגדן) ל30 דקות בטמפרטורת חדר (RT).
    3. דגירה בנוגדן ראשוני (ראה המלצות יצרנים לדילולי נוגדנים). מתייחס לחומרים לנוגדנים ספציפיים. לדלל את הנוגדן הראשוני במאגר חסימה טרי כמו בשלב 5.2.2. דגירה זה יכול להתנהל במשך לפחות שעה 2 ב RT או הלילה ב 4 ° C.
    4. לשטוף 3 פעמים עם 1X PBS במשך 5 דקות כל אחד.
    5. דגירה בנוגדנים משני (ראה המלצות יצרנים לדילולי נוגדנים). לדלל את הנוגדנים משני במאגר חסימה טרי כמו בשלב 5.2.2. כדי למנוע צילום הלבנה, חשוב לנהל את זה, והשלבים הבאים בהיעדר האור.
    6. לשטוף 3 פעמים עם 1X PBS במשך 5 דקות כל אחד.
    7. Thoroughly לייבש את השקופיות.
    8. הוסף מדיה גוברת ופתרון counterstaining DAPI.
    9. החל coverslip וסוגר את הקצוות באמצעות איטום (ים). שקופיות ניתן לאחסן ב 4 ° C בחושך עד 2 שבועות.

6. RNA חילוץ

  1. גלולה 1 x 10 7 תאים על ידי צנטריפוגה. כל החומרים וחומרים כימיים בפרוטוקול זה צריכים להיות RNase חינם.
  2. תאי Lyse במגיב 1 Trizol מיליליטר, דגירה הדגימות הומוגני ל10 דקות בטמפרטורת חדר כדי להשלים את הניתוק של מתחמי nucleoprotein.
  3. הוסף 200 μl של כלורופורם לכל 1 מיליליטר של Trizol. לנער במרץ ביד ל15 שניות ודגירה של 2-3 דקות ב RT.
  4. צנטריפוגה במהירות המרבית (15,000 XG) במשך 15 דקות ב 4 ° C. שלוש שכבות יגרמו.
  5. מעביר את השלב מימיים העליון לתוך צינור microcentrifuge טרי. הוספת גליקוגן μl 1 כדי להגדיל את תשואת RNA; עם זאת, צעד זה הוא הכרחי רק כאשר קטןכמות הרנ"א צפויה.
  6. הוסף 0.5 מיליליטר של אלכוהול לשכבה המימית, ולהפוך את הדגימות 3-5 פעמים. דגירה דגימות ב RT עבור 10 דקות. כדי להגדיל את התשואה, ניתן להציב דגימות ב-20 ° C או -80 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
  7. צנטריפוגה במהירות המרבית ל10 דקות ב 4 ° C.
  8. בשלב זה, גלולה קטנה של RNA צריכה להיות גלויה. בטל supernatant.
  9. שטוף את RNA עם 1 מיליליטר של 75% אתנול.
  10. צנטריפוגה במהירות המרבית למשך 5 דקות וזורקים supernatant. ניתן לכבס דגימות פעם נוספת ללהיפטר מזהמים אורגניים, אך צעד זה אינו הכרחי.
  11. בקצרה, לייבש את גלולה RNA עד RNA גלולה היא יבשה (בדרך כלל לוקח 7-10 דק ').
    הערה: צעד נוסף אחד יכול להשתמש בו כדי להקטין את העניין אורגני ולצמצם את זמן ייבוש. לאחר השלכת supernatant מלשטוף אתנול, דגימות ספין במהירות המרבית למשך דקה נוספת ונוזל שיורי לשאוב. שים לב שלא לשאוב גלולה.
  12. לפזר RNA במי RNase ללא, תלוי בגודל של גלולה RNA. כרכים בדרך כלל נעים 10-50 μl.
  13. דגירה דגימות ב55 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, ולמדוד את הריכוז של רנ"א.
  14. דגימות חנות ב -20 ° C עד עיבוד נוסף.

7. הפוך תמלול

  1. להביא את RNA המדגם (1-3 מיקרוגרם) בהיקף של 9 μl עם H 2 O.
  2. RNA חום ל70 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות.
  3. כדי ליצור תערובת הורים AMV, לשלב את ריאגנטים הבאים: 5 μl של dNTP (ריכוז עבודה של 50 מיקרומטר), 5 μl של oligos N6-DNA (ריכוז עבודה של 80 מיקרומטר), 5 μl של חיץ 5X AMV, וμl 1 של AMV . פתרון תערובת אמן זה נועד לדגימה אחת.
  4. הוספת 16 μl של מיקס מאסטר RNA המחומם. סופי עוצמת התגובה תהיה 25 תגובת μl.
  5. השתמש בתנאים הבאים PCR לשעתוק לאחור: (השלב ​​1) C ° 42 ל90 דקות, (STAge 2) 95 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות, ו( שלב 3) 4 ° C עד עיבוד נוסף.

8. Time PCR נדל

  1. לנהל PCR תגובות באמצעות פריימרים, טמפרטורות חישול, מספרי מחזור, וחומרים כימיים הנמצאים בטבלה 1.
    שים לב: הוא אידיאלי לעקוב אחר הוראות יצרן בעת שימוש בחומרים כימיים PCR (מתייחס למספרי חברה וקטלוג בחומרים).

9. במבחנה Decidualization Protocol (נגזר 4 Ref ו5)

  1. פלייט תאי רירית הרחם.
  2. לגדול confluency של 75-85%.
  3. לאחר התאים הופכים מחוברות, לשטוף פעם אחת עם 1X PBS.
  4. במהירות, להוסיף מדיה ללא הורמון (RPMI בחינם פנול בתוספת 5% FBS רצועת פחם ו -1% פניצילין, סטרפטומיצין).
  5. לאחר 24 שעות, להוסיף מדיה הורמון חופשי בתוספת אצטט medroxyprogesterone (MPA) בריכוז סופי של 1 מיקרומטר ו8-bromoadenosine 3 ', 5'monophosphate מחזורי (cAMP) בריכוז סופי של 0.5 מ"מ.
  6. אחרי לפחות 48 שעות, לעצור את התגובה ולשמור את הצלחת (ים) לעיבוד נוסף.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כפי שהודגש בסעיף הפרוטוקול, כדי להיות בטוח לנהל את כל השיטות תחת ממשלתי, מוסדיות, וקווים המנחים אתיים בעת טיפול והכנת רקמה אנושית.

בכתב היד הזה כלול הוא איור של זרימת העבודה הכללית של "שיטת הגירוד" (איור 1 א) ואת "שיטת טריפסין" (איור 1) המשמשת להקמת תרבויות רירית הרחם ראשונית. שיטות אלה מתוארות בפירוט בסעיף הפרוטוקול (ראה חלקים - 1. 3.). שני השיט...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קבוצות אחרות שתיארו והותאמו המתודולוגיה להכנת תרבויות סטרומה רירית הרחם, שרובם לנצל collagenase 4,12,13,15-18. בכתב היד הזה, שאנו מספקים מתודולוגיה וראיות לשתי שיטות עיקריות פשוטות של רירית הרחם תרבות סטרומה, אשר שניהם מנוצלים על ידי המעבדה שלנו מסיבות כלכליות והזמינות הנוחה של טריפסין ו / או סכין גילוח.

כאשר משווים את שתי השיטות שלנו, הן ליצור בהצלחה תרבויות עיקריות קיימא. השיטה המועדפת שלנו היא שיטת ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לגילוי.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מודים למאמצים המשותפים של ד"ר Thao דאנג וחברי המעבדה שלה לשימוש בציוד ההדמיה ומיקרוסקופ. אנו מודים גם Biorepository ומתקן רקמות מחקר ליבה (BTRF), ג'ף הרפר, והתושבים באוניברסיטת וירג'יניה שספק לנו רקמת רחם. אנו מודים קרול ה"שלאכטה לעזרה עם סכמטי סקירה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.25 טריפסין או 0.05% טריפסין HycloneSH3023602 או SH30004202
צינור צנטריפוגה 1.7 מיקרו   ג'נסי סיינטיפיק22-272A
1 ומיקרו; l, 20 ומיקרו; l, 200 מ"ל ו-1,000 ומיקרו; l פיפטה   Genesee Scientific24-401,24-402, 24-412, 24-430
15 מ"ל צינור חרוט Hyclone339650
שפופרת חרוטית 50 מ"ל היקלון339652
6 ס"מ צלחת תרבית תאים תרמו סיינטיפיק12-556-002
8 בארות Chambers תרמו סיינטיפיקAB-4162
אצטט פישר סיינטיפיקC4-100
AMV RT אנזים/בופר Bio LabsM077L
סרום בקר אלבומין (BSA) Fisher ScientificBP-1605-100
פורמלין אבץ חומצי תרמו59201ZF
FBS פישרNC9019735
כלורופורם פישר סיינטיפיקBP1145-1
תלוש כיסוי מותג פישר12-544D
AMP מחזורי (cAMP) סיגמאB7880
DMEM/גלוקוז גבוה HycloneSH30243FS
dNTP BiolineBIO-39025
חמור נגד עיזים -TRITC סנטה קרוזSC-3855
סרום חמורים ג'קסון' s lab017-000-002
נוגדן E Cadherin   אפיטומיקס1702-1
אתנול Fisher ScientificBP2818-1
סרום בקר עוברי (FBS) פישר סיינטיפיק03-600-511
Fungizone Amphotericin B Gibco15290-018
בדיקת GAPDH לייף טכנולוגיותHS99999905
גליקוגן 5Prime2301440
נגד עכבר עיזים - FITC ג'קסון' s מעבדה115-096-003
איזופרופנול פישר סיינטיפיקBP2618-1
קנמיצין   פישר סיינטיפיקBP906-5
מדרוקסיפרוגסטרון אצטט (MPA) סיגמאM1629
MeOH (מתנול) פישר סיינטיפיקA4-08-1
אמצעי הרכבה (עם DAPI) Vector LabratoriesH-1500
N6 DNA אוליגוס מגרד Invitrogen
מספר 15   BD371615
פאן ציטוקרטין  עכבר mAB איתות תאים4545
PBS (מי מלח חוצץ פוספט) פישר סיינטיפיקBP-399-4
תמיסת גלוטמין פניצילין-סטרפטומיצין 100X   HycloneSV30082.01
PML נגד גוף נגד עזים Santa CruzSC-9862
פריימר(ים) Eurofins
RPMI היקלוןSH30027FS
RPMI (ללא פנול) גיבקו11835
סייבר גרין   תרמו סיינטיפיקAB-4162
תקמן תרמוAB-4138
טריזול Life Technologies15596018
נוגדן וימנטין אפיטומיקס4211-1
פס פחם

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Heller, D. in The endometrium: a clinicopathologic approach. Heller, D. , 56-75 (1994).
  2. Emera, D., Romero, R., Wagner, G. The evolution of menstruation: a new model for genetic assimilation: explaining molecular origins of maternal responses to fetal invasiveness. Bioessays. 34, 26-35 (2011).
  3. Gudjonsson, T., Villadsen, R., Ronnov-Jessen, L., Petersen, O. W. Immortalization protocols used in cell culture models of human breast morphogenesis. Cell Mol Life Sci. 61, 2523-2534 (2004).
  4. Brosens, J. J., Hayashi, N., White, J. O. Progesterone receptor regulates decidual prolactin expression in differentiating human endometrial stromal cells. Endocrinology. 140, 4809-4820 (1999).
  5. Jones, M. C., et al. Regulation of the SUMO pathway sensitizes differentiating human endometrial stromal cells to progesterone. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 16272-16277 (2006).
  6. Salamonsen, L. A., et al. Proteomics of the human endometrium and uterine fluid: a pathway to biomarker discovery. Fertil Steril. 99, 1086-1092 (2013).
  7. Haouzi, D., Dechaud, H., Assou, S., De Vos, J., Hamamah, S. Insights into human endometrial receptivity from transcriptomic and proteomic data. Reprod Biomed Online. 24, 23-34 (2012).
  8. Chen, J. I., et al. Proteomic characterization of midproliferative and midsecretory human endometrium. J Proteome Res. 8, 2032-2044 (2009).
  9. Talbi, S., et al. Molecular phenotyping of human endometrium distinguishes menstrual cycle phases and underlying biological processes in normo-ovulatory women. Endocrinology. 147, 1097-1121 (2006).
  10. Punyadeera, C., et al. Oestrogen-modulated gene expression in the human endometrium. Cell Mol Life Sci. 62, 239-250 (2005).
  11. Ponnampalam, A. P., Weston, G. C., Susil, B., Rogers, P. A. Molecular profiling of human endometrium during the menstrual cycle. Aust N Z J Obstet Gynaecol. 46, 154-158 (2006).
  12. Zhang, L., Rees, M. C., Bicknell, R. The isolation and long-term culture of normal human endometrial epithelium and stroma. Expression of mRNAs for angiogenic polypeptides basally and on oestrogen and progesterone challenges. J Cell Sci. 108 (1), 323-331 (1995).
  13. Richards, R. G., Brar, A. K., Frank, G. R., Hartman, S. M., Jikihara, H. Fibroblast cells from term human decidua closely resemble endometrial stromal cells: induction of prolactin and insulin-like growth factor binding protein-1 expression). Biol Reprod. 52, 609-615 (1995).
  14. Gellersen, B., Brosens, J. Cyclic AMP and progesterone receptor cross-talk in human endometrium: a decidualizing affair. J Endocrinol. 178, 357-372 (2003).
  15. Marsh, M. M., Hampton, A. L., Riley, S. C., Findlay, J. K., Salamonsen, L. A. Production and characterization of endothelin released by human endometrial epithelial cells in culture. J Clin Endocrinol Metab. 79, 1625-1631 (1994).
  16. Siegfried, J. M., Nelson, K. G., Martin, J. L., Kaufman, D. G. Histochemical identification of cultured cells from human endometrium. In Vitro. 20, 25-32 (1984).
  17. Rawdanowicz, T. J., Hampton, A. L., Nagase, H., Woolley, D. E., Salamonsen, L. A. Matrix metalloproteinase production by cultured human endometrial stromal cells: identification of interstitial collagenase, gelatinase-A, gelatinase-B, and stromelysin-1 and their differential regulation by interleukin-1 alpha and tumor necrosis factor-alpha. J Clin Endocrinol Metab. 79, 530-536 (1994).
  18. Dimitriadis, E., Robb, L., Salamonsen, L. A. Interleukin 11 advances progesterone-induced decidualization of human endometrial stromal cells. Mol Hum Reprod. 8, 636-643 (2002).
  19. Sakai, N., et al. Involvement of histone acetylation in ovarian steroid-induced decidualization of human endometrial stromal cells. J Biol Chem. 278, 16675-16682 (2003).
  20. Logan, P. C., Ponnampalam, A. P., Steiner, M., Mitchell, M. D. Effect of cyclic AMP and estrogen/progesterone on the transcription of DNA methyltransferases during the decidualization of human endometrial stromal cells. Mol Hum Reprod. 19, 302-312 (2013).
  21. Tamura, I., et al. Induction of IGFBP-1 expression by cAMP is associated with histone acetylation status of the promoter region in human endometrial stromal cells. Endocrinology. 153, 5612-5621 (2012).
  22. American Society for Reproductive Medicine: Quick facts about infertility. , Available from: http://www.asrm.org/detail.aspx?id=2322 (2013).
  23. Salker, M., et al. Natural selection of human embryos: impaired decidualization of endometrium disables embryo-maternal interactions and causes recurrent pregnancy loss. PLoS One. 5, (2010).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

qPCR

מאמרים קשורים