מאמר שיטה

בידוד של תאי Murine לימפה צומת סטרומה

31.5K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/51803

⸱

19 באוגוסט 2014

 ,  ,  , 
1Department of Biomedicine, Immunoregulation, University of Basel and University Hospital Basel

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

בידוד של תאי סטרומה של בלוטות הלימפה הוא הליך רב-שלבי הכולל עיכול אנזימטי ופירוק מכני להשגת תאי רשתית פיברובלסטיים, תאי לימפה ותאי אנדותל בדם. בהליך המתואר, עיכול קצר משולב עם פירוק מכני אוטומטי כדי למזער את פירוק סמני פני השטח של תאי סטרומה של בלוטות לימפה קיימות.

תקציר

איברי לימפה משניים כולל בלוטות לימפה מורכבים מתאי סטרומה המספקים סביבה מבנית להומאוסטזיס, הפעלה והתמיינות של לימפוציטים. תת-קבוצות שונות של תאי סטרומה זוהו על ידי ביטוי מולקולת ההדבקה CD31 וגליקופרוטאין פודופלנין (gp38), תאי רשתית באזור T או תאי רשתית פיברובלסטיים, תאי אנדותל לימפתיים, תאי אנדותל בדם ופריציטים דמויי FRC בתוך אוכלוסיית התאים השליליים הכפולים. עבור כל האוכלוסיות מתוארות פונקציות שונות הכוללות הפרדה ורירית של תאים שונים, משיכה ואינטראקציה עם סוגי תאים שונים, סינון הנוזלים המנקזים והתכווצות כלי הלימפה. בשנים האחרונות, קבוצות שונות תיארו תפקיד נוסף של תאי סטרומה בתזמור וויסות תגובות תאי T ציטוטוקסיות שעלולות להיות מסוכנות למארח.

בלוטות לימפה הן מבנים מורכבים עם סוגי תאים רבים ושונים ולכן דורשים הליך מתאים לבידוד אוכלוסיות התאים הרצויות. נכון לעכשיו, פרוטוקולים לבידוד תאי סטרומה של בלוטות הלימפה מסתמכים על עיכול אנזימטי עם זמני דגירה משתנים; עם זאת, תאי סטרומה ומולקולות פני השטח שלהם רגישים לאנזימים אלה, מה שגורם לאובדן ביטוי סמני פני השטח ולמוות של תאים. כאן מוצע פרוטוקול עיכול אנזימטי קצר בשילוב עם שיבוש מכני אוטומטי להשגת השעיית תאים בודדים בת קיימא של תאי סטרומה של בלוטות הלימפה השומרים על ביטוי מולקולות פני השטח שלהם.

מבוא

בלוטות הלימפה הן תאים מיוחדים שבו תגובה חיסונית אדפטיבית נגד אנטיגנים עצמיים-זרים והם יזמו ותאמו. ההליך שהוצג כאן מתאר עיכול אנזימטי קצר בשילוב עם pipetting המכני האוטומטי לקבל השעיה תא בודד בלוטה לימפה ולקבל גישה לתאי סטרומה בלוטה לימפה קיימא השומרים על הבעת פני השטח של כמה מולקולות.

תא סטרומה בלוטה לימפה בצורת הפיגום של בלוטות לימפה ולמלא שלושה תפקידים מרכזיים: ראשון שהם לסנן נוזלי גוף לדגום אנטיגנים, פתוגנים והדפוס שלהם הפתוגן הקשורים המולקולרי (PAMPs), כמו גם ציטוקינים ודפוס מולקולרי הקשורים סכנה (damps) נוכחי בגוף. שנית, הם מושכים ולהורות תאי הצגת אנטיגן (APC) ולימפוציטים מסוג האינטראקציה וליזום תגובה חיסונית אדפטיבית; ושלישית, הם מספקים סביבה מבנית להומאוסטזיס וההתמיינות של לימפוציטים מסוג 1-3. במהלך תאי סטרומה הבלוטה לימפה לדלקת לייצר גורמי גדילה, ציטוקינים וכמוקינים, להסתגל לנפיחות ובכך ארגון האינטראקציה בין תאים דנדריטים (DCS), טריקו, וB- תאים. התזמור של תגובות חיסוניות אפשרי רק בשל הארכיטקטורה המבנית המורכבת שהוקמה על ידי אוכלוסיות תאי סטרומה שונות.

תאי סטרומה בלוטה לימפה הם תאים שליליים CD45 וניתן להבחין על ידי הביטוי של CD31 או gp38 בתאי fibroblastic ואנדותל 1 -6. Gp38 + CD31 - מגדיר תאי אזור T רשתי (TRC, הידוע גם בFRC: תאי רשתית fibroblastic), gp38 + CD31 + מגדיר תאי הלימפה אנדותל (LEC), gp38 - CD31 + מגדיר תאי האנדותל בדם (BEC). יתר על כן, אפיון של האוכלוסיות חשף את קיומם של תאי סטרומה בלוטה לימפה אחרים. ואכן, אוכלוסיית תאים כמו pericyte קטנה התאפיינה בתוךgp38 - CD31 - אוכלוסיית 7. לכן, עיבוד של הליך הבידוד הוא יתרון עבור זיהוי ואפיון של התכונות פונקציונליות של תאי סטרומה בלוטה לימפה שונים.

לפני הפיתוח של מערכת עיכול תאי סטרומה בלוטה לימפה פרוטוקולי המחקר של תאי סטרומה בלוטה לימפה היה מוגבל בתצפיות באתר באמצעות סעיף ומיקרוסקופיה רקמה. עם זאת, מחקרים מבניים ותפקודיים הראו מאפיינים חשובים של תאי סטרומה בלוטה לימפה. תאי סטרומה בלוטה לימפה קשורים עם podoplanin, קולגן ומטריצת חוץ תאית חלבונים (ECM) כדי ליצור מבנה מורכב 3 ממדים הנקרא מערכת צינור, שמעביר חלבונים לימפה ומסה מולקולרית הקשורים נמוכה מסינוס subcapsular של הבלוטה לימפה לגבוהה אנדותל venules באזור תאי T 8. DCs נמצא בקשר הדוק עם תאי סטרומה ואפשר לראות בולט לקון צינורימבנה duit לדגום נוזל ולזהות אנטיגנים 8. האינטראקציה של תאי בלוטה לימפה סטרומה (TRCs וLECs) עם DCs מתווכת על ידי השחרור וההצגה של CCL21 כמוקינים וCCL19 9,10. CCL19 וCCL21 מוכרים על ידי קולטן CCR7 להקל DCs ותאי T לנדוד לאזור תא T הבלוטה לימפה 4,11. למרות שימוש בכמוקינים דומים, יש לי תאי DCs וT מסלולי נדידה שונים לבלוטות הלימפה 12. מאוחר יותר, באמצעות עיכול אנזימטי של בלוטות לימפה ובידוד של תאי סטרומה בלוטה לימפה טהורים, מחקרים פונקציונליים בוצעו על עצם את התפקיד של תאי סטרומה הבלוטה לימפה השונים והיכולת שלהם לתקשר עם DCs וT / תאי B 6,13. ראשית, crosstalk בין תאי IFN-γ ייצור מפעיל T ותאי סטרומה בלוטה לימפה גורם ייצור של תחמוצת חנקן המטבוליט מוצגת לצנן תגובות תא T ושגשוג באיברי הלימפה המשניים 14-16. שנית, לימפה nתאי סטרומה שיר הלל כבר דיווחו לתמיכה בבידול של תת DC רגולציה באמצעות הייצור של IL-10 17, ולווסת הומאוסטזיס תא T נאיבי באמצעות הייצור של IL-7 6,18. שלישית, ביטוי TLR בתאי סטרומה בלוטה לימפה מצביע על כך שתאי סטרומה רגישים לאותות הנגזרים מזיהום או מולקולות עצמית שפורסם במהלך פגיעה ברקמות. ואכן, הטיפול בתאים סטרומה בלוטה לימפה עם ליגנד של פולי TLR3 (אני: C) גורם גברת ביטוי צנועה של גדול אני כיתה המורכבת histocompatibility ביטוי וגברת ביטוי של מולקולת שיתוף מעכב PD-L1, אך לא של מולקולות costimulatory, וכתוצאה מכך שינויים דרמטיים ברקמות היקפי אנטיגנים ביטוי 19. כמה קבוצות הראו תאי סטרומה בלוטה לימפה לבטא אנטיגנים רקמות היקפיים ולגרום לסובלנות של תאי T עצמי תגובתי 19,21-27. לכן, הבנת יחסי הגומלין בין תאי סטרומה בלוטה לימפה ומחדש נודדים והאחרותתאי בלוטה לימפה sident יעזרו למצוא מולקולות יעד חדשות כדי לאפשר הפעלה או דיכוי של מערכת חיסונית בזמן דלקת. לכן, יש צורך ביישום ההפרדה האנזימטית שפורסמה של בלוטות לימפה.

פרוטוקולים שפורסמו בעבר להשתמש בשילובים שונים של עיכול אנזימטי מבוסס collagenase עם לחץ מכאני נמוך 6,19,20. עם זאת, incubations הארוך עם אנזימי עיכול או שילוב של אנזים עיכול שונה עלול לבזות מולקולות פני השטח שונות הנדרשות על מנת לנתח את מצב ההפעלה ולזהות תאי סטרומה בלוטה לימפה חדשים. בהתאם לסוג של ניתוח תא סטרומה, פרוטוקול הקישור או פלטשר הפרוטוקול עשוי להיות מתאים יותר. בהליך המתואר, עיכול אנזימטי מעט קצר יותר בשילוב עם פיצול של מכאני אוטומטי כדי למזער השפלה סמן פני השטח של תאי סטרומה הבלוטה לימפה קיימא. הליך זה מאפשר בידוד מאוד לשחזור והבחנה של אוכלוסיות תאי סטרומה בלוטה לימפה עם שונות נמוכות וכדאיות יותר מ 95%. תאי סטרומה הבלוטה לימפה המבודדים הטרי ניתן להשתמש ישירות לביטוי סמן משטח, ניתוח חלבון, ומחקרי תעתיק, כמו גם הקמתה של קווי תאי סטרומה לבצע מבחני תפקודיים במבחנה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

בפרסום הסרטון הזה ופרוטוקול, את כל ההליכים בבעלי החיים נערכו בהתאם לפרוטוקול שאושר על ידי בעלי החיים קנטונלית הרשות באזל, שווייץ.

.1 בלוטות הלימפה הכנה ועיכול

  1. מים מראש בחום בכוס ל37 מעלות צלזיוס בבוחש מגנטי עם צלחת חימום.
  2. הכן בסיסי בינוני כדלקמן: DMEM בינוני (ללא פירובט) השלים עם FCS 2%, 1.2 מ"מ CaCl 2 ופן / סטרפטוקוקוס (פניצילין 100 יחידות, של סטרפטומיצין 100 מיקרוגרם).
  3. לעקר את כל מכשירים לנתיחה לפני השימוש.
  4. להרדים עכברי תורם בלוטה לימפה לCO 2 מחנק וסביבה נקי מחיידקים לנתח את בלוטות הלימפה. אל לנתח את השומן שמסביב. הערה: פרוטוקול זה הוא מותאם לצומת היקפית-ניקוז עור לימפה (מפשעתי, זרוע, בית השחי).
  5. מניחים בלוטות לימפה בצלחת פטרי המכילה סטרילי בינוני בסיסית קר 2 מ"ל קרח.
  6. לשבש את ca הבלוטה לימפהpsule באמצעות שתי 25 מחטי G קבועות במזרק 1 מ"ל.
  7. העברת רקמת הבלוטה לימפה שיבש בצינור מסביב לתחתית 5 מ"ל פוליפרופילן המכיל 750 בינוני בסיסי μl בתוספת 1 מ"ג / י DNAse 40 מיקרוגרם / מ"ל ​​מ"ל Collagenase IV ו
  8. להוסיף בוחש מגנטי סטרילי אחד בצינור אחד.
  9. צינור מקום בכוס עם 37 ° C שחומם מראש מים ומערבבים את הצינורות בקצב איטי (סיבוב 1 / sec) עבור 30 דקות.
  10. הסר את הצינור מהבוחש המגנטי עם צלחת חימום ולתת שברי בלוטה לימפה להתיישב.
  11. מוציא בזהירות את supernatant המועשר ב" תאים לא סטרומה ". הערה: אם הניתוח של T, B, תאים דנדריטיים וCD45 - gp38 - CD31 - הוא צפוי, לשמור את החלק "תאים שאינן סטרומה".
  12. לשטוף נותר רקמת בלוטה לימפה פעם אחת עם 750 בינוניים בסיסי μl. הערה: שלב זה הוא הכרחי רק אם עובד עם עכברי חיסון מוסמך.
  13. בואו ברי בלוטה לימפה להתיישב.
  14. הסר אתשבריר צף תאים שאינה סטרומה.
  15. הוסף לברי הבלוטה לימפה בינוניות בסיסי 750 μl בתוספת 3.5 מ"ג / מ"ל ​​Collagenase D ואני DNase 40 מיקרוגרם / מ"ל
  16. צינור מקום בחזרה בכוס המכילה 37 ° C שחומם מראש מים.
  17. לעכל רקמת בלוטה לימפה במשך 5 דקות תוך ערבוב לאט.
  18. שברי Disaggregate הלימפה רקמת צומת על ידי pipetting וערבוב 700 μl ל10 מחזורים במהירות המרבית באמצעות פיפטה רבה אוטומטית. הערה: זה משבש רקמת בלוטה לימפה כדי לשפר את העיכול.
  19. מניחים את הצינור בחזרה בכוס עם 37 מעלות מים שחומם מראש C.
  20. שברי רקמת הבלוטה לימפה Digest עוד 10 דקות תוך ערבוב לאט.
  21. Disaggregate ברי רקמת בלוטה לימפה על ידי pipetting וערבוב ל99 מחזורים במהירות המרבית באמצעות פיפטה רבה אוטומטית.
  22. הוספת 7.5 μl של 0.5 M EDTA כדי להבטיח תחזוקה של השעיה תא בודדת.
  23. שברי רקמת הבלוטה לימפה Disaggregate על ידי צינורtting וערבוב ל99 מחזורים במהירות המרבית באמצעות פיפטה רבה אוטומטית.
  24. הוסף בינוני בסיסית 750 μl ולהעביר תאים דרך רשת ניילון 70 מיקרומטר.
  25. ההשעיה תא צנטריפוגה 5 דקות ב1,500 XG, 4 ° C.
  26. תאי סטרומה כעת ניתן להשתמש לצורך ניתוח נוסף.

.2 צביעת תאים לימפה צומת סטרומה

  1. השתמש בשילוב של אנטי CD45, אנטי podoplanin (gp38), נוגדנים נגד CD31 להכיר בהצלחה תאי TRC, LEC, BEC וDN.
  2. דגירה רקמת הבלוטה לימפה מתעכל עם גשש חי / מת, אנטי CD45-FITC (1: 200), אנטי gp38-PE (1: 200), אנטי CD31-APC (1: 200) ב100 μl HBSS המכיל 2 FCS% לפחות 20 דקות, 4 ° C, בחושך.
  3. שוטף את התאים והוסיפו 500 l של HBSS המכילים 2% FCS
  4. ההשעיה תא צנטריפוגה 3 דקות XG ב 1500, 4 ° C..
  5. להשעות Re בשל HBSS 100 μl המכיל 2% FCS.
  6. הפעל את התאים המוכתמים בזרימה cytometer equippעורך עם אופטיקה הבאה: מקור עירור עם עד שלושה לייזרים: כחול (488 ננומטר,, מצב מוצק 20 mW מקורר אוויר), אדום (633 ננומטר, 17 mW HeNe), וסגול (405 ננומטר, 30 mW מצב מוצק) .
  7. השער CD45 - תאים שלא לכלול תאי hematopoietic.
  8. singlets השער (FSC-W) ותאי חיים (LIVE / גשש DEAD) שלא לכלול כפילויות ותאים מתים.
  9. gp38 עלילה לעומת CD31 לדמיין TRC (gp38 + CD31 -), LEC, BEC (gp38 - CD31 +) (gp38 + CD31 +) וDN (gp38 - CD31 -) תאים (ראה איור 1).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הפרוטוקול הנוכחי הוא פרוטוקול עיכול שונה פורסם על ידי קישור et al., 2007 6 עם זמן קצר יותר לעיכול (45 מרבי דקות) בשל פיצול של מכאני עם פיפטה רבה אוטומטית. בנוסף, ההליך הוא סטנדרטי יותר, ממזער פירוק של סמני משטח בתאי סטרומה בלוטה לימפה שונים ומאפשר את הטיפול במדגם אחד או יותר באותו הזמן.

Collagenase IV וCollagenase D בקישורי פרוטוקול 6 ופרוטוקול נוכחי או Collagenase P וDispase בפלצ'ר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

המחקר של תאי סטרומה בלוטה לימפה לאחרונה הפך למוקד מחקר עקב התפתחותם של שני פרוטוקולי עיכול פורסם 6,13. שני הפרוטוקולים מספיקים כדי לקבל תאי סטרומה הבלוטה לימפה בודדת אך שונים בשימוש באנזימי עיכול ואת הזמן של עיכול. מאחר ותאי סטרומה וסמני פני השטח שלהם רגישים לעיכול אנזימטי ולחץ מכאני, נדרש פרוטוקול מותאם.

הבידוד של תאי סטרומה הבלוטה לימפה קיימא מהבלוטה לימפה טריות גזור הוא הצעד הראשון על מנת לבצע פנוטי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

המחברים מודים לסנג'יב לותר ועמיתיו על דיונים מועילים בביסוס פרוטוקול העיכול הנוכחי של בלוטות הלימפה. עבודה זו נתמכה על ידי מענקי SNF PPOOA-_119204 ו-PPOOP3_144918 ל-S.W.R.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
DMEMLifeTechnologies-Gibco41965-039
FCSריכוז סופי 2%
CaCl2Sigma499609ריכוז סופי 1.2 מ"מ
קולגנאז IVWorthington Biochemical Corporation>160 יחידות למ"ג משקל יבש, שימוש בריכוז סופי של 1 מ"ג/מ"ל
קולגנאז DRoche11088882001לשימוש במינון 3.5 מ"ג/מ"ל
DNAse IRoche שימוש11284932001 בגיל 40 ומיקרו; גרם/מ"ל
מגנטים לערבובFAUST5 מ"מ אורך-2 מ"מ ø
צינורות תחתונים עגולים מפוליסטירן 5 מ"לFalcon-BD Bioscience
מערבל מגנטי עם פונקציית חימוםIKA-RCT-סטנדרטי9720250
צלחות פטרי 100 מ"מ, סטריליTPP6223201
25 גרם מחטיםTerumo
אנטי עכבר CD45 AbBiolegendClone 30-F11
אנטי עכבר CD11c AbBiolegendClone N418
אנטי עכבר Podoplanin AbBiolegendClone 8.1.1
אנטי עכבר CD31 AbBiolegendClone MEC13.3

Eppendorf Xplorer plus, רב ערוצי		Eppendorf4861 000.821/8301.250 ומיקרו; l מקסימום נפח
אנטי עכבר CD140aBiolegendClone APA5
אנטי עכבר CD80BiolegendClone 16-10A1
אנטי עכבר CD40BiolegendClone 1C10
אנטי עכבר I-AbBiolegendClone AF6-120.1
אנטי עכבר CD274 (PD-L1)BiolegendClone 10F.9G2
LIVE / DEAD Fixable ערכת כתמי תאים מתים Near-IRInvitrogenL10119

מקורות

  1. Mueller, S. N., Ahmed, R. Lymphoid stroma in the initiation and control of immune responses. Immunological reviews. 224, 284-294 (2008).
  2. Roozendaal, R., Mebius, R. E. Stromal Cell - Immune Cell Interactions. Annual Review of Immunology. 29 (1), 23-43 (2011).
  3. Turley, S. J., Fletcher, A. L., Elpek, K. G. The stromal and haematopoietic antigen-presenting cells that reside in secondary lymphoid organs. Nature Reviews Immunology. 10 (12), (2010).
  4. Bajénoff, M., et al. Stromal cell networks regulate lymphocyte entry, migration, and territoriality in lymph nodes. Immunity. 25 (6), 989-1001 (2006).
  5. Katakai, T., Hara, T., Sugai, M., Gonda, H., Shimizu, A. Lymph node fibroblastic reticular cells construct the stromal reticulum via contact with lymphocytes. The Journal of experimental medicine. 200 (6), 783-795 (2004).
  6. Link, A., et al. Fibroblastic reticular cells in lymph nodes regulate the homeostasis of naive T cells. Nature Immunology. 8 (11), 1255-1265 (2007).
  7. Malhotra, D., et al. Transcriptional profiling of stroma from inflamed and resting lymph nodes defines immunological hallmarks. Nature Immunology. 13 (5), 499-510 (2012).
  8. Gretz, J. E., Norbury, C. C., Anderson, A. O., Proudfoot, A. E., Shaw, S. Lymph-borne chemokines and other low molecular weight molecules reach high endothelial venules via specialized conduits while a functional barrier limits access to the lymphocyte microenvironments in lymph node cortex. The Journal of experimental medicine. 192 (10), 1425-1440 (2000).
  9. Sixt, M., et al. The conduit system transports soluble antigens from the afferent lymph to resident dendritic cells in the T cell area of the lymph node. Immunity. 22 (1), 19-29 (2005).
  10. MartIn-Fontecha, A., et al. Regulation of dendritic cell migration to the draining lymph node: impact on T lymphocyte traffic and priming. The Journal of experimental medicine. 198 (4), 615-621 (2003).
  11. Luther, S. A., Tang, H. L., Hyman, P. L., Farr, A. G., Cyster, J. G. Coexpression of the chemokines ELC and SLC by T zone stromal cells and deletion of the ELC gene in the plt/plt mouse. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (23), 12694-12699 (2000).
  12. Braun, A., et al. Afferent lymph-derived T cells and DCs use different chemokine receptor CCR7-dependent routes for entry into the lymph node and intranodal migration. Nature Immunology. 12 (9), 879-887 (2011).
  13. Fletcher, A. L., et al. Reproducible isolation of lymph node stromal cells reveals site-dependent differences in fibroblastic reticular cells. Frontiers in immunology. 2, 35(2011).
  14. Lukacs-Kornek, V., et al. Regulated release of nitric oxide by nonhematopoietic stroma controls expansion of the activated T cell pool in lymph nodes. Nature Immunology. 12 (11), 1096-1104 (2011).
  15. Siegert, S., et al. Fibroblastic reticular cells from lymph nodes attenuate T cell expansion by producing nitric oxide. PLoS ONE. 6 (11), e27618(2011).
  16. Khan, O., Headley, M., Gerard, A., Wei, W., Liu, L., Krummel, M. F. Regulation of T cell priming by lymphoid stroma. PLoS ONE. 6 (11), e26138(2011).
  17. Svensson, M., Maroof, A., Ato, M., Kaye, P. M. Stromal cells direct local differentiation of regulatory dendritic cells. Immunity. 21 (6), 805-816 (2004).
  18. Onder, L., et al. Endothelial cell-specific lymphotoxin-β receptor signaling is critical for lymph node and high endothelial venule formation. The Journal of experimental medicine. 210 (3), 465-473 (2013).
  19. Fletcher, A. L., et al. Lymph node fibroblastic reticular cells directly present peripheral tissue antigen under steady-state and inflammatory conditions. The Journal of experimental medicine. 207 (4), 689-697 (2010).
  20. Fletcher, A. L., Malhotra, D., Turley, S. J. Lymph node stroma broaden the peripheral tolerance paradigm. Trends in Immunology. 32 (1), 12-18 (2011).
  21. Cohen, J. N., et al. Lymph node-resident lymphatic endothelial cells mediate peripheral tolerance via Aire-independent direct antigen presentation. Journal of Experimental Medicine. 207 (4), 681-688 (2010).
  22. Lee, J. -W., et al. Peripheral antigen display by lymph node stroma promotes T cell tolerance to intestinal self. Nat Immunol. 8, 181-190 (2006).
  23. Nichols, L. A., et al. Deletional self-tolerance to a melanocyte/melanoma antigen derived from tyrosinase is mediated by a radio-resistant cell in peripheral and mesenteric lymph nodes. J Immunol. 179, 993-1003 (2007).
  24. Gardner, J. M., et al. Deletional tolerance mediated by extrathymic Aire-expressing cells. Science. 321, 843-847 (2008).
  25. Gardner, J. M., et al. Extrathymic Aire-expressing cells are a distinct bone marrow-derived population that induce functional inactivation of CD4+ T cells. Immunity. 39, 560-572 (2013).
  26. Magnusson, F. C., et al. Direct presentation of antigen by lymph node stromal cells protects against CD8 T-cell-mediated intestinal autoimmunity. Gastroenterology. 134, 1028-1037 (2008).
  27. Tewalt, E. F., et al. Lymphatic endothelial cells induce tolerance via PD-L1 and lack of costimulation leading to high-level PD-1 expression on CD8 T cells. Blood. 120 (24), 4772-4782 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Collagenase DDNAse OneCD31 GP38

מאמרים קשורים