היישום של desorption זמן בסיוע מטריקס לייזר / יינון של טיסה (MALDI-TOF) ספקטרומטריית מסה (MS) ישירות למרק תרבות דם מזרז את זיהוי של חיידקים. השיטה שהוצגה היא שיטה מהירה ואמינה לזיהוי של חיידקים גראם שליליים ישירות ממרק תרבות דם.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
זיהוי מהיר של חיידקים גראם שליליים מהדם תרבות מרק שימוש MALDI-TOF המוני ספקטרומטריית
במאמר זה
סיכום
תקציר
תפקיד חשוב של המעבדה למיקרוביולוגיה הקלינית הוא לספק זיהוי מהיר של חיידקי גורמי זיהום דם. זיהוי מסורתי דורש תת התרבות של מרק תרבות הדם אותת עם זיהוי זמין רק לאחר שמושבות על אגר מוצק הבשילו. MALDI-TOF MS היא שיטה אמינה, מהירה לזיהוי של רוב החיידקים רלוונטיים מבחינה קלינית, כאשר חלים על מושבות על תקשורת מוצקה. היישום של MALDI-TOF MS ישירות למרק תרבית דם הוא גישה אטרקטיבית שכן יש פוטנציאל להאצת זיהוי מינים של חיידקים ולשפר את הניהול קליני. עם זאת, בעיה חשובה להתגבר היא ההסרה טרום הניתוח של רפים, חלבונים להתערב והמוגלובין הכלולים בדגימות דם שתרבות, אם לא יוסרו, להפריע לספקטרום MS ויכול לגרום לציון הזדהות אפליה בלתי מספיק או נמוך. בנוסף יש צורך להתרכז bacterIA לפתח ספקטרום באיכות מספקת. השיטה המוצגת מתארת את הריכוז, טיהור, והפקה של חיידקים גראם שליליים המאפשרים זיהוי המוקדם של חיידקים ממרק תרבות הדם אותת.
מבוא
חולים עם זיהום דם (BSI) עקב חיידקים ימשיכו להיות גבוהה לתמותה בבית החולים, החל 6-48% 1. המשלוח של אנטיביוטיקה אמפירית מתאימה מקדם הישרדות ובתת הקבוצה של חולים עם אלח דם חמור, כל עיכוב של שעה לטיפול מתאים בקורלציה לירידה בהישרדות 2,3. בהתאם לכך, מטרה מרכזית של המעבדה הקלינית היא לזהות במהירות, לזהות ולתקשר את נוכחותם של חיידקים בתרביות דם להודיע החלטות קליניות. זה כבר הוכיח כי יש לו את המעבדה למיקרוביולוגיה ההשפעה הגדולה ביותר על טיפול מיקרוביאלית בעת דיווח על כתם גראם 4 ולאחרונה, מחקר תצפיתי, הוכיח כי זמן desorption הלייזר בסיוע מטריקס / יינון של ספקטרומטריית מסת טיסה (MALDI-TOF MS) מבוצ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. דם תרבות Broths דגל כמו "חיובי"
- הסר את בקבוק תרבית הדם אותת מארון הדגירה ניטור הרציף ולמקם אותו לתוך ארון בטיחות ביולוגי. הערה: בקבוקים יכולים להכיל מיקרואורגניזמים מסוכנים ואמצעי זהירות אוניברסלית צריכים להיות אחריו. בשל הסיכון של אירוסולים זיהומיות בדגימה, כל הליכי הדגימה חייבים להתבצע בזרימה למינרית בטיחות ביולוגית Class II.
2. גראם הכתם מוכן
- הכן את כתם גראם ממרק ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
MALDI-TOF MS הספקטרום שנוצר הם בהשוואה למסד נתוני ההתייחסות המשולבת של ספקטרום. ציון לוגריתמים מוקצה לביטחון של המשחק בין בודד המבחן ואת מסד הנתונים ההתייחסות מבודדת, עם המלצת ≥ ציון 1.7 הנדרש לזיהוי סביר לרמת סוגים (איור 1) ו≥ 2.0 לזיהוי סביר למינים (איור 2). דווח לרמת מין כאשר ≥ הציון 1.7 ו5 ההזדהויות הראשונות מתאימים על ידי הקלדת התוכנה עולה בקנה אחד (איור 1) 12. איור 3 מדגים את התוצאה כאשר מרק תרבית.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
חשוב בעת החלת MALDI-TOF MS למרק תרבית דם שהצעדים שלאחר צנטריפוגה מבוצעים בזהירות מספקת לא לערבב את המרכיבים המופרדים. זה חשוב במיוחד כדי להסיר את מרכיבי תרבות דם וחלבונים תאיים אנושיים, כולל המוגלובין, אשר עשוי לייצר קוצים מפריעים לספקטרום MALDI-TOF.
למרות טרשת נפוצה מייצרת ממליצה לחתוך לציון של ≥ 2.0 למינים ו≥ 1.7 לזיהוי סוג, דיווחים אחרים הציעו ציונים נמוכים לוגריתמים (טווח ≥ 1.4 ל≥ 1.6) עשוי להיות מיושם כאשר ח.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| BACTEC פלוס אירובי/F בינוני | בקטון דיקינסון; BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב | 442192 | |
| BACTEC Lytic/10 אנאירובי/F בינוני | בקטון דיקינסון; BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב | 442265 | |
| BACTEC Peds Plus | בינוני בקטון דיקינסון; BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב | 442194 | |
| Vacutainer - מכשיר להעברת דם | בקטון דיקינסון; BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב | 364880 | מכשיר דגימה חד פעמי המפחית את הסיכון לפציעה של מחטים |
| Vacutainer SST 5.0 מ"ל, Advance plus | Becton Dickinson; BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב | 367954 | מזרק צינור הפרדת סרום |
| 10 מ"ל | בקטון דיקינסון; BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב | 302143 | |
| פיפטת העברה | סמקו, ארה"ב | 222-20S | |
| פיפטת העברה (קצה עדין) | סמקו, ארה"ב | 232-20S | |
| צינור מיקרוצנטריפוגה (2.0 מ"ל) | אפנדורף, המבורג, גרמניה | 0030.120.094 | |
| מים סטריליים (ללא DNA ו-RNAse) | Life Technologies, קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב | 10977-015 | |
| חומצה פורמית | סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב | F0507 | |
| תמיסת מטריקס | Bruker Daltonics, ברמן גרמניה | 285074 | 10 מ"ג/מ"ל וחומצה אלפא;-ציאנו-4-הידרוקסיצינמית, 50% אצטוניטריל, 2.5% חומצה טריפלואורואצטית |
| Benchtop microflex LT MALDI-TOF MS | Bruker Daltonics, ברמן גרמניה | תוך שימוש בתוכנת BioTyper 3.1 (Build 65) ו-FlexControl 3.3 (Build 99) |
מקורות
- Bearman, G. M., Wenzel, R. P. Bacteremias: a leading cause of death. Arch. Med. Res. 36 (6), 646-659 (2005).
- Leibovici, L., Shraga, I., Drucker, M., Konigsberger, H., Samra, Z., Pitlik, S. D. The benefit of appropriate empirical antibiotic treatment in patients with bloodstream....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
