הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בנייה ואפיון של Bioreactor פולד רומן וקאלי

9K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/51594

⸱

1 באוגוסט 2014

 ,  ,  , 
1Biomedical Engineering Program, University of Delaware, 2Department of Materials Science and Engineering, Delaware Biotechnology Institute, University of Delaware

במאמר זה

סיכום

ביו-ריאקטור חדשני של קפלי הקול המסוגל לספק גירוי רטט רלוונטי מבחינה פיזיולוגית לתאים מתורבתים נבנה ומאופיין. מכשיר תרבית דינמי זה, בשילוב עם פיגום פולי (ε-קפרולקטון) סיבי, יוצר סביבה מחקה קפלי קול המווסתת את ההתנהגויות של תאי גזע מזנכימליים.

תקציר

הנדסה במבחנה של רקמות פעילות מכנית דורשת הצגת תנאים מכניים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית לתאים מתורבתים. כדי לחקות את הסביבה הדינמית של קפלי הקול, נבנה ומאופיין ביו-ריאקטור חדשני של קפלי הקול המסוגל לייצר גירויים רטטים בתדרי פונציה בסיסיים. המכשיר מורכב ממחולל פונקציות, מגבר כוח, בורר רמקולים ותאי רטט מקבילים. תאי רטט בודדים נוצרים על ידי סנדוויץ' קרום סיליקון בהתאמה אישית בין זוג בלוקים אקריליים. קרום הסיליקון לא רק משמש כתחתית החדר אלא גם מספק מנגנון לאבטחת הפיגום עמוס התאים. אותות רטט, הנוצרים על ידי רמקול המותקן מתחת לבלוק האקרילי התחתון, מועברים לקרום באופן אווירודינמי על ידי האוויר המתנודד. שמונה מודולי רטט זהים, קבועים על שני מוטות מתכת נייחים, שוכנים בתא נגד לחות להפעלה ארוכת טווח בחממת תרבית תאים. מאפייני הרטט של הביוריאקטור של קפל הקול מנותחים באופן לא הרסני באמצעות ויברומטר דופלר לייזר (LDV). התועלת של מכשיר התרבות הדינמית מודגמת על ידי טיפוח מבנים תאיים בנוכחות רעידות סינוסואידיות של 200 הרץ עם תזוזה של אמצע הממברנה של 40 מיקרומטר. תאי גזע מזנכימליים המתורבתים בביו-ריאקטור מגיבים לאותות הרטט על ידי שינוי הסינתזה והפירוק של רכיבי מטריצה חוץ-תאיים הרלוונטיים לקפלי הקול. מערכת הביוריאקטור החדשנית המוצגת כאן מציעה פלטפורמה מצוינת במבחנה לחקר טרנסדוקציה מכנית הנגרמת על ידי רטט ולהנדסת רקמות קפלי קול פונקציונליות.

מבוא

לקפל ווקאלית האנושית, מורכבת משכבת ​​האפיתל, propria lamina (LP) ושרירי vocalis, הוא ברקמות רכות מיוחדות שממירה את זרימת אוויר מהריאות לגלים אקוסטיים להפקת צליל. 1 קפלי קול להתנדנד באופן קבוע במהלך phonation הנורמלי, תערוכת זנים של עד 30% בתדרים בסיסיים החל 100-300 הרץ. LP לקפל ווקאלית 2 מבוגרים הוא צבע מבנה מורכב משטחי (SLP), ביניים (ILP) ושכבה עמוקה (DLP). קבוצות נוספות סיווג האפיתל וSLP כשכבת רירית, ומשלבים את ILP וDLP לתוך הרצועה ווקאלי. 3 שכבת SLP מכילה בעיקר מטריקס אמורפי עם סיבי collagenous מפוזרים בדלילות, ואילו הרצועה מועשרת בקולגן בוגר וסיבים האלסטין כדי לספק כוח מספיק. 4 המבנה והמכניקה של קפלי קול יילוד להשתנות באופן משמעותי מעמיתיהם בוגרים שלהם. למרות שמנגנוןשל ויסות התפתחות לקפל ווקאלית והתבגרות עדיין לא מובן לחלוטין, ראיות ניסיוניות הצביעו על תפקידי ההגדרה של לחץ מכאני המופק מניקוד.

כמה מצבים רפואיים, ובכלל זה שימוש לרעה בקול, זיהומים, חומרים מגרים כימיים וניתוחים, עלולים לגרום נזק לקפל ווקאלית. הפרעות לקפל ווקאלית להשפיע 3-9% מאוכלוסיית ארה"ב. שיטות טיפול הנוכחיות להפרעות לקפל ווקאלית מוגבלות 5 וגישה הנדסית גזע מבוסס תאי רקמה התפתחה כאסטרטגיה מבטיחה לשחזור תפקוד לקפל ווקאלית. תאי גזע mesenchymal (MSCs) הם אלטרנטיבה מתאימה לfibroblasts לקפל ווקאלית העיקרית להנדסת רקמות לקפל ווקאלית. 6-9 מפרט גורל תאי גזע ופיתוח רקמות הבא מתווכים על ידי הנישה הספציפית שהם מתגוררים, אשר מצבו המכני הוא גורם חיוני. 10 כוחות מכאניים הם רגולטורים חיוניים של המורפוגנזה רקמהnd הומאוסטזיס, במיוחד לרקמות שנחשפות באופן שיגרתי לטעינה. 11 מנקודת מבט של הנדסת רקמות, זה כבר הוכיח כי חשיפה לגירויים פיזיולוגית מכאניים רלוונטיים מקדם גזע התמיינות תאים ושיפוץ מטריצת רקמות ספציפיות. 12-15

bioreactors תרבית רקמה נועדו לדמות את הסביבה הפיזיולוגית הרצויה לצמיחת תאים או רקמות במבחנה. להנדסת רקמות לקפל ווקאלית, זה קריטי במיוחד כדי לשחזר את הסביבה מכאנית של קפלי קול phonating. Bioreactor לקפל ווקאלית אידיאלית צריך למעשה לספק רמזי רטט לתאי תרבות, המאפשר שליטה קלילה על תדר, המשרעת ומשך זמן של תנודות. Titze ועמיתים לעבודה המציאו bioreactor וקאלי לקפל (bioreactor T1) 16 שמשלב מתיחה סטטית עם תדירות גבוהה (20-200 הרץ) תנודות כדי לעורר את הייצור של חלבוני מטריצה. מנצלגרם bioreactor זה, ווב ועמיתים 17 חקרו את ההשפעות של 10 יום, תנודות 100 הרץ על fibroblasts עורי בתרבית בחומצה היאלורונית (HA) מבוסס הידרוג'ל. מבני נתונים לרעידות הציגו ביטוי גבוה של HA synthase-2, decorin, fibromodulin ומטריקס metalloproteinase-1 (MMP1), ביחס לבקרות סטטי (HAS2). השפעות גירוי נמצאו להיות תלוי בזמן. לאחרונה, הקבוצה שלנו 18 התאסף bioreactor וקאלי לקפל (bioreactor J1) באמצעות מגבר כוח, מחוללים אותות, רמקול חזק ומוקף קרום סיליקון circumferentially מעוגני המעביר את אוויר נדנוד לתאים המצורפים. fibroblasts עורלת ילודים טיפח בbioreactor J1 היו נתונים לשעה 1 של רטט ב60, 110 או 300 הרץ, עם מתח במטוס של עד 0.05%. תוצאות qPCR הציעו כי הביטוי של גנים מסוימים ECM שונו באופן מתון בתגובה לתדרי רטט המגווניםואמפליטודות.

עיצובי bioreactor אלה, בעוד מסקרן, יש כמה מגבלות. לדוגמא, מערכת T1 דורשת מספר רב של מחברים וברים לצימוד מכאני, להגביל את התדרים מקסימאלי שניתן להשיג. יתר על כן, תאים עשויים להיות חשופים להפרעות חרדה ונוזל מכאניות בלתי רצויות שתסבכנה את פרשנות הנתונים. Bioreactor J1, לעומת זאת, מציג את יעילות המרת אנרגיה נמוכה יחסית ואינו ידידותי למשתמש. בנוסף, רטט בתדירות גבוהה מנתק את מבני התא עמוס מקרום סיליקון בסיסי. Bioreactor J2 לקפל ווקאלית שדווח כאן, שתוכנן על בסיס אותו העיקרון כמו גרסת J1, מותאם במיוחד עבור עקביות ושחזור. התנודות מחקה-phonation נוצרות מבחינה אווירודינמית בתאי רטט מותאמים באופן אישי שבו פולי MSC-מאוכלסים סיביים (ε-caprolactone) פיגומים (PCL) הם effectivהשיג איליי. הלייזר דופלר vibrometry (LDV) מאפשר למשתמש לאמת את פרופיל הרטט של ההרכבה קרום / פיגום. בהפגנה שלנו, MSCs חשופים לתנודות סינוסי 200 הרץ עם דפוס 1-HR-on-1-HR-off (של) עבור סכום כולל של שעות 12 ביום למשך 7 ימים. תגובות תאיות לרמזי רטט הוטלו נחקרות באופן שיטתי. בסך הכל, לקפל ווקאלית J2 מספק את התכונות הכי ידידותי למשתמש, המאפשר לימודי תרבות תא דינמי להתנהל בתפוקה גבוהה ואופנה לשחזור.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. Bioreactor עצרת (וידאו 1)

  1. הפוך תבנית אלומיניום (למות עגול + סיכת spacer) עם ממדים פנימיים וחיצוניים שנקבעו מראש (איור 1).
  2. שימוש בעובש משלב 1.1, לפברק קרום סיליקון (קוטר: 42 מ"מ, עובי: 1.5 מ"מ, איור 1) עם שרוול מושרש (קוטר: 12 מ"מ, עובי ~ 0.25 מ"מ, מעוצב על ידי סיכת spacer באיור 1) ב האמצע באמצעות ערכת אלסטומר סיליקון זמינה מסחרי.
  3. הפוך זוג לוקי אקרילי (איור 2 (4, 5)) עם פתח עגול (קוטר: 24 מ"מ) באמצע, לחרוט את החלק העליון (1.8 ס"מ עובי) ותחתון (0.9 ס"מ עובי) בלוקים עם רכסים וחריצים התאמה . 10
  4. כריך קרום סיליקון בין גושי אקריליק לזווג. אבטח את ההרכבה עם ארבעה ברגי פינה באמצעות מברג מומנט מיקרו להגדיר לכוח קבוע (35 CN · מ '). כתוצאה מכך,, מ '24 מים חזקקאמרי רטט עמוק מ 'רוחב ו18 מ"מ נוצר (איור 2 ג).
  5. הר 3 מיני וופר טווח ארוך "(איור 2 ד, 8 Ω/20 W) מתחת לתא הרטט דרך קבוצה נוספת של ברגי פינה בשכונה אקריליק התחתונה. בשלב זה, מודול רטט אישי מורכב.
  6. לשכפל שבעה מודולים רעידות נוספים. להדביק ארבעה מהם לאחת משני ברים נייחים אלומיניום (40 סנטימטר x 10 סנטימטר x 2.5 סנטימטר) על ידי הצבת בסיסי הרמקול בחורים במרווחים שווה עגולים (קוטר: 7 סנטימטר, עובי: 2 סנטימטר) חתוך לסורגים. לייצב את כל רמקול על ידי החדרת ברגים דרך הצד של בר האלומיניום לתוך כל חור עגול.
  7. בנפרד לשלוט ברמקולים על ידי בורר רמקולים. חבר רמקולי פרט לבורר על ידי הצמדת חוטים לכניסות החיוביות ושליליות על גוף הרמקול אז ליציאות המתאימות בבורר. בורר הרמקול מאפשר את האות מ tהוא מחולל אותות, לאחר שעברו דרך מגבר כוח, כדי להגיע לכל שמונת רמקולים בבת אחת (2E איור).
  8. הכנס את שני המערכים קאמריים, בורר הדובר והאלקטרוניקה קשורה במארז אנטי לחות. בית כולו ההרכבה בתרבית תאי חממה מסחרית.
  9. להאכיל את הכבלים הראשיים (דרך צינורות PVC כיתה רפואית) המחבר את מגבר הכוח ובורר רמקול באמצעות ההרכבה המסנן בחלק האחורי של החממה.

2. ייצור פיגום ואפיון

  1. לפזר כדורי PCL בכלורופורם בריכוז של 15% WT. טען את הפתרון לתוך מזרק 10 מיליליטר כתרים עם מחט קהה הסתיים 21 G.
  2. נעל את המזרק על משאבת מזרק לתכנות ולקבוע את קצב הזרימה ב1 מיליליטר / שעה.
  3. הנח את האספן מכוסה רדיד האלומיניום מול המחט אופקית, עם מרחק קצה מחט לאספן של ~ 18 סנטימטר.
  4. הצמד את alli החיוביקליפ תנין לאמצע של המחט, וקליפ תנין הקרקע לאספן האלומיניום, ולאחר מכן קבע את המתח באספקה ​​החשמל במתח הגבוה ב15 KV. זהירות: מתח גבוה, מרחק לשמור מהמחט.
  5. רצף להפעיל את משאבת המזרק ואספקת חשמל; מהירות נקי / להסיר את פתרון הפולימר השיורי המקיף את קצה המחט באמצעות מגבת נייר יבשה לפני שמטוסי סיבים יציבים וקונוס טיילור 19 נוצרים.
  6. לאפשר הסיבים מצטברים על אספן אל לעובי של ~ 250-300 מיקרומטר (~ 7 שעות בתנאי ספינינג הנוכחיים). אחסן את הפיגומים שנוצר בייבוש ואקום ל1-2 ימים כדי להסיר כל ממס שיורית.
  7. תמונת הפיגומים, גמגום מצופים בזהב, תוך שימוש במיקרוסקופ אלקטרוני סורק כדי להראות מורפולוגיה סיבים עקבית. 10

3. עצרת Bioreactor ואפיון

  1. אגרוף דיסק גלילי (קוטר: 8 מ"מ) עם ארבע זרועות (אורך: 2מ"מ) מחוץ למזרן PCL כ- סובב (איור 2 א) על ידי השימוש ראשון ביופסיה בקוטר מ"מ 12 לחתוך את הקוטר החיצוני של הדיסק. לאחר מכן להשתמש בביופסיה שנייה, 8 מ"מ לעשות חריצים ארוכים ארבעה 2 מ"מ מחולקים באופן שווה סביב הלהב המעגלי להבקיע בי הזרועות הן להיחתך. לאחר הבקיע עם אגרוף 8 מ"מ, השתמש בלהב סכין מנתחים כדי לחתוך את הקצוות של הזרועות כלפי חוץ. הכנס את הפיגום לתוך החריץ של קרום סיליקון באמצעות זרועות המורחבות (וידאו 1). שטח את הפיגום מוחדר בעדינות על ידי הלחיצה על המשטח באמצעות פינצטה השטוחה.
  2. צרף חתיכה קטנה של רדיד אל הדק (8 מ"מ x 2 מ"מ, צורה מאונך, איור 2) לפיגום PCL כדי לסייע השתקפות לייזר.
  3. אבטח את הקרום / הפיגום התאסף סיליקון PCL (כמפורט בשלב 1.4) בחדר הרטט. הוסף 1.5 מיליליטר מים בחדר כדי ללחלח את פיגום PCL לפני הרטט.
  4. באמצעות מחולל הפונקציה, להציג את רטט סימןals (למשל, גלי סינוסי 200 הרץ עם מתח שיא לשיא, VPP, של 0.1 V) לתא אקריליק דחוק. השתמש במד מתח כדי למדוד את המתח בצורה מדויקת בכל קלט רמקול. הערה: את הודעת Vpp ממחולל הפונקציה יהיה שונה ממתח סופו של הדבר נמסר לרמקול.
  5. להרכיב את LDV הנקודה אחת ולאבטח את ראש חיישן לייזר הסיב אופטי לחצובת ראש Pan-Tilt. זווית ראש החיישן, כך שהוא מצביע בניצב לשולחן. חבר את ראש חיישן LDV למודול רכישת נתונים דרך כבל קואקסיאלי אז מודול למחשב הנייד באמצעות כבל USB.
  6. למקד את קרן הלייזר בניצב בנקודות שנקבעו מראש שונות על קרום סיליקון (איור 2 ואיור 3).
  7. שימוש בתוכנת רכישת נתונים, להקליט עקירת אמצע קרום. לחץ על "הגדרות רכישה" מתפריט "אפשרויות"; לאחר מכן לשנות את מצב המדידה ל" FFT221;. בשלב הבא, לחץ על "המדידה רציפה" בסרגל הכלים הראשיים ולאחר מכן לחץ על השיא שנוצר בתדירות שנבחרה (איור 6 ד) כדי להקליט את העקירה.
  8. עלילה העקירה הרגילה אמצע קרום (w 0) כפונקציה של המיקום היחסי על פני המצע. לבנות מפת צבעי 3D של פרופיל התנודה פני השטח באמצעות תוכנת ניתוח 8.5 נתוני מקור.

4. תרבית תאי רטט

  1. MSCs עצם אנושי תת התרבות שמקורם במח בצלוחיות תרבית רקמת T150 בצפיפות זריעה ראשונית של 4,000-5,000 תאים / 2 סנטימטר בתקשורת תחזוקת MSC.
  2. אחרי 7-8 ימים של תרבית תאים (ל~ confluency 85%), trypsinize התאים עם מגיב תא דיסוציאציה כגון Accutase, לספור באמצעות hemocytometer, צנטריפוגה (440 XG במשך 5 דקות), ומחדש להשעות את התא גלולה ב תקשורת טרי MSC תחזוקה בריכוז של 4.5 x 10 6 תאים / מיליליטר.
  3. לטבול את scaffo PCLld ב70% O / נ אתנול לאחר הממס מתאדה, חושף את שני הצדדים של הפיגום לקוטל חידקים אור UV (254 ננומטר) ל5-8 דקות.
  4. משרים את פיגום PCL בפתרון פיברונקטין 20 מיקרוגרם / מיליליטר ב 37 מעלות צלזיוס במשך שעה 1. הכנס את הפיגום מצופה פיברונקטין לתוך קרום סיליקון. להרכיב את bioreactor כמפורט בשלב 1.
  5. הפץ 40 μl של ההשעיה התא באופן שווה על פיגום PCL המאובטח. אפשר התאים לצרף ל1-1.5 שעה לפני הוספת 1.5 מיליליטר נוסף תקשורת טריות לתא הרטט.
  6. תרבות פיגום MSC העמוס PCL באופן סטטי במשך 3 ימים ולרענן את התקשורת עם השלמת תרבות סטטי.
  7. להטיל משטרי רטט שנבחרו למבנים התאיים. הערה: כדוגמא, תאים חשופים ל- HR-off 1-HR-on-1 (של) רטט ב200 הרץ עם aw 0 של ~ 40 מיקרומטר ל12 שעות ליום לתקופה של עד 7 ימים. מבני נתונים לגירויי רטט מיועדים לשמש כדגימות VIB וcultu אלהאדום באופן סטטי בתאי רטט זהים ישמש פקדים סטטיים כ( Stat).

5. הערכות ביולוגיות

  1. לאסוף 200 תקשורת תרבות תא μl מכל תא בכל יום אחר (יום 1, 3, 5, ו -7) וברכה aliquots מהמדגם זהה יחד (800 μl כל אחד).
  2. לכמת את הייצור התאי של מטריקס metalloproteinase-1 (MMP1) וHA באמצעות ערכת ELISA MMP1 פיתוח וערכת ELISA תחרותית hyaluronan, בהתאמה, בעקבות ההליך של היצרנים. בינתיים, assay הייצור של מבשר אלסטין מסיס בעקבות הליך ELISA שדווח בעבר. 8
  3. עם ההשלמה של מחזור הרטט שעבר ביום 7, להסיר במהירות את המבנים התאיים מתאי הרטט באמצעות פינצטה חדה ובקצרה לשטוף אותם עם שנאגרו מלוח פוספט הקר (PBS, 4 מעלות צלזיוס).
  4. לצביעה החי / המתה, דגירה המבנים עם יודיד propidium (1:2,000 PBS) וSyto-13 (1:1,000 ב-PBS) בו זמנית למשך 5 דקות ב RT. תמונת המבנים המוכתמים במיקרוסקופ confocal multiphoton.
  5. בנפרד, Snap-להקפיא את המבנים תאיים ושטף PBS על קרח יבש ולחלץ את RNA הסלולרי בסך הכל בעקבות פרוטוקול שדווח בעבר לניתוח גנטי. 9
  6. בדוק את הכמות והאיכות של RNA חילוץ באמצעות ספקטרופוטומטר UV-Vis. דגימות RNA עם יחס A260/A280 וA260/A230 של 1.8-2.2 משמשות לניתוח qPCR שלאחר מכן.
  7. הפוך לתמלל RNA (500 ng / מדגם) לתוך cDNA באמצעות ערכת שעתוק לאחור זמינה מסחרי.
  8. בצע את תגובת PCR על מערכת זיהוי רצף זמן אמת באמצעות תערובת הורים PCR זמינה מסחרי בעקבות ההליך שפורט קודם לכן. 8
  9. לנתח את תוצאות qPCR באמצעות תוכנת ניתוח נתונים qPCR מסחרית. כדי להבטיח את האמינות של ניתוח נתונים, גנים התייחסות מרובים (YWHAZ, TBP, PPIA) מועסקים כintפקדי ernal, והשונות של יעילות פריימר ספציפית נלקחים בחשבון. 8

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

פיגומי PCL המפוברק על ידי electrospinning מכילים נקבוביות מיקרון בגודל ביניים וסיבים הסתבכו באופן אקראי עם קוטר ממוצע של 4.7 (איור 4 א) מיקרומטר. בהגדלה גבוהה יותר, חריצים ונקבוביים ננו גלויים על סיבים בודדים (איור 4). ציפוי של הפיגומים עם פיברונקטין משפר hydrophilicity ומקל על הידבקות התא הראשונית / מתפשט על פיגום PCL (תצפית לא פורסם).

גל סינוסי בתדירות רצויה (ו, 100-30...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הנדסה מוצלחת של רקמות לקפל ווקאלית פונקציונליות במבחנה דורשת הבילוי של microenvironment כמו מתקפל קולני לתווך ההתנהגויות של תאי multipotent. הדעה מקובלת היא כי מבני רקמה או איבר משקפים את הפונקציות שהם נדרשים לבצע. 22 לרקמות לקפל ווקאלית, התנודות בתדירות גבוהות המתרחשות במהלך phonation מוצעות להיות חשוב להבשלת רקמות. במחקר שלנו, פיגומי PCL משמשים כדי לספק תמיכה מבנית כמו ברצועות-אילו bioreactor לקפל ווקאלית נועד להציג אותות מכאניים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית ל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין אינטרסים כלכליים מתחרים קיימים.

תודות

אנו מודים לד"ר ג'פרי קפלן לאימונים שלו וייעוץ על ההדמיה confocal. אנו מודים גם למעבדת קק מיקרוסקופית אלקטרונים וד"ר Chaoying Ni לקבלת סיוע SEM. עבודה זו ממומנת על ידי המכון הלאומי לבריאות (NIDCD, R01DC008965 וR01DC011377). ABZ מודה אינטגרטיבית השכלה בוגרת ותכנית (IGERT) למימון המחקר Traineeship NSF.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ערכת אלסטומר סיליקוןDow CorningSylgard 184לרפא את הממברנה ב 100 & #176; C למשך שעתיים
PCLSigma Aldrich440744-500GMn ~ 80 kDa, ממיסים O/N
כלורופורםסיגמא אולדריץ'C7559-5VL
MSCs שמקורם במח עצם אנושיLonzaPT-2501התקבל עם מעבר 2
אמצעי תחזוקה MSCLonzaPT-300110% FBS במדיה בזאלית בתוספת
עם L-גלוטמין, גנטמיצין ואמפוטריצין
מגיב דיסוציאציה של תאי AccutaseLife TechnologiesA11105-01
אתנולסיגמא אולדריץ'E7023-500ML
פיברונקטיןסיגמא אולדריץ'F2006-1MG
MMP1 DuoSet ELISA ערכתמו"פ & D מערכותDY901
HA ELISA ערכתEchelon Biosciences  ק-1200   
PBSLife Technologies14190-136
פרופידיום יודיד Life TechnologiesP1304MP
Syto-13 Life TechnologiesS7575
ערכת שעתוק הפוך QuantiTect Qiagen205311
SYBR Green PCR מאסטר מיקסLife Technologies4309155
רמקול חלופיDAYTON audio
(באמצעות Parts Express)		DS90-8קונוס נייר, טווח מלא (80-13,000 הרץ), 85 dB
Ergo Micro מומנט מומנטMountz# 020377טווח מומנט: 20-120 cN· m
בורר רמקולים סטריאוRadioShack40-244טיפול בהספק מרבי 50 W
מחולל פונקציות אג'ילנט 33220Aטווח תדרים 1 ומיקרו; מגבר הספק Hz-20 MHz
 אודיו PYLEPylePro PT2400תגובת תדרים: 10 הרץ-50 קילו-הרץ, שני רמקולים
ערוצים
חממת תרבית תאים תרמו פישר Steri-Cult 3307
 מערכות משאבות עידן חדשNE-300
ספק כוח מתח גבוהSpellmanCZE 1000Rמתח יציאה: 0-30 קילו וולט
מיקרוסקופ אלקטרונים סורק JEOL-USAJSM-7400F
שולחן כתיבה זהב מקרטע ציפוידנטון ואקוםDSK00V-0013
דופלר לייזר ויברומטר PolytecPDV-100מדידת מהירות ללא מגע (0-22 קילו-הרץ)
מערכת זיהוי רצף PCR יישומי ביוסיסטמסABI7300
מיקרוסקופ קונפוקלי מולטיפוטוןZeissZeiss 510Meta NLO
UV-VIS ספקטרופוטומטר NanoDrop Products
באמצעות Thermo Scientific		ND-2000
VibSoft Data Acquisition SoftwarePolytecAcquisition רוחב פס עד 40 מגה-הרץ
Origin 8.5 Data Analysis Software qPCR qOriginLab
qPCR BiogazelleV2.3
סגסוגת אלומיניום מקמאסטר-קארסגסוגת 6061
בלוקים אקרילייםמקמאסטר-קאר
תא נגד לחות פוליקרבונטמקמאסטר-קארעמיד בפני פגיעות  ברגי פוליקרבונט
 כבל
Tygon S-50-HLמזרק 10 מ"ל שקוף, תואם
ביולוגית בקטון דיקינסון309604
21 גרם מחט קהה קצהחלקים קטניםNE-213PL-25באורך 1-1/2 אינץ'
 RadioShack270-354
אגרוף ביופסיה 8 מ"מSklar  מכשירים כירורגיים96-1152סטרילי, חד פעמי
12 מ"מAcuderm (באמצעות Fisher Scientific)NC9998681
צלוחיות תרבית רקמותתרבית תאיקורנינג
משאבת מזרק תוכנת ניתוח נתונים / חוט אלקטרוני מקמאסטר-קאר צינורות PVC בדרגה רפואית תאגיד הפלסטיק האמריקאי מתאמי קליפ תנין מבודד לחלוטין ניקוב ביופסיה מטופלות

מקורות

  1. Titze, I. R. Mechanical-Stress in Phonation. J. Voice. 8, 99-105 (1994).
  2. Titze, I. R. On the Relation Between Subglottal Pressure and Fundamental-Frequency in Phonation. J. Acoust. Soc. Am. 85, 901-906 (1989).
  3. Gray, S. D. Cellular physiology of the vocal folds. Otolaryngol. Clin. N. Am. 33, 679-698 (2000).
  4. Thibeault, S. L., Gray, S. D., Bless, D. M., Chan, R. W., Ford, C. N. Histologic and rheologic characterization of vocal fold scarring. J. Voice. 16, 96-104 (2002).
  5. Hansen, J. K., Thibeault, S. L. Current understanding and review of the literature: Vocal fold scarring. J. Voice. 20, 110-120 (2006).
  6. Pittenger, M. F., et al. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science. 284, 143-147 (1999).
  7. Hanson, S. E., et al. Characterization of Mesenchymal Stem Cells From Human Vocal Fold Fibroblasts. Laryngoscope. 120, 546-551 (2010).
  8. Tong, Z., Duncan, R. L., Jia, X. Modulating the behaviors of mesenchymal stem cells via the combination of high-frequency vibratory stimulations and fibrous scaffolds. Tissue Eng. Part A. 19, 1862-1878 (2013).
  9. Tong, Z., Sant, S., Khademhosseini, A., Jia, X. Controlling the Fibroblastic Differentiation of Mesenchymal Stem Cells Via the Combination of Fibrous Scaffolds and Connective Tissue Growth Factor. Tissue Eng. Part A. 17, 2773-2785 (2011).
  10. Jones, D. L., Wagers, A. J. No place like home: anatomy and function of the stem cell niche. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 9, DOI. 11-21 (1038).
  11. Wang, J. H., Thampatty, B. P. Mechanobiology of Adult and Stem Cells. Int. Rev. of Cell Mol. Biol. 271, 301-346 (2008).
  12. Doroski, D. M., Levenston, M. E., Temenoff, J. S. Cyclic tensile culture promotes fibroblastic differentiation of marrow stromal cells encapsulated in poly (ethylene glycol)-based hydrogels. Tissue Eng. Part A. 16, 3457-3466 (2010).
  13. Kim, B. S., Nikolovski, J., Bonadio, J., Mooney, D. J. Cyclic mechanical strain regulates the development of engineered smooth muscle tissue. Nat. Biotechnol. 17, 979-983 (1999).
  14. Webb, K., et al. Cyclic strain increases fibroblast proliferation, matrix accumulation, and elastic modulus of fibroblast-seeded polyurethane constructs. J. Biomech. 39, 1136-1144 (2006).
  15. Kim, Y. J., Sah, R. L. Y., Grodzinsky, A. J., Plaas, A. H. K., Sandy, J. D. Mechanical Regulation of Cartilage Biosynthetic Behavior - Physical Stimuli. Arch. Biochem. Biophys. 311, 1-12 (1994).
  16. Titze, I. R., et al. Design and validation of a bioreactor for engineering vocal fold tissues under combined tensile and vibrational stresses. J. Biomech. 37, 1521-1529 (2004).
  17. Kutty, J. K., Webb, K. Vibration stimulates vocal mucosa-like matrix expression by hydrogel-encapsulated fibroblasts. J. Tissue Eng. Regen. Med. 4, 62-72 (2010).
  18. Farran, A. J. E., et al. Design and Characterization of a Dynamic Vibrational Culture System. J. Tissue Eng. Regen. Med. , (2011).
  19. Reneker, D. H., Yarin, A. L. Electrospinning jets and polymer nanofibers. Polymer. 49, 2387-2425 (2008).
  20. Wang, Y., Theobald, P., Tyrer, J., Lepper, P. The application of scanning vibrometer in mapping ultrasound fields. J. Phys.: Conf. Ser. 1, 167-173 (2004).
  21. Brown, W. S., Morris, R. J., Hollien, H., Howell, E. Speaking Fundamental-Frequency Characteristics as a Function of Age and Professional. J. Voice. 5, 310-315 (1991).
  22. Ingber, D. E. Cellular mechanotransduction: putting all the pieces together again. Faseb J. 20, 811-827 (2006).
  23. Titze, I. R., et al. Design and validation of a bioreactor for engineering vocal fold tissues under combined tensile and vibrational stresses. J. Biomech. 37, 1521-1529 (2004).
  24. Moore, J., Thibeault, S. Insights Into the Role of Elastin in Vocal Fold Health and Disease. J. Voice. 26, 269-275 (2012).
  25. Thibeault, S. L., Bless, D. M., Gray, S. D. Interstitial protein alterations in rabbit vocal fold with scar. J. Voice. 17, 377-383 (2003).
  26. Branski, R. C., Verdolini, K., Sandulache, V., Rosen, C. A., Hebda, P. A. Vocal fold wound healing: A review for clinicians. J. Voice. 20, 432-442 (2006).
  27. Clark, I. A., Swingler, T. E., Sampieri, C. L., Edwards, D. R. The regulation of matrix metalloproteinases and their inhibitors. Int. J. Biochem. Cell B. 40, 1362-1378 (2008).
  28. Silver, F. H., Horvath, I., Foran, D. J. Viscoelasticity of the vessel wall: The role of collagen and elastic fibers. Crit. Rev. Biomed. Eng. 29, 279-301 (2001).
  29. Kutty, J. K., Webb, K. Tissue Engineering Therapies for the Vocal Fold Lamina Propria. Tissue Eng. Part B: Rev. 15, 249-262 (2009).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

תאי גזע מזנכימלייםגריית רעידהויברומטר לייזר דופלרפיגום PCLממברנת סיליקוןמטריצה חוץ-תאיתמכנו-טרנסדוקציהתרבית תאיםניתוח רעידות
בנייה ואפיון של Bioreactor פולד רומן וקאלי
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.