מאמר שיטה

Biochip אלקטרוכימי מבוסס Microfluidic לניתוח הכלאה DNA ללא תווית

DOI:

10.3791/51797

⸱

10 בספטמבר 2014

 ,  ,  ,  , 
1MEMS Sensors and Actuators Laboratory (MSAL), Department of Electrical and Computer Engineering, Institute for Systems Research, University of Maryland, 2Institute for Bioscience and Biotechnology Research, Fischell Department of Bioengineering, University of Maryland

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מציגים biochip אלקטרוכימיים המבוסס על microfluidic לגילוי הכלאת DNA. בעקבות functionalization הבדיקה ssDNA, הסגוליות, הרגישות, וגבול הגילוי נלמדים ביעדי ssDNA משלימים ולא משלימים. תוצאות ממחישות את השפעתם של אירועי הכלאת DNA על מערכת אלקטרוכימיים, עם גבול גילוי של 3.8 ננומטר.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מזעור של נהלים המעבדתיים אנליטיים למייקרו בקנה המידה מספק יתרונות משמעותיים בכל הקשור לזמן תגובה, עלות, ושילוב של מדרגות עיבוד מראש. ניצול מכשירים אלה לקראת הניתוח של אירועי הכלאת DNA הוא חשוב משום שהיא מציעה טכנולוגיה להערכה בזמן אמת של סמנים ביולוגיים בנקודה של הטיפול למחלות שונות. עם זאת, כאשר טביעת רגל המכשיר מפחיתה את הדומיננטיות של עליות תופעות פיסיקליות שונות. תופעות אלה משפיעים על דיוק הייצור ואמינות תפעול של המכשיר. לכן, יש צורך גדול כדי להמציא באופן מדויק והפעלת מכשירים אלו באופן לשעתק על מנת לשפר את הביצועים הכוללים. כאן, אנו מתארים את הפרוטוקולים ושיטות המשמשות לייצור והתפעול של biochip אלקטרוכימיים המבוסס על microfluidic לניתוח מדויק של אירועי הכלאת DNA. Biochip מורכב משני חלקים: שבב microfluidic עםשלושה מיקרו ערוצים מקבילים עשויים polydimethylsiloxane (PDMS), ו3 x 3 מיקרו שבב אלקטרוכימיים ערוך. אירועי הכלאת DNA מזוהים באמצעות ניתוח אלקטרוכימיים ספקטרוסקופיה עכבה (EIS). ניתוח EIS מאפשר וריאציות ניטור של המאפיינים של המערכת אלקטרוכימיים כי הם דומיננטיים בקני מידת אורך אלה. עם היכולת לעקוב אחר שינויים של שתי העברת המטען והתנגדות diffusional עם biosensor, אנחנו מדגימים את הסלקטיביות למטרות ssDNA משלימות, גבול גילוי מחושב של 3.8 ננומטר, ו13% תגובתיות צולבת עם ssDNA שאינו משלימים אחרים הבא 20 דקות של דגירה. מתודולוגיה זו יכולה לשפר את הביצועים של מכשירים ממוזערים על ידי הבהרה על ההתנהגות של דיפוזיה במשטר מיקרו בקנה מידה ועל ידי הפעלת המחקר של אירועי הכלאת DNA.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מעבדה על שבב microfluidic מכשירים (LOC) מספקים יתרונות רבים באבחון קליני, ניטור סביבתי ומחקר ביו. התקנים אלה לנצל ערוצי microfluidic לשלוט זרימת נוזל לאזורים של השבב שבו מגוון רחב של נהלים יכול להתקיים כולל ערבוב מגיב, זיקה מבוססת מחייב, הולכים אותות, ותא culturing 1-4. מיקרופלואידיקה מספקת יתרונות רבים על פני כלי אבחון קליניים קונבנציונליים כגון קוראי צלחת microwell או מבחני משמרת ג'ל electrophoretic. מכשירי microfluidic דורשים 2 עד 3 סדרי הגודל (nanoliters בניגוד למיקרוליטר) פחות חומרים כימיים לביצוע מבחני דומים. כמו כן, מכשירים אלה יכולים להגדיל את המהירות שבה כמה אירועים ביולוגיים להתרחש עקב הכליאה קטנה יותר של המינים בתוך הערוצים 5,6. שלישית, ניתן לשלב חיישנים בתוך המכשירים microfluidic תוך שימוש בטכניקות ליתוגרפיה ותחריט, אשר יכול לספק detectio ללא תוויתn. לבסוף, התקנים אלה הם זולים לייצור ודורש קצת עבודה על החלק של הטכנאי לפעול 7-10.

זיהוי ללא תווית בדרך כלל מתבצע באמצעות מתמר אופטי או חשמלי. מכשירים אופטיים יכולים להציג ביצועים טובים יותר חישה עקב הפרעה נמוכה יותר עם analytes במדגם. עם זאת, הביצועים שלהם נפגעת במקרים בהם הרקע של המדגם יש את אותו אורך גל מהדהד כמו החיישן 11. ישנם יתרונות רבים לשימוש באותות חשמליים כדי לבצע זיהוי ביולוגי וכימי במערכות microfluidic. הייצור הוא מטבעו פחות מסובך מאז חיישנים אלה בדרך כלל דורשים רק אלקטרודות בדוגמת לפעול. בנוסף, אותות חשמליים יכולים להיות ממשק ישיר עם ציוד המדידה ביותר, תוך שיטות אות מסוימות עשויות לדרוש מתמר להמיר את האות 12-15. חיישנים חשמליים נפוצים למדוד שינויים בimpedancפעילות הדואר 16,17, קיבול 18, או חיזור 19. עם זאת, אתגרים חדשים מוצגים כמערכות אלה ממוזערים. האתגרים החשובים ביותר להתגבר כוללים: הכנת מדגם וערבוב של נוזלים (עקב נמוך נפח הדגימה ומספר ריינולדס), השפעות פיזיות וכימיות (כולל כוחות נימים, חספוס פני השטח, אינטראקציות כימיות בין חומרי הבנייה וanalytes), איתות נמוכה יחס לרעש (המיוצר על ידי האזור המופחת פני השטח ונפח) 20-23, והפרעה אפשרית מanalytes אלקטרו הפעיל בדגימות מורכבות ביולוגיות (למשל, דם ורוק). חקירה נוספת של תופעות אלה תגרום להנחיות לייצור ותפעול מדויקים של מכשירים אלה באופן לשחזור שישפרו על הביצועים הכוללים שלהם.

זיהוי הכלאת DNA נעשה שימוש נרחב כדי לאבחן הפרעות גנטיות 24,25 וצורות שונות של cancאה 26. בכל שנה, זנים רבים של שפעת מזוהות בחולים באמצעות תוצאות של טכניקות הכלאת DNA 27. נגיף שפעת חשבונות לבד עבור 36,000 מקרי מוות בכל שנה בארצות הברית 28. דוגמאות כאלה יכולות להפיק תועלת ממכשיר microfluidic ספסל העליון שיכול לבצע את אותן טכניקות assay כassay משמרת צלחת קורא או ג'ל עם נמוך נפח דגימה ובכל חלק של העלות מבלי להקריב את רגישות או סגוליות. בשל יתרונות הרבים של חישה אלקטרוכימיים ללא תווית, זה כבר בשימוש נרחב לגילוי של אירועי הכלאת DNA 29,30. התקנה שבו אלקטרודות מאקרו בקנה מידה (בטווח של מילימטר) טבולות בכוסות עם הפתרון של עניין יכול לשמש כדי לספק נתונים רגישים מאוד בנוגע לקינטיקה מחייבת של רצפי DNA חד גדילים לרצפים המשלימים ההתאמה שלהם. לאחרונה, יש כבר כמה התקדמות בשילוב חישה אלקטרוכימיים בMICRofluidics להכלאת DNA. מחקרים שבוצעו לגבי קינטיקה הכלאה יום 31 ובאינטגרציה של חיישנים לגילוי 15 בערוצי microfluidic. עם זאת, עדיין קיים צורך במכשיר מהיר תפוקה גבוהה microfluidic שיכול לנתח אירועי הכלאת DNA במקביל ללא צעדי הכנת מדגם מסובכים.

המכשיר שהוצג בעבודה זו מספק פלטפורמה שמאפשרת לאינטראקציות מרובות כדי להיות מוקרנים במקביל וללא צעדי הכנת מדגם מסובכים. הפרוטוקול שלנו מציג כיצד microfluidic מבוסס שבבים אלקטרוכימיים הם microfabricated עם מערכות מיקרו אלקטרו טכנולוגיה (MEMS) 32,33. אנו מתארים את תהליך הייצור של שני השבב microfluidic, עשוי polydimethylsiloxane (PDMS), והשבב אלקטרוכימיים, מורכב ממערך של אלקטרודות. Functionalization הכימי של biochip עם בדיקות ssDNA הוא התייחס גם. לבסוף, אבילity של biosensor כדי לזהות באופן ספציפי ולנתח מטרות ssDNA בא לידי ביטוי. בסך הכל, biochip אלקטרוכימיים המבוסס על microfluidic הוא טכניקה מהירה וניתוח תפוקה גבוהה. זה יכול לשמש כדי לחקור אינטראקציות בין מולקולות ביולוגיות ומתמר ביצוע, ויכול להיות מנוצל במגוון רחב של יישומי מעבדה על שבב.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

.1 Microfabrication של השבב microfluidic

  1. הכן צ'יפ אלקטרוכימי
    1. תבנית זהב אלקטרודות
      1. יש לשטוף את רקיק ריק 4 '' סיליקון (איכות כיתה ראש) עם אצטון, מתנול, וisopropanol ("עמי" נקי). יש לשטוף את isopropanol מהרקיק במים ללא יונים (DI) ואחריו על ידי ייבוש עם N 2 אקדח.
      2. לגדול שכבת 1 מיקרומטר עבה SiO 2 פסיבציה עם אדים כימיים בתצהיר משופר פלזמה כלי (PECVD). להפקיד רובד 200 עבה של כרום ואחריו שכבת 2,000 עבה של זהב עם כלי המקרטעת DC.
      3. photoresist החיובי (פרמטרים ספינינג: 3,000 סל"ד, 1,000 סל"ד / sec, 30 שניות) ספין "PR1" כדי ליצור סרט אחיד ~ 1.6 מיקרומטר עבה. טרום לאפות את הרקיק 1 דקות ב100 ° C על פלטה חשמלית.
      4. לחשוף את הרקיק עם 190 mJ / 2 סנטימטר באורך גל nm 405 דרך photomask. לפתח את הרקיק ל30 שניות ב352 developer ולשטוף את הרקיק עם DI ויבש עם N 2 אקדח.
      5. לחרוט זהב עם etchant זהב ל1.5 דקות. לחרוט הכרום עם etchant כרום ל~ 30 שניות. יש לשטוף את הרקיק עם DI ויבש עם N 2 אקדח.
      6. להפשיט photoresist עם נוהל "עמי" נקי.
        הערה: מחמצן חזק ונפיץ.
      7. נקה את הרקיק עם 4: 1 H 2 SO 4: H 2 O 2 תערובת (נקייה "פיראנה") 1 דקות. יש לשטוף את הרקיק עם DI ויבש עם N 2 אקדח.
    2. תבנית אלקטרודות פלטינה
      1. photoresist החיובי (פרמטרים ספינינג: 3,000 סל"ד, 1,000 סל"ד / sec, 30 שניות) ספין "PR2" כדי ליצור סרט אחיד ~ 1.4 מיקרומטר עבה. טרום לאפות את הרקיק 1 דקות ב100 ° C על פלטה חשמלית.
      2. לחשוף את הרקיק עם 30 mJ / 2 סנטימטר באורך גל nm 405 דרך photomask. אופים את פרוסות ל45 שניות ב125 ° C על פלטה חשמלית. מבול לחשוףהרקיק עם 1,000 mJ / 2 סנטימטר ב405 אורך גל בלי photomask. לפתח את הרקיק למשך 2 דקות ב6: יזם AZ400K 1 ולשטוף את הרקיק עם DI ויבש עם N 2 אקדח.
      3. להפקיד רובד 400 עבה של טיטניום ואחריו שכבה עבה 1,600 Å של פלטינה באמצעות מערכת אידוי E-קורה.
      4. הרם את photoresist באמבטית אצטון ultrasonicated למשך 5 דקות ואחריו שטיפה עם אצטון וisopropanol. יש לשטוף את הרקיק עם DI ויבש עם N 2 אקדח.
  2. הכן ערוצי Assay
    1. הכן עובש לערוצי Assay
      1. יש לשטוף את רקיק ריק 4 '' סיליקון (איכות כיתה מבחן) עם נוהל "עמי" נקי. יש לשטוף את isopropanol מהרקיק עם DI ואחרי ייבוש עם N 2 אקדח.
      2. photoresist השלילי (פרמטרים ספין "PR3" 2-צעד ספינינג:. צעד אחד - 600 סל"ד, 120 סל"ד / sec, 10 שניות שלב שני - 1,150 סל"ד, 383 סל"ד / sec,27 שניות) כדי ליצור סרט אחיד ~ 100 מיקרומטר עבה. טרום לאפות את הרקיק על פלטה (פרמטרים אפייה 2 שלבים:. צעד אחד - כבש את מטמפרטורת חדר עד 65 מעלות צלזיוס ב300 ° C / שעה ולהחזיק טמפרטורה עבור 10 דקות שלב 2 - רמפה עד 95 מעלות צלזיוס ב300 ° C / שעה וטמפרטורת אחיזה ל30 דקות).
      3. לחשוף את הרקיק עם 2,500 mJ / 2 סנטימטר באורך גל nm 405 דרך photomask. פוסט לאפות את הרקיק על ידי ramping עד 95 מעלות צלזיוס ב300 ° C / שעה ולהחזיק טמפרטורה עבור 10 דקות על פלטה חשמלית. לפתח את הרקיק עבור 10 דקות בפרופילן גליקול Monomethyl Ether אצטט מפתח (PGMEA). יש לשטוף את הרקיק עם isopropanol ויבש עם N אקדח 2.
    2. לפברק ערוצי Assay
      1. הכן 10: polydimethylsiloxane 1 (PDMS) תערובת (20 גרם של אלסטומר, 2 גרם של סוכן ריפוי) ודגה לחלוטין בתא ואקום עבור 20 דקות.
      2. להגדיר מתחם סביב רקיק התבנית עם רדיד אלומיניום ויוצקים באיטיות PDMS הדפוקעל העובש.
      3. אופים את התבנית עם PDMS בתנור תיבה (פרמטרים אפייה 2 שלבים:. צעד אחד - 5 דקות כבש את מטמפרטורת חדר ל80 ° C שלב 2 - להחזיק ב80 מעלות צלזיוס למשך 17 דקות).
      4. לקלף PDMS מהתבנית ומניחים על נייר אלומיניום. חותך את שבבי assay עם סכין מנתח, להגדיר חורים עם כלי חבטות ביופסיה.

.2 להרכיב את המכשיר

  1. ידני ליישר את ערוצי assay PDMS עם אלקטרודות עובדות על השבב אלקטרוכימיים. PDMS מקלות גם לשבב אלקטרוכימיים, איטום הערוצים ומניעת דליפה.
  2. חבר צינור גמיש (OD 0.087 '' ומזהה 0.015 '') למרפק פלסטיק או מחבר ישר באמצעות צינור גמיש קצר כמתאם (OD .1875 '' ומזהה 0.0625 ''). צרף מחברים לכל אחד מפתחי הכניסה מחורר במכשיר.
  3. חבר מזרק בקצה השני שלצינורות ולמקם את המזרק במשאבת מזרק. לחלופין לשנות את המערכת של מזרק, צינור, ומחבר לפי הצעד נדרש הליך בסעיף 3 והפתרון המתאים לו.

.3 לנתח DNA הכלאה

הערה: הצג את כל פתרון באיטיות לתוך הערוץ בקצב זרימה של 200 μl / שעה עד שכל הערוץ מלא.

  1. Functionalize כל microchannel אנכי עם רצף בדיקה ssDNA שונה (לבצע במקביל ל3 microchannels האנכית נפרדת):
    1. ממלא כל microchannel עם פתרון דגירה בדיקה שונה ssDNA (חיץ פוספט 10 מ"מ, phosphine 100 mM NaCl, 10 מיקרומטר טריס (2-carboxyethyl) (TCEP), ובדיקת 1 מיקרומטר ssDNA), ודגירה עבור שעה 1 ואחריו שטיפת microchannel עם PBS.
    2. מלא את microchannel עם תמיסה המכילה 1 מ"מ של 6-mercapto-1-hexanol (MCH) במאגר של 10 מ"מ PBS, 100 mM NaCl ו1.395 מ"מ TCEP, וincuבייט עבור שעה 1 ואחריו שטיפת microchannel עם PBS.
  2. הרם את PDMS, לסובב 90 ° לכיוון אופקי, ולמקם את מטה וחושפים שורות נפרדות של תאי תגובה עם כל שורה המכילה דלפק ייחודי ואלקטרודה השוואתית (איור S1).
  3. מלא את microchannels עם פתרון מדידת שליטה של ​​4x מרוכז ציטראט מלוחים נתרן חיץ (SSC), והדגירה של 20 דקות.
  4. מדידת רקע: מלא את microchannels עם 5 מ"מ ferricyanide / 5 של ברזל מ"מ בפתרון PBS ולהקליט את ערכי העכבה של המערכת אלקטרוכימיים לתדרים שונים (ספקטרוסקופיה עכבה אלקטרוכימי; EIS) באמצעות potentiostat מחובר לעבודה, הדלפק, ואלקטרודות התייחסות ( טווח תדרים מMHz 1 עד 0.1 הרץ, 10 נקודות נתונים תדירות לעשור, 25 משרעת mV, 5 קיטוב mV לעומת אלקטרודה ההפניה): פרמטרים EIS. חזור על מדידה זו עבור כל אלקטרודה עובדת בmicrochannels.
  5. למדוד הכלאת DNA (לבצע עבור כל יעד ssDNA שאינו משלים ומשלים).
    1. מלא את microchannels עם יעד פתרון מדידת ssDNA של 4x מרוכז חיץ SSC המכיל 1 מיקרומטר של היעד ssDNA, ודגירה של 20 דקות. מדוד את DNA על פי צעד 3.4.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תהליך ייצור לשליטה ומדויק למכשיר הניסוי הוא חיוני במחקר. זה מאפשר לחוקרים לקבל ניסויי תפוקה לשחזור וגבוהים. כאן יש לנו הפגנו תשואה גבוהה, תהליך microfabrication שחזור גבוה של biochip אלקטרוכימיים המבוסס על microfluidic (איור 1). עם שיעור כישלון נמוך, כמה מכשירים הראו נושאי מליטה שיובילו לדליפת פתרון. על מנת לאמת את הפעילות אלקטרוכימי של biochip, מדידות voltammetry מחזוריות נעשות בmicrochannels מלאה ferricyanide / פרוציאני זוג רדוקס אלקטרו פעיל. איור 2

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הנהלים שלנו להדגים את הייצור של biochip אלקטרוכימיים המבוסס על microfluidic והניצול שלה לניתוח אירועי הכלאת DNA. באמצעות תהליך microfabrication תשואה גבוהה בשליטתנו לפתח מכשיר מורכב מערוצי microscale המשולבים עם מערך של חיישני אלקטרוכימיים. אנחנו פיתחנו פרמטרים עיבוד מבוקרים להליך photolithography של השבב אלקטרוכימיים ועובש ערוץ microfluidic דרך גישה איטרטיבית. צעדים אלה מספקים קווים מנחים ליצירת עתיד של התקנים אנליטיים ממוזערים אחרים. חשוב לציין, שהם מספקים שיטה כדי לייעל את הפרמ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

יש לי המחברים אין לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מודים קרן רוברט וו דויטש, איום ביטחון הפחתת הסוכנות (DTRA), וקרן המדע מתעוררים הגבולות הלאומיים במחקר וחדשנות (אפרים) לתמיכה כספית. המחברים מודים גם ננוטכנולוגיה של אוניברסיטת מרילנד וFabLab לתמיכת מתקן חדר נקי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
פרוסת סיליקון 4 אינץ'Ultrasil4-5664צד יחיד מלוטש; סוג P; בורון מסומם; אוריינטציה 1-0-0; עובי 500 מיקרון; התנגדות 10-20 אוהם ומידות; ס"מ
שיפלי 1813 פוטו-רזיסט ("PR1")מיקרוכימיהפוזיטיבית פוטו-רזיסט
AZ5214 פוטו-רזיסט ("PR2")Hoechst Celanseחיובי פוטורסיסט
SU-8 50 פוטו-רזיסט ("PR3")מיקרוכימיהשלילי פוטו-רזיסט
תחריט זהבטרנסןTFAללא דילול
כרום תחריטטרנסן1020ACללא דילול
PDMS אלסטומר דאוקורנינג3097366 1004
PDMS חומר ריפוידאו קורנינג3097358 1004
כלי ניקוב ביופסיהHealthlinkBP20
Tygon צינורות גמישיםקול פארמר R 36030.015 אינץ'
מתאם גמיש TygonCole Parmer 06417-410.0625 אינץ'
1 מ"ל מזרקבקטון-דיקנסון301025
אשלגן פוספט מונו-בסיסיפלוקה1551139
אשלגן פוספט דו-בסיסי נטול מיםסיגמאRES20765-A7
נתרן כלוריסיגמא-אולדריץ'S7653
טריס (2-קרבוקסיאתיל) פוספיןאולדריץ'C4706
6-מרקפטו-1-הקסנולאולדריץ'451088
20x מאגר מרוכז של מי מלח-נתרן ציטראטסיגמא93017
אשלגן הקסציאנופרט (III)Aldrich455946
משלים ssDNA #1טכנולוגיות DNA משולבות (IDT)100 נמול DNA אוליגו5'-GGGACGTCCACGGAGCGCTA
TCGGAGCTTT-3'
יעד ssDNA #2טכנולוגיות DNA משולבות (IDT)100 nmole DNA oligo5'-/5ThioMC6-D/ACGCGTCAGGTCATTGACGA
ATCGATGAGT-3'
ssDNA משלים #2טכנולוגיות DNA משולבות (IDT)100 nmole DNA oligo5'-ACTCATCGATTCGTCAATGA
CCTGACCCGT-3'
יעד ssDNA #3טכנולוגיות DNA משולבות (IDT)100 nmole DNA oligo5'-/5ThioMC6-D/ACCTAGATCCAGTAGTAGTAGGA
CCCATGATGA-3'
ssDNA משלים #3טכנולוגיות DNA משולבות (IDT)100 nmole DNA oligo5'-TCATCATGGGTCTAACT
GGATCTAGGT-3'
InstrumentPlasma
Enhanced Chemical Vapor Deposition (PECVD)Oxford InstrumentsPlasmaLab System 100Chamber Pressure 1,000 mTorr, טמפרטורות 200 & #176; C, הספק RF 20 W, גזים: א) קצב זרימה N2O 710 sccm; ב) הרכב של 5% SiH4 ו-95% N2 קצב זרימת גזים 170 sccm, SiO2 קצב גידול 690 Å/min.
יחידת התזה DCAJA InternationalATC 1800-Vלכרום: לחץ תא 10 mTorr, קצב זרימת ארגון 20 sccm, הספק DC מסופק 200 W, קצב מקרטע 10 ננומטר/דקה. לזהב: לחץ תא 10 mTorr, קצב זרימת ארגון 20 sccm, הספק DC מסופק 200 W, קצב התזה 36 ננומטר/דקה.
מערכת אידוי קרן אלקטרוניתדנטוןנבנה בהתאמה אישיתלטיטניום: לחץ תא < 2 x 10-6 Torr, הספק מסופק לאקדח האלקטרוני 7.5 קילוואט, זרם נימה 150-200 mA, קצב אידוי 6-10 Å/שנייה. עבור פלטינה: לחץ תא < 2 x 10-6 Torr, הספק מסופק לתותח האלקטרוני 7.5 קילוואט, זרם נימה 150-200 mA, קצב אידוי 2-3 Å/שנייה.
PotentiostatCH Instruments660D
KDScientificKDS230
משאבת מזרק

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hong, J., Edel, J. B., deMello, A. J. Micro- and nanofluidic systems for high-throughput biological screening. Drug Discov. Today. 14, 134-146 (2009).
  2. Sun, Y., Kwok, Y. C. Polymeric microfluidic system for DNA analysis. Anal. Chim. Acta. 556, 80-96 (2006).
  3. Xu, Y., Yang, X., Wang, E. Review: aptamers in microfluidic chips. Anal. Chim. Acta. 683, 12-20 (2010).
  4. Yang, W., Woolley, A. T. Integrated multiprocess microfluidic systems for automating analysis. J. Lab. Automat. 15, 198-209 (2010).
  5. Gervais, T., Jensen, K. F. Mass transport and surface reactions in microfluidic systems. Chem. Eng. Sci. 61, 1102-1121 (2006).
  6. Song, H., Ismagilov, R. F. Millisecond kinetics on a microfluidic chip using nanoliters of reagents. J. Am. Chem. Soc. 125, 14613-14619 (2003).
  7. Jiang, H., Weng, X. A., Li, D. Q. Microfluidic whole-blood immunoassays. Microfluid. Nanofluid. 10, 941-964 (2011).
  8. Dutse, S. W., Yusof, N. A. Microfluidics-based lab-on-chip systems in DNA-based biosensing: an overview. Sensors. 11, 5754-5768 (2011).
  9. Dittrich, P. S., Manz, A. Lab-on-a-chip: microfluidics in drug discovery. Nat. Rev. Drug Discov. 5, 210-218 (2006).
  10. Craighead, H. Future lab-on-a-chip technologies for interrogating individual molecules. Nature. 442, 387-393 (2006).
  11. Hunt, H. K., Armani, A. M. Label-free biological and chemical sensors. Nanoscale. 2, 1544-1559 (2010).
  12. Dukkipati, V. R., Pang, S. W. Integrated microfluidic system for DNA analysis. IEEE-NANO 2006. Sixth IEEE Conference on Nanotechnology. 1, 162-165 (2006).
  13. Fang, T. H., et al. Real-time PCR microfluidic devices with concurrent electrochemical detection. Biosens. Bioelectron. 24, 2131-2136 (2009).
  14. Pavlovic, E., et al. Microfluidic device architecture for electrochemical patterning and detection of multiple DNA sequences. Langmuir. 24, 1102-1107 (2008).
  15. Xu, X., Zhang, S., Chen, H., Kong, J. Integration of electrochemistry in micro-total analysis systems for biochemical assays: recent developments. Talanta. 80, 8-18 (2009).
  16. Cai, H., Lee, T. M. -H., Hsing, I. M. Label-free protein recognition using an aptamer-based impedance measurement assay. Sensor. Actuat. B-Chem. 114, 433-437 (2006).
  17. Iliescu, C., Poenar, D. P., Carp, M., Loe, F. C. A Microfluidic device for impedance spectroscopy analysis of biological samples. Sensor. Actuat. B-Chem. 123, 168-176 (2007).
  18. Prakash, S. B., Abshire, P. Tracking cancer cell proliferation on a CMOS capacitance sensor chip. Biosens. Bioelectron. 23, 1449-1457 (2008).
  19. Yamaguchi, A., et al. Rapid fabrication of electrochemical enzyme sensor chip using polydimethylsiloxane microfluidic channel. Anal. Chim. Acta. 468, 143-152 (2002).
  20. Beebe, D. J., Mensing, G. A., Walker, G. M. Physics and applications of microfluidics in biology. Annu. Rev. Biomed. Eng. 4, 261-286 (2002).
  21. Mariella, R. Sample preparation: the weak link in microfluidics-based biodetection. Biomed. Microdevices. 10, 777-784 (2008).
  22. Bhushan, B. Springer handbook of nanotechnology. , 3rd ed, Springer. (2010).
  23. Ghallab, Y. H., Badawy, W. Lab-on-a-chip: Techniques, circuits, and biomedical applications. , Artech House. (2010).
  24. Chee, M., et al. Accessing genetic information with high-density DNA arrays. Science. 25, 610-614 (1996).
  25. Ma, K. -S., Zhou, H., Zoval, J., Madou, M. DNA hybridization detection by label free versus impedance amplifying label with impedance spectroscopy. Sensor. Actuat. B-Chem. 114, 58-64 (2006).
  26. Ito, T., Hosokawa, K., Maeda, M. Detection of single-base mismatch at distal end of DNA duplex by electrochemical impedance spectroscopy. Biosens. Bioelectron. 22, 1816-1819 (2007).
  27. Kao, L. T. -H., et al. Multiplexed detection and differentiation of the DNA strains for influenza A (H1N1 2009) using a silicon-based microfluidic system. Biosens. Bioelectron. 26, 2006-2011 (2011).
  28. Li, J., Chen, S., Evans, D. H. Typing and subtyping influenza virus using DNA microarrays and multiplex reverse transcriptase PCR. J. Clin. Microbiol. 39, 696-704 (2001).
  29. Gautier, C., et al. Hybridization-induced interfacial changes detected by non-faradaic impedimetric measurements compared to faradaic approach. J. Electroanal. Chem. 610, 227-233 (2007).
  30. Ma, Y., Jiao, K., Yang, T., Sun, D. Sensitive PAT gene sequence detection by nano-SiO2/p-aminothiophenol self-assembled films DNA electrochemical biosensor based on impedance measurement. Sensor. Actuat. B-Chem. 131, 565-571 (2008).
  31. Kim, J. H. -S., Marafie, A., Jia, X. -Y., Zoval, J. V., Madou, M. J. Characterization of DNA hybridization kinetics in a microfluidic flow channel. Sensor. Actuat. B-Chem. 113, 281-289 (2006).
  32. Dykstra, P. H., Roy, V., Byrd, C., Bentley, W. E., Ghodssi, R. Microfluidic electrochemical sensor array for characterizing protein interactions with various functionalized surfaces. Anal. Chem. 83, 5920-5927 (2011).
  33. Ben-Yoav, H., Dykstra, P. H., Bentley, W. E., Ghodssi, R. A Microfluidic-based electrochemical biochip for label-free diffusion-restricted DNA hybridization analysis. Biosens. Bioelectron. 38, 114-120 (2012).
  34. Wink, T., van Zuilen, S. J., Bult, A., van Bennekom, W. P. Self-assembled monolayers for biosensors. Analyst. 122, 43R-50R (1997).
  35. McEwen, G. D., Chen, F., Zhou, A. Immobilization, hybridization, and oxidation of synthetic DNA on gold surface: Electron transfer investigated by electrochemistry and scanning tunneling microscopy. Anal. Chim. Acta. 643, 26-37 (2009).
  36. Arinaga, K., Rant, U., Tornow, M., Fujita, S., Abstreiter, G., Yokoyama, N. The role of surface charging during the coadsorption of mercaptohexanol to DNA layers on gold: Direct observation of desorption and layer reorientation. Langmuir. 22, 5560-5562 (2006).
  37. Katz, E., Willner, I. Probing biomolecular interactions at conductive and semiconductive surfaces by impedance spectroscopy: Routes to impedimetric immunosensors, DNA-sensors, and enzyme biosensors. Electroanalysis. 15, 913-947 (2003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

DNA

מאמרים קשורים