הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

RNA Catalyst ככתב להקרנת סמים נגד RNA עריכה בtrypanosomes

8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/51712

⸱

22 ביולי 2014

 ,  , 
1Department of Biochemistry, McGill University, 2Institute of Parasitology, McGill University, 3McGill Centre for Bioinformatics, McGill University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

בדיקה רגישה ביותר מבוססת ריבוזים, הניתנת ליישום לסינון תפוקה גבוהה של כימיקלים המכוונים לתהליך הייחודי של עריכת RNA בפתוגנים טריפנוזומטים, מתוארת במאמר זה. מעכבים יכולים לשמש ככלים לניתוח מונחה השערות של תהליך עריכת ה-RNA ובסופו של דבר כטיפולים.

תקציר

התקדמות משמעותית נעשתה בקביעת המנגנון של עריכת רנ"א המיטוכונדריה בtrypanosomes. בדומה לכך, התקדמות ניכרת נעשתה בזיהוי הרכיבים של מתחם editosome כי לזרז עריכת רנ"א. עם זאת, זה עדיין לא ברור כיצד חלבונים אלו לעבוד יחד. תרכובות כימיות המתקבלות ממסך תפוקה גבוהה נגד editosome עלולות לחסום או להשפיע שלב אחד או יותר במחזור העריכה. לכן, זיהוי של תרכובות כימיות חדשות יפיק בדיקות מולקולריות רבות ערך עבור לנתח את פונקצית editosome והרכבה. במחקרים קודמים, במבחני חוץ גופית עריכה בוצעו באמצעות RNA שכותרתו רדיו. מבחני אלה הם זמן רב, לא יעיל ואינם מתאים למטרות תפוקה גבוהה. כאן, המבוסס על הקרינה הומוגני "לערבב ולמדוד" פטיש ribozyme במבחנה assay כתב לפקח על עריכת רנ"א, מוצג. רק כתוצאה של עריכת RNA שלribozyme פטיש מצע oligoribonucleotide תהודה העברת אנרגיית הקרינה (סריג) עובר מחשוף. זה בתורו גורם להפרדה של fluorophore מהמרווה ובכך לייצר אות. לעומת זאת, כאשר פונקצית editosome היא עצורה, אות הקרינה תהיה הרווה. זה assay רגיש והפשוט ביותר שצריכה להיות באופן כללי החלים על לפקח בעריכת RNA חוץ גופית או הקרנת תפוקה גבוהה של כימיקלים שיכולים לעכב את פונקצית editosome.

מבוא

תהליך עריכת רנ"א, שינוי mRNA לאחר תעתיק, התגלה לראשונה בtrypanosomatids 1. מאז, עבודה משמעותית כבר נערכה בלומדת את המנגנון עומד מאחורי עריכת רנ"א בTrypanosoma brucei 2,3. בסדרה של תגובות אנזימטיות, editosome, מורכב ליבה של כ 20 חלבונים, יוצר mRNAs המיטוכונדריה הבוגר לרכיבים מרובים של מערכת זרחון חמצוני להפקת אנרגיה. סדר אירועי קטליטי הוא מחשוף endonucleolytic, uridylate בנוסף (U) או מחיקה, וקשירה, כפי שהוכתב על ידי RNAs מדריך (gRNAs) 4.

בנוסף לחלבוני editosome המורכבים הליבה, מספר גורמי אבזר יש גם זוהה 5-7. חלבונים אלה נראים בעיקר מקובצים במתחמים עצמאיים. עם זאת, את סדר ההרכבה חלבון במתחם editosome הליבה ודפוסי האינטראקציה של מתחם הליבה עם האבזרמתחמים הם עדיין לא נקבעו. מיקוד תהליך עריכת רנ"א בtrypanosomatids עשויה לספק dissectors הכימי המסייעים בלימוד ההרכבה והתפקוד של מתחם editosome. יתר על כן, מחקרים תפקודיים בכמה חלבוני editosome הראו חיוניות פני שלבי חיים שונים, המצביע על הפוטנציאל שלהם כתרופת מטרות 8-12. לכן, מעכבים מצאו של editosome יכולים גם לפעול כתרכובות עופרת נגד trypanosomatids. זה זמן, כמו תרופות הקיימות כיום נגד מחלות הנגרמות על ידי trypanosomatid הן רעילות, לא יעילות ויקרות 13,14.

Assay יעיל ונוח במבחנה יש צורך לחקור את היקום הכימי למעכבים ספציפיים שחוסמים עריכת רנ"א. שלושה מבחני פותחו ומשמשים לניטור פעילות editosome: (א) עגול מלאה בassay עריכת רנ"א המבחנה 15, (ב) לפני שהבקיע בassay עריכת רנ"א המבחנה 16,17,nd (ג) ribozyme פטיש (HHR) מבוסס assay 18. שני מבחני הראשונים מסתמכים על הדמיה ישירה של המוצר בעריכה (ATPase 6 mRNA) עם העזרה של קרינה רדיואקטיבית. Assay מבוסס HHR משתמש בגרסה שונה של mRNA ATPase 6 שהוא מודל להתנהג כribozyme על עריכה. Ribozyme הפונקציונלי אז דווקא דבק מצע RNA רדיואקטיבי, המשרת ככתב. לאחרונה, Moshiri et al. פיתח 'לערבב ולמדוד "מבוסס HHR בassay כתב מבחנה כדי לפקח על עריכת RNA שבו מצע RNA רדיואקטיבי מוחלף בהעברת תהודה הקרינה אנרגיה (סריג) מצע 19. יתרונות העיקרון של assay זה הם: (א) זה הוא שילוב מהיר ונוח וסוג המידה של assay, כמו הייצור של ribozyme הפעיל ומחשוף מצע מתרחש בו זמנית באותו הצינור בנפח נמוך (כלומר 20 μl), (ב רגישות) זה ימנע את השימוש בחומרים שכותרתו רדיואקטיבית, (ג) שהואfforded ידי מכשור הקרינה בפורמט צלחת מייקר כייל, ואות גבוהה יחס רעש (ד). שימוש assay זה, ההשפעה של מעכבים ידועים RNA עריכת האנזים נגד editosome מטוהר אושרה 19. ניסוי זה תוקף את assay לזיהוי מהיר של מעכבי עריכת רנ"א, בעיקר נגד editosomes השלם מט brucei.

איור 1 הוא סכמטי צעד אחר צעד מפורט של בassay עריכת רנ"א מבחנה הקרינה מבוסס. פרוטוקול זה יכול לשמש לניטור עריכת RNA במבחנה או בקלות להיות מותאם להקרנת ספריות מתחם של קני מידה שונות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הפרוטוקול שלהלן מתאר את ההליך לביצוע assay עריכת RNA המבוסס על הקרינה. Assay יכול להתבצע בצינור PCR יחיד, 96 היטב, או צלחות תלוי בהיקף של הניסוי 384 גם. בהמשך לכך אות הקרינה ניתן לקרוא במערכת איתור PCR בזמן אמת מתאימה. Assay כאן מתואר בהקשר של צלחות 384 גם.

1. Culturing ט תאי brucei

  1. הכן את מדיום גידול לט brucei procyclic תאי טופס. עבור 1 ליטר של מדיום:
    1. לפזר אבקת SDM-79 25.4 גרם במי 800 מיליליטר miliQ.
    2. הוסף 2 גרם של NaHCO 3 וה-pH ל 7.3 עם 10 M NaOH.
    3. מוסיף מים nanopure לנפח סופי של 900 מיליליטר, לסנן לעקר.
    4. להוסיף סרום שור עוברי (FBS), פתרון וhemin (2.5 מ"ג / מיליליטר) פניצילין, סטרפטומיצין לריכוזים סופיים של 10% (V / V), 100 U / ml ו7.5 מ"ג / ליטר בהתאמה.
  2. לגדול 300 מיליליטר של ט סוג 1.7A brucei פראי (טופס procyclic) תאים ב28 ° C, רועד בסל"ד 70 לצפיפות של 1.5 x 10 7 תאים / מיליליטר. הערה: זה אמור לייצר 3 מיליליטר של editosome הפעיל עם ~ 0.5 מ"ג של חלבון סך הכל, מספיק ל600 תגובות עריכה.
  3. קציר התאים על ידי צנטריפוגה ב6,000 XG 10 דקות ב 4 ° C.
  4. שטוף את הכדור עם 50 מיליליטר של חיץ PBSG המקורר (10 מ"מ Na 2 HPO 4, 10 מ"מ אא 2 PO 4, 145 mM NaCl, ו6 גלוקוז מ"מ), וספין למטה התאים שוב על ידי צנטריפוגה ב 10,000 XG 10 דקות ב 4 ° C.

2. בידוד של גולמי המיטוכונדריה

הערה: יש לבצע את כל הצעדים על קרח או על 4 מעלות צלזיוס לשמר editosome פעילות.

  1. Resuspend התאים שנקטפו ב30 מיליליטר של חיץ DTE (1 מ"מ טריס-HCl pH 8.0 ו1 mM EDTA). השתמש homogenizer 40 מיליליטר סטרילי Dounce (טרום צונן) לשבש את קרום התא על ידי מלטף את מעלה ומטה לפחות 10 פעמים על קרח.
  2. מייד להוסיף סוכרוז 4.3 מיליליטר של 60% (w / v, כלומר 1.75 ז) לhomogenate לריכוז סופי של 0.25 מ צנטריפוגה ב XG 15,800 עבור 10 דקות ב 4 ° C, כדי להפיל מעדיף מיטוכונדריה.
  3. Resuspend את כדור המיטוכונדריה ב4.6 מיליליטר של חיץ STM (20 מ"מ טריס-HCl pH 8.0, 250 סוכרוז מ"מ ו 2 מ"מ MgCl 2). הוספת 13.8 μl של 0.1 M CaCl 2 ו -4 μl של DNase RNase ללא לריכוזים סופיים של 0.3 מ"מ ו -9 U / ml, בהתאמה. דגירה את התערובת במשך שעה 1 על קרח.
  4. הוספת 4.6 מיליליטר של חיץ STE (20 מ"מ טריס-HCl pH 8.0, סוכרוז 250 מ"מ ו2 mM EDTA) כדי להשבית DNase I. צנטריפוגה ב XG 15,800 עבור 10 דקות ב 4 ° C.
  5. Resuspend את הכדור ב400 μl של חיץ תמוגה (10 מ"מ טריס-HCl pH 7.2, 10 מ"מ MgCl 2, 100 מ"מ KCl, 1 מיקרוגרם / מיליליטר pepstatin, 1 מ"מ DTT, ומעכבי פרוטאז 1x שלמים ללא EDTA) והעברה ל צינור microfuge.
  6. הוסף 10% טריטון X-100 לריכוז סופי של 1% nd דגירה lysate ל15 דקות ב 4 ° C על הכתף צינור.
  7. נקה את lysate המיטוכונדריה על ידי צנטריפוגה פעמיים ב17,000 XG במשך 15 דקות ב 4 ° C; שמירה על supernatant פינה בכל פעם.

3. Editosome טיהור

  1. יוצקים 10 מיליליטר 10% -30% (v / v) גליצרול שיפוע ליניארי (טבלה 1) בצינור ultracentrifuge באמצעות חיץ שיפוע 2x hhe (40 HEPES מ"מ pH 7.9, 20 מ"מ Mg (OAC) 2, 100 מ"מ KCl, ו 2 mM EDTA) ומכונת שיפוע על ידי ביצוע הוראות במדריך.
  2. מוציא בזהירות 500 μl של פתרון מהחלק העליון של שיפוע גליצרול ועדינות לטעון 500 μl של lysate המיטוכונדריה פינה. ספין על 178,000 XG במשך 6 שעות על 4 מעלות צלזיוס באמצעות ultracentrifuge.
  3. לאסוף 500 שברים μl ברצף מהחלק העליון לחלק התחתון של השיפוע ב 4 ° C. לאחר מכן הצמדתי להקפיא את השברים באמצעות חנקן נוזל חנות ב -80 ° C עד שימוש.

s = "jove_title"> 4. RNA הכנה

  1. לחשל את תבנית ה-DNA המתאימה המכילה רצף משלים רצף אמרגן T7 (טבלה 2) עם oligonucleotide אמרגן T7 (5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3 ") ביחס טוחנת 1:01 על ידי חימום ב90 מעלות צלזיוס במשך 3 דקות וקירור ב RT לפחות 10 דקות.
  2. לתמלל RNA באמצעות ערכת שעתוק במבחנה על ידי ביצוע הוראות במדריך.
  3. עצור את תגובת השעתוק על ידי הוספת נפח שווה של 7 M צבע אוריאה (שתנן 7 M, 0.05% Cynol קסילן, ו0.05% bromophenol כחולים). לרוץ על מסנן מעוקר 9% denaturing ג'ל polyacrylamide (acrylamide 9%, 7 M אוריאה, 1x TBE).
  4. השתמש בהצללת אולטרה סגול (UV) עם מנורת UV בגלים קצרים כדי לאתר וRNA בהתאמה בלו. מניחים את חתיכת ג'ל נכרתה בצינור microfuge ולהוסיף 400 μl של חיץ elution ג'ל (20 מ"מ טריס-HCl pH 7.5, 250 מ"מ NaOAc, 1 mM EDTA ו0.25% SDS). Elute הלילה בשעה RT על הכתף צינור.
  5. Precipitate RNA eluted על ידי הוספת 1 מיליליטר של אתנול 100% קרים ודוגר גם ב-80 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות או -20 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
  6. צנטריפוגה ב XG 16,000 ל30 דקות ב 4 ° C, כדי גלולה למטה RNA.
  7. שטוף את הכדור עם 1 מיליליטר של 75% אתנול. צנטריפוגה ב XG 16,000 עבור 20 דקות ב 4 ° C.
  8. Resuspend את כדור RNA כראוי במי RNase ללא כדי להשיג את הריכוזים הרצויים, כפי שמוצג בטבלה 2.

5. Assay RNA עריכת הקרינה מבוססת

  1. לתגובה אחת, לשלב pmol 1 (μl 1) של preA6Rbz ו2.5 pmol (μl 1) של gA6Rbz (יחס טוחנת 1:2.5) בצינור microfuge, לדגור על 70 מעלות צלזיוס במשך 3 דקות ולתת לו לשבת על RT במשך שעה לפחות 10 דקות.
  2. בינתיים מכין תערובת הורים באמצעות טבלה 3, ללא preA6Rbz וgA6Rbz, לתגובת העריכה המכילה חיץ 1x hhe (25 HEPES מ"מ pH 7.9, 10 מ"מ Mg (OAC) 2, 50 מ"מ KCl ו10 mM EDTA), 1 מ"מה-ATP, 5 מ"מ CaCl 2, 16 ng / μl של RNA Torula שמרים, 0.1% טריטון X-100, וeditosome המטוהרים.
  3. הוספת preA6Rbz annealed וgA6Rbz כדי להשלים את מיקס מאסטר.
  4. לוותר 18 μl של מיקס מאסטר (לוח 3) לתוך בארות המכילות גם 2 μl מים RNase חינם (בארות ללא תרכובות) או 2 μl של 200 תרכובות כימיות מיקרומטר וכולל דגימות שליטה בצלחת על פי איור 5.
  5. חותם את הצלחת עם אוטם צלחת ומסובב את הצלחת, כדי להסיר כל בועות אוויר. לדגור על C ° 28 במשך 4 שעות.
  6. הוסף 25 pmol (2 μl) של המתחרה gA6Rbz היטב כל אחד. הנח אוטם טרי, לסובב את הצלחת ומניח אותו על מכונה ה-PCR בזמן אמת. לתכנת את הניסוי הבא:
    שלב 1: 85 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות; שלב 2: 24 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות; שלב 3: להפסיק.
  7. הוסף 15 pmol (μl 1) של מצע סריג היטב כל אחד לנפח סופי של μl 23. חותם את הצלחת עם אוטם טרי.מהירות לסובב את הצלחת ומניח אותה בחזרה במכונה ה-PCR בזמן אמת.
  8. תכנית ניסוי חדש בשלבים הבאים:
    שלב 1: 37 מעלות צלזיוס במשך 1 דקות; שלב 2: קראו; שלב 3: עבור לשלב 1, 40 פעמים; שלב 4: להפסיק.
  9. התקנת הצלחת על ידי בחירת כל הבארות הדורשות קריאה ולבחור את מסנן FAM. קלט נפח כמו 23 μl ולהתחיל לרוץ.
  10. לחשב את השיפוע של הערכים המתקבלים מכל טוב / מדגם להשיג מדידה קינטית על ידי התוויית המדרונות על גרף עמודות לצורך הניתוח. הערה: קריאה הקינטית משפרת את יחס אות לרעש בין המדגם והרקע; כמדגם הרקע יהיה מדרון קרוב לאפס. יש קריאת נקודת סיום רעש רקע גבוה יותר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כדי להדגים הנדרשים להקמת מסך בקנה מידה גדולה בכל הצעדים הדרושים, איורים 2-5 הם ניסויי שליטת נציג הקשורים לאיכות של assay. אלה הם ניסויי שליטה חיוניים לassay עקבי על פני כמה ימים של הקרנה או להשוואה בין מסכים שונה.

הערכת יחס אות לרעש הקרינה

על מנת להבטיח את היציבות והאיכות של מצע oligoribonucleotide שכותרתו והעמס...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

שיטת הקרנת תפוקה גבוהה רומן לזהות מעכבים נגד מורכב עריכת RNA של trypanosomes הוצגה, מתן כלי חדש לגילוי תרופות נגד מחלות הנגרמות על ידי trypanosomatids. assay ribozyme מבוסס סריג כבר נעשה שימוש נרחב למטרות שונות 20-22; עם זאת, יש לנו מנוצלים הקיבולת של assay ribozyme מבוסס סריג לניטור במבחנה של פעילות עריכת רנ"א 19. assay זה עלול להיות מותאם לסוגים אחרים של עריכת רנ"א באאוקריוטים, כגון עריכת החלפת נוקלאוטיד של RNAs קידוד גרעין של יונקים

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

Najmeh Nikpour ו-Fiona Alum סיפקו הצעות וערכו את כתב היד הזה. המחלקה לביוכימיה באוניברסיטת מקגיל תמכה ב-HM וב-VM עם יוזמת ההכשרה של CIHR בביולוגיה כימית. עבודה זו נתמכה על ידי מענק המכון הקנדי לחקר הבריאות (CIHR) 119464 (ל-R. S.).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
SDM-79ג'יבקו בינוני של Life Technologies
סרום בקר עובריLife Technologies12483-020השבתת חום ב-55 & #176; C למשך שעה
אחת Hemin, מינימום 80%SigmaH5533-10G
Penicillin-Streptomycin SollutionFisher ScientificMT-30-002-CI
Dnase 1 רקומביננטי, ללא Rnase רוש4716728001
T7 ריבומקס אקספרס גדול  מערכת ייצור RNA  מערכת ייצורPromegaP1320
Kimble Kontes Dounce מטחנות רקמות   פישר סיינטיפיקK885300-0040   
Gradient Master, ver 5.25 Biocomp107-201M
שפופרת אולטרה שקופה, 13.2 מ"לבקמן קולטר344059
אופטימה L-100XP  אולטרה-צנטריפוגה בקמן קולטר392052
SW 41 Ti רוטורבקמן קולטר331336
חותם MicroSeal 'B', אטמיםBioradMSB1001
CFX 384 מגע מערכת זיהוי PCR בזמן אמתBiorad185-5484
תמיסת אקריל/ביס (19:1), 40% (w/v)Bio BasicA0006-500ML
אוריאה, דרגת ביולוגיה מולקולרית, 1 ק"גלייף טכנולוג'יזAM9902

מקורות

  1. Benne, R., et al. transcript of the frameshifted coxII gene from trypanosome mitochondria contains four nucleotides that are not encoded in the DNA. Cell. 46, 819-826 (1986).
  2. Hajduk, S., Ochsenreiter, T. RNA editing in kinetoplastids. RNA biology. 7, 229-236 (2010).
  3. Aphasizhev, R., Aphasizheva, I. Uridine insertion/deletion editing in trypanosomes: a playground for RNA-guided information transfer. Wiley interdisciplinary reviews RNA. 2, 669-685 (2011).
  4. Seiwert, S. D., Stuart, K. RNA editing: transfer of genetic information from gRNA to precursor mRNA in vitro. Science. 266, 114-117 (1994).
  5. Weng, J., et al. Guide RNA-binding complex from mitochondria of trypanosomatids. Molecular. 32, 198-209 (2008).
  6. Hashimi, H., Zikova, A., Panigrahi, A. K., Stuart, K. D., Lukes, J. TbRGG1, an essential protein involved in kinetoplastid RNA metabolism that is associated with a novel multiprotein complex. RNA. 14, 970-980 (2008).
  7. Ammerman, M. L., et al. Architecture of the trypanosome RNA editing accessory complex, MRB1. Nucleic Acids Res. 40, 5637-5650 (2012).
  8. Huang, C. E., O'Hearn, S. F., Sollner-Webb, B. Assembly and function of the RNA editing complex in Trypanosoma brucei requires band III protein. Molecular and cellular biology. 22, 3194-3203 (2002).
  9. Carnes, J., Trotter, J. R., Peltan, A., Fleck, M., Stuart, K. RNA editing in Trypanosoma brucei requires three different editosomes. Molecular and cellular biology. 28, 122-130 (2008).
  10. Hearn, S. F., Huang, C. E., Hemann, M., Zhelonkina, A., Sollner-Webb, B. Trypanosoma brucei RNA editing complex: band II is structurally critical and maintains band V ligase, which is nonessential. Molecular and cellular biology. 23, 7909-7919 (2003).
  11. Schnaufer, A., et al. An RNA ligase essential for RNA editing and survival of the bloodstream form of Trypanosoma brucei. Science. 291, 2159-2162 (2001).
  12. Tarun, S. Z., et al. KREPA6 is an RNA-binding protein essential for editosome integrity and survival of Trypanosoma brucei. RNA. 14, 347-358 (2008).
  13. Croft, S. L., Barrett, M. P., Urbina, J. A. Chemotherapy of trypanosomiases and leishmaniasis. Trends in parasitology. 21, 508-512 (2005).
  14. Denise, H., Barrett, M. P. Uptake and mode of action of drugs used against sleeping sickness. Biochemical pharmacology. 61, 1-5 (2001).
  15. Seiwert, S. D., Heidmann, S., Stuart, K. Direct visualization of uridylate deletion in vitro suggests a mechanism for kinetoplastid RNA editing. Cell. 84, 831-841 (1996).
  16. Igo, R. P., Palazzo, S. S., Burgess, M. L., Panigrahi, A. K., Stuart, K. Uridylate addition and RNA ligation contribute to the specificity of kinetoplastid insertion RNA editing. Molecular and cellular biology. 20, 8447-8457 (2000).
  17. Igo, R. P. Jr, et al. Role of uridylate-specific exoribonuclease activity in Trypanosoma brucei RNA editing. Eukaryotic cell. 1, 112-118 (2002).
  18. Wang, B., Salavati, R., Heidmann, S., Stuart, K. A hammerhead ribozyme substrate and reporter for in vitro kinetoplastid RNA editing. RNA. 8, 548-554 (2002).
  19. Moshiri, H., Salavati, R. A fluorescence-based reporter substrate for monitoring RNA editing in trypanosomatid pathogens. Nucleic Acids Res. 38, e138(2010).
  20. Jenne, A., et al. Rapid identification and characterization of hammerhead-ribozyme inhibitors using fluorescence-based technology. Nature. 19, 56-61 (2001).
  21. Hartig, J. S., et al. Protein-dependent ribozymes report molecular interactions in real time. Nature. 20, 717-722 (2002).
  22. Famulok, M. Allosteric aptamers and aptazymes as probes for screening approaches. Current opinion in molecular therapeutics. 7, 137-143 (2005).
  23. Teng, B., Burant, C. F., Davidson, N. O. Molecular cloning of an apolipoprotein B messenger RNA editing protein. Science. 260, 1816-1819 (1993).
  24. Jurica, M. S. Searching for a wrench to throw into the splicing machine. Nature chemical biology. 4, 3-6 (2008).
  25. Spahn, C., Prescott, C. Throwing a spanner in the works: antibiotics and the translation apparatus. Journal of molecular medicine. 74, 423-439 (1996).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

אדיטוזום של טריפנוסומהסריקה בשפיעות גבוההמבחן דגמי פלואורסצנציהריבואזים מסוג Hammerheadסובסטרט FRETעריכת RNA מיטוכונדריאליתמבחן במבחנה (In Vitro)מעכבי עריכת RNAמדרג גליקרול
RNA Catalyst ככתב להקרנת סמים נגד RNA עריכה בtrypanosomes
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.