מאמר שיטה

תרבויות Organotypic Slice ללמוד oligodendrocyte Dynamics וmyelination

18.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/51835

⸱

25 באוגוסט 2014

 ,  ,  , 
1Department of Physiology and Neurobiology, University of Connecticut, 2Stem Cell Institute, University of Connecticut, 3Department of Neurology, Yale University School of Medicine

במאמר זה

סיכום

מתוארת טכניקה לחקר תאי NG2 ואוליגודנדרוציטים באמצעות מערכת תרבית פרוסות של המוח הקדמי והמוח הקטן. שיטה זו מאפשרת לבחון את הדינמיקה של התפשטות והתמיינות של תאים בתוך שושלת האוליגודנדרוציטים שבה ניתן לתפעל בקלות את הסביבה החוץ-תאית תוך שמירה על ציטו-ארכיטקטורת רקמות.

תקציר

תאי NG2 להביע (polydendrocytes, תאי מבשר oligodendrocyte) הם אוכלוסיית תאי גלייה הגדולה הרביעית במערכת העצבים המרכזית. במהלך התפתחות עוברית ואחרי לידה הם פעילים להתרבות וליצור oligodendrocytes myelinating. תאים אלה בדרך כלל נחקרו בתרבויות עיקריות ניתקו, cocultures נוירון, וברקמות קבועות. קווים מהונדסים זמינים עתה באמצעות עכבר פורסים מערכות תרבות יכולות לשמש כדי לחקור התפשטות והתמיינות של תאי שושלת oligodendrocyte בשני אזורי החומר האפורים ולבנים של המוח הקדמי ובמוח קטן. תרבויות פרוסה מוכנות מעכברים לאחר לידה מוקדמות ונשמרות בתרבות לתקופה של עד חודש 1. ניתן הדמיה פרוסות אלה מספר רב של פעמים על פני תקופת התרבות לחקור את התנהגות ואינטראקציות הסלולר. שיטה זו מאפשרת הדמיה של חלוקת תא NG2 ואת המדרגות מובילות לבידול oligodendrocyte תוך שהוא מאפשר ניתוח מפורט של אזור-תלויהתא ent NG2 והטרוגניות פונקציונלית oligodendrocyte. זוהי טכניקה רבת עוצמה שיכול לשמש כדי לחקור את האותות הפנימיים וחיצוניים המשפיעים על תאים אלה לאורך הזמן בסביבה סלולרית שדומה מאוד שמצאו in vivo.

מבוא

תרבויות פרוסה Organoytpic של מערכת העצבים המרכזית הוכיחו להיות מאוד שימושי לחקר תא עצב וביולוגיה של תא גליה במערכת semiintact 1 - 4. תרבויות אלה הן פשוטות יחסית לאמץ ולשמור על יתרונות רבים של תרביות תאים ניתק עיקריות כגון מניפולציה של הסביבה תאית וגישה קלה להדמית תא חי לטווח ארוך חוזר ונשנה וקלטות אלקטרו 5 - 9. בנוסף, תרבויות פרוסה לשמור cytoarchitecture רקמה 3 ממדים, קישוריות עצבית אזורית, ואת רוב סוגי תאים קיימים במערכת. תכונות אלו הופכות את תרבויות אלה מערכת ייחודית ונוחה לחקור בודדת התנהגות תא ופיזיולוגיה עם אינטראקציות הסלולר וסביבתיות.

תאי NG2 הם אוכלוסייה של תאי גליה במערכת העצבים המרכזית של היונקים שממשיכות להתרבות וליצור מ 'yelinating oligodendrocytes במהלך עוברי ולאחר לידה פיתוח 10. הם נחקרו רבים בתרביות תאים ראשוניים ניתק, והפיתוח האחרון של קווי עכבר מהונדסים עם ביטוי תא ספציפי NG2 של חלבוני ניאון יש להקל במיפוי גורל vivo וקלטות אלקטרו בהכנות פרוסה חריפות. גם בלימודים אלה, מעט מאוד ידוע על הדינמיקה הזמנית של התפשטות תאי NG2 ובידול oligodendrocyte. למרות שתרבית תאים ניתקים היא בשימוש נרחב למתקן היחסי במניפולציות תרופתית וגנטיות, זה לא מתאים לחקירת הבדלים פונקציונליים של תאים אלה באזורי מוח שונים ובמיוחד כאשר הוא רצוי לשמור על ההקשר של microenvironment הסלולרי. תרבויות פרוסה לספק אלטרנטיבה פשוטה שניתנים למניפולציות תרופתיים והיה בשימוש כדי לחקור myelination oligodendrocyte 11,12, תאתגובת ular לאחר lysolecithin (LPC) או נוגדן מושרה פגיעה במיאלין 13,14, ואינדוקציה של חידוש יצירת המיאלין באמצעות טיפול תרופתי 15.

שיטה לחקור ולבצע הדמיה חיה ורקמות קבועות (או postfixation) ניתוח של התפשטות NG2 והתמיינות של תאי oligodendrocyte בתרבויות פרוסה organotypic נלקחו משני המוח הקדמי ובמוח הקטן מתוארת. זוהי שיטה רבת עוצמה שיכול לשמש כדי לחקור את גורל התא של תאי NG2 אחד לאחר חלוקת 16 ולגלות הבדלי region- ותלוי גיל בהתפשטות תאי NG2 המושרה גורם גדילה 17. טכניקה פשוטה יחסית זו היא נגישה לציבור רחב כדי לחקור תא נוסף פנימי ו / או סביבתי מנגנונים המסדירים את הפיסיולוגיה של תאי גליה אלה ותגובתם לפעילות עצבית או נזק המיאלין.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הערה: כל נהלי בעלי החיים פועלים בהתאם להנחיות ואושרו על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) באוניברסיטת קונטיקט.

הערה: בניסויים אלה (JAX # 008,538) המכוננים NG2cre 18 (JAX # 008,533) ועין מתנהלת NG2creER 16 עכברים הטרנסגניים חצו לZ / EG 19 (JAX # 003,920) או gtRosa26: בהתאמה שמשו כתב YFP (# 006,148 JAX) קווי 20 לתאי NG2 תמונה וצאצאיהם. לoligodendrocytes הבוגרת תמונה, עכברים הטרנסגניים PLPDsRed 21 היו בשימוש. להישרדות עולה בקנה אחד, יכולות להיות מבודדות מעכברי פרוסות עד לאחר לידה יום 10 משני המוח הקדמי ובמוח הקטן.

.1 Slice הכנה

  1. במנדף תרבות, המקום מוסיף תרבית רקמה בשש צלחות גם ולהוסיף בינוני 1 מ"ל פרוסת תרבות (מתכון בסעיף חומרים כימיים). שים את הצלחות בחממת תרבות תא ב37 ° C עם 5% CO 2 לפחות 2 שעות לפני לנתיחה.
  2. לעקר את כל הכלים ומסוק רקמות עם 70% אתנול.
  3. חיץ בועת דיסקציה (מתכון בסעיף חומרים כימיים) עם 95% O 2, 5% CO 2 על קרח לפחות 15 דקות לפני תחילת הנתיחה.
  4. הרדימי גורי עכבר על ידי הצבת אותם על קרח ל5-10 דקות על פי פרוטוקולים של בעלי חיים שאושרו. לברר את העומק המתאים של הרדמה על ידי המאשר כי העכברים אינם מגיבים לזנב וצביטת הבוהן.
  5. לערוף בעלי חיים באמצעות מספריים חדים בעקבות פרוטוקולים של בעלי חיים. להסיר במהירות את הגולגולת מעל המוח הקדמי ובמוח הקטן על ידי ביצוע חתך sagittal ואחריו חתך לרוחב, תוך שימוש בכלים מעוקרים הראשון. לחתוך עצבי גולגולת מפני שטח הגחון של המוח והמוח הקטן על ידי גלגול הרקמה לצד בזהירות.
  6. הנח רקמה בצלחת 35 מ"מ סטרילית המכילה מאגר נתיחת חומצן קר כקרח.
  7. באמצעות סכין גילוח, לנתק את המוח הקטן ומוח קדמי. ואז לעשות חתך באמצע sagittal throאיכס המוח הקדמי ובמוח קטן, שמפריד בין האונות.
  8. חותך 300 סעיפי העטרה וsagittal מיקרומטר בעובי של המוח הקדמי ובמוח קטן עם מסוק רקמה ידני. הערה: מסוק רקמה ידני מאפשר עיבוד מהיר מנתיחה כדי דגירה התרבות ללא הצורך בהטבעת agarose. גם vibratome יכול לשמש כפי שתואר לעיל 9.
  9. העבר את הפרוסות מופרדות לחיץ לנתיחה קרה טרי מבעבע על קרח.
  10. השתמש לנתח קטן או במשקל מריות להפריד חלקים בודדים ולהעבירם לpreincubated שש מנות היטב עם התרבות מוסיף.
  11. הסר את כל חיץ נתיחה עודף מפני שטח של להכניס את התרבות באמצעות פיפטה העברה חד פעמית או קצה pipet P 200. שתיים עד שלושה מוח קדמי או שלוש פרוסות של מוח קטנים יכולים להיות ממוקמים על להכניס את התרבות אחד.
    הערה: לקבלת תוצאות בקנה אחד עם תרבויות מוח קדמיות, הוא אידיאלי לקחת פרוסות פורש קדמי שליש מכפיס המוח(איור 1 א) כדי ללמוד את שני אזורי החומר האפורים ולבנים באותו פרוסה. כל בעל חיים, בדרך כלל מניב 6 פרוסות מוח קדמיות ו6 פרוסות המוח הקטן.
  12. מניחים את שש הצלחות גם בחממה ולהחליף את המדיום פרוס עם 1 מ"ל של מדיום פרוס יום 1 לאחר הכנת פרוסה ולאחר מכן בכל יום אחר, עד שקיבעון פרוסה.
  13. בהתאם לניסוי, להשתמש פרוסות אחרי 5-7 ימים בתרבות. השתמש רק בפרוסות שנעשות שקוף לאחר הימים הראשונים וזורקים אותם שיש להם אזורים אטומים אחידים. הערה: אזורים אטומים בתוך פרוסות נראים על ידי העין ומופיעים כגוש של תאים שחורים מתחת לניגוד שלב. לאחר הטכניקה כבר שולטת, פרוסות אטומות מתות מתרחשות רק לעתים נדירות, בפחות מ 1-5% מפרוסות.

2 זמן לשגות הדמיה של חלוקת תא NG2 וoligodendrocyte בידול

הערה: כדי לבצע הדמיה זמן לשגות של התפשטות תאי NG2 ובידול אנו משתמשים NG2cre: עכברי ZEG 16המבטא EGFP בתאי NG2 וצאצאיהם (תרשים 1C-E). ביטוי עיתונאי בתחום הזה הוא מספיק חזק כדי להשיג תמונות חיות של GFP + תאים בפרוסות מייד לאחר חתך לתקופה של לפחות ארבעה שבועות זמן. התמונות הברורות ביותר מתקבלות לאחר תקופת הדילול הראשונית של הפרוסה, אשר מתרחשת על 3-5 הימים הראשונים בתרבות.

  1. לאורך כל הניסוי, לשמור את הפרוסות בתרבית תאי חממה ב 37 מעלות צלזיוס ולהסיר רק לפרקי זמן קצרים (פחות מ -15 דקות לכל פרוסה), שמירה על המכסה על הצלחת גם שש תוך הדמיה.
  2. באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך מצוידים במצלמה דיגיטלית, ללכוד תמונות בנקודת הזמן הראשונה באמצעות מטרת 10X. הערה: נקודות בפעם ראשונה משתנות בהתאם לניסוי ויכול להיות היום שבו את הפרוסות הוכנו או כל נקודה לאחר זמן.
  3. צלם תמונות מאזורים מרובים בנקודה אחת בזמן בשני אזורי החומר האפורים ולבנים של הפרוסה. ה הערהאזור הדואר צילם על ידי ציוני דרך ספציפיות בתוך הפרוסה ועל ידי מיפוי מיקום תמונה על סכמטי שיכול לשמש לפגישות הדמיה הבאות. ציוני דרך שימושיים יכול לכלול קצוות של הפרוסות ו / או נטייה של שטחים בחומר לבנים. תמונה 7:56 מקומות על כל פרוסה בכל נקודת זמן.
  4. צלם תמונות שלאחר מכן בהפרש של 4-6 hr אם בוחנים חלוקת תאי NG2 ובידול oligodendrocyte, באופן אידיאלי על 5-7 ימים.
  5. ללכוד תמונה סופית של כל האזורים ולתקן את הפרוסות באופן מיידי. הוסף 1 מ"ל של מקבע (PFA 4% עם 0.1M l-ליזין meta-periodate 0.01 M נתרן) לתחתית להכניס את התרבות, ולאחר מכן להוסיף 1 מ"ל נוסף על גבי פרוסות. יש להיזהר שלא להשפריץ מקבע ישירות על הפרוסה כפי שהוא יכול להתנתק מהקרום. לתקן את הרקמות ל30 דקות ולהמשיך עם אימונוהיסטוכימיה באמצעות סמנים בשלב מסוים התפתחותי כפי שתואר בסעיף 4.
  6. פרוסות לשטוף עם חיץ פוספט 0.2 M נתרן 3 x 10 מ 'ב. אם פרוסות נחוצות, לאחסן ב 4 ° C ב0.2 חיץ פוספט M נתרן ל1-3 ימים לפני immunostaining אבל באופן אידיאלי לבצע צביעה בתוך 24 שעות. להמשיך עם אימונוהיסטוכימיה כמתואר להלן בסעיף 4 על מנת לקבוע את חלקם של תאים שמובחנים לoligodendrocytes (איור 2 ד-F).

.3 גורל מיפוי של צאצאיהם של תאי NG2 באמצעות עכברים והעין מתנהל כתב מהונדס בתרבויות פרוסה

הערה: כדי לעקוב אחר גורלם של תאי NG2 מנקודת זמן מסוים בתרבות, NG2creER מושרה: ניתן להשתמש בעכברים מהונדסים YFP.

  1. לגרום רקומבינציה Cre וביטוי עיתונאי על ידי הוספת 100 4OHT ננומטר מומס באתנול למדיום התרבות. הערה: תאים חיוביים Reporter אמורים להופיע בטווח של 1-2 ימים ביעילות גיוס של ~ 20-25% YFP + NG2 + / NG2 + תאים ובנקודה זו בזמן הכול יהיו תאים בשלב תא NG2 (איור 2A-C)
  2. לתקן ולשטוף את הפרוסהים בנקודות זמן שונה לאחר מניפולציות שונות (כמתואר בסעיפים 2.5 ו2.6).

.4 Slice אימונוהיסטוכימיה

  1. חותך את הקרומים עם פרוסות המצורפות מתוך מוסיף באמצעות אזמל.
  2. העבר את הפרוסות לבארות בודדות של מלח 24 פוספט צלחת המכילה גם סליין (PBS) באמצעות סדרה של פינצטה, נזהר שלא לשבש את ההרכב של הפרוסה כאשר מרים את הקרום.
  3. העבר את הפרוסות לצלחת גם 24 עם חסימת תמיסה המכילה 5% עזים בסרום נורמלי (NGS) ו0.1% Triton-X100 בPBS עבור שעה 1.
  4. דגירה את הפרוסות בO נוגדן הראשוני / N ב5 NGS% PBS על 4 מעלות צלזיוס. לזיהוי תאים בשלב תא NG2, להשתמש נוגדנים לNG2 וPDGFRα. לזיהוי oligodendrocytes מובחנת, להשתמש נוגדן לאנטיגן coli polyposis adenomatous (APC; גג 1 'שיבוט).
  5. על פרוסות לשטוף היום השניה בדקות 3 x15 PBS, אז דגירה בantibo המשניתמת ב5 NGS% PBS עבור שעה 1 ב RT. לשטוף פרוסות בPBS 3 דקות x15 והר בשקופיות. הר עם פרוסות וקרום מול השקופיות, כך שהקרום לא יהיה בין המטרה והרקמה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

דוגמאות לנתוני נציג הם כדלקמן שהתקבלו באמצעות תרבויות פרוסה משני המוח הקדמי ובמוח הקטן של P8 NG2cre: ZEG, NG2creER: YFP וPLPDsRed קווי עכבר מהונדסים. ניתן הדמיה תאי NG2 מעל ימים במוח קדמי ובמוח קטן פרוסות (איור 1 ב-D, 1 וידאו) ואת הפנוטיפ של תאים אלה ניתן לקבוע לאחר הקיבוע וimmunostaining עם NG2 ונוגדנים גג 1 '(איור 1E). בנוסף לחיות הדמיה, התפשטות תאים יכולה גם להיות מוערכת באמצעות מכתים immunohistochemical עבור סמני התפשטות תאים כגון Ki67

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

Myelination במערכת העצבים המרכזית הוא חיוני לתקשורת עצבית יעילה והישרדות axonal 22. תאי NG2 ברציפות ליצור oligodendrocytes myelinating לבגרות תוך שמירה על אוכלוסיית תושב באזורים במוח ביותר 16,23 - 25. כמה מנגנונים גנטיים ומולקולריים המסדירים את ההתמיינות של תאים אלו תוארו אבל הרבה עדיין לא גילו. תרבויות הפרוסה organotypic הן כלי נוח לחקור מנגנונים אלה בשל מאפייניהם הייחודיים של שמירה על אזורים אנטומיים, מניפולציה קלה של הסביבה תאית, myelination חזק, והנוכחות ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים

תודות

עבודה זו מומנה על ידי מענקים מהאגודה הלאומית לטרשת נפוצה (RG4179 ל-A.N.), המכונים הלאומיים לבריאות (NIH R01NS073425 ו-R01NS074870 ל-A.N.) והקרן הלאומית למדע (A.N). אנו מודים לד"ר פרנק קירכהוף (אוניברסיטת סארלנד, הומבורג, גרמניה) על שסיפק PLPDsעכברים טרנסגניים אדומים. אנו מודים ליופן סאן על עזרתה בשימור מושבת העכברים הטרנסגניים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Slice Culture Medium
Minimum Essential MediumInvitrogen1109050%
Hank' s תמיסת מלח מאוזנתInvitrogen1417525%
HEPESSigma-AldrichH-403425mM
L-GlutamineInvitrogen250301mM
אינסוליןSigma-AldrichI66341 מ"ג/ליטר
חומצה אסקורביתSigma-AldrichA-02780.4mM
סרוםסוסים HycloneSH30074.0325%
טיטראט ל-pH 7.22 עם NaOH, מסנן עם מסנן על הבקבוק, ומאחסנים ב-4 מעלות צלזיוס
<מאגר חיתוך חזק>
NaClסיגמא-אולדריץ'S3014124mM
KClסיגמא-אולדריץ'P54053.004 מ"מ
KH2PO4Sigma-AldrichP56551.25mM
MgSO4 (נטול מים)Sigma-AldrichM75064.004mM
CaCl2 2H2OSigma-AldrichC79022mM
NaHCO3Sigma-AldrichS576126mM
D-(+)-גלוקוזסיגמא-אולדריץ'G702110 מ"מ
חומצהאסקורביתSigma-AldrichA-02782.0mM
AdenosineSigma-AldrichA40360.075mM
מסנן עם מסנן עליון בקבוק ומאחסנים ב-4 מעלות צלזיוס, מחמצנים עם 95% O2 5% CO2 לפני השימוש
<חזק>ריאגנטים ואספקה אחרים
4-הידרוקסי טמוקסיפן (4OHT)Sigma-AldrichH7904100nM
Paraformaldehyde (PFA)EM Sciences192004%
L-LysineSigma-AldrichL-60270.1M
נתרן MetaperiodateSigma-AldrichS-18780.01M
ארנב אנטי NG2 נוגדןChemicon (Millipore)AB53201:500
עכבר נגד CC1 נוגדןCalbiochem (Millipore)OP801:200
עכבר נגד Ki67 נוגדןVision BiosystemsNCL-Ki67-MM11:300
עכבר נגד נוגדןNeuN Chemicon (Millipore)MAB3771:500
נוגדנים משניים ספציפייםלמין Jackson Immunoresearch
סרום עיזים רגיל (NGS)5%
טריטון X-1000.10%
מדיום הרכבה עם DAPIVector LabsH-1200
מוסיף ממברנת תרבית מילי-תא 0.45μ m גודל נקבוביותפישר סיינטיפיקPICM03050
בקבוק מסננים עליוניםפישר סיינטיפיק09-740-25E
אתנול
95% O2 5% CO2 תערובת
פוספט חוצץ מלח (PBS)
סטרילי שש צלחות
ניתוח (היפוקמפוס) או מרית
קוצץ
סכיני
פיפטות העברה חד פעמיות
35 מ"מ ו-60 מ"מ צלחות
סטריומיקרוסקופ
שלב הפוך מיקרוסקופ
זרימה למינרית מכסה מנוע
חממת
רקמות הפוכה מיקרוקופה
גז בארשקילהרקמות ידני או אוטומטיגילוחפטרי סטריליותתרבית פלואורסצנטית

מקורות

  1. Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. Journal of Neuroscience Methods. 37 (2), (1991).
  2. Gogolla, N., Galimberti, I., DePaola, V., Caroni, P. Preparation of organotypic hippocampal slice cultures for long-term live imaging. Nature Protocols. 1 (3), 1165-1171 (2006).
  3. Gähwiler, B. H., Capogna, M., Debanne, D., McKinney, R. A., Thompson, S. M. Organotypic slice cultures: a technique has come of age. Trends in Neurosciences. 20 (10), 471-477 (1997).
  4. Yamamoto, N., Kurotani, T., Toyama, K. Neural connections between the lateral geniculate nucleus and visual cortex in vitro. Science. 245 (4914), 192-194 (1989).
  5. Bahr, B. A., Kessler, M., et al. Stable maintenance of glutamate receptors and other synaptic components in long-term hippocampal slices. Hippocampus. 5 (5), 425-439 (1995).
  6. Noctor, S. C., Flint, A. C., Weissman, T. A., Dammerman, R. S., Kriegstein, A. R. Neurons derived from radial glial cells establish radial units in neocortex. Nature. 409 (6821), 714-720 (2001).
  7. Noctor, S. C., Martínez-Cerdeño, V., Ivic, L., Kriegstein, A. R. Cortical neurons arise in symmetric and asymmetric division zones and migrate through specific phases. Nature Neuroscience. 7 (2), (2004).
  8. Kapfhammer, J. P., Gugger, O. S. The analysis of purkinje cell dendritic morphology in organotypic slice cultures. Journal of Visualized Experiments JoVE. (61), (2012).
  9. Elias, L., Kriegstein, A. Organotypic slice culture of E18 rat brains. Journal of Visualized Experiments JoVE. (6), e235(2007).
  10. Nishiyama, A., Komitova, M., Suzuki, R., Zhu, X. Polydendrocytes (NG2 cells): multifunctional cells with lineage plasticity. Nature Reviews Neuroscience. 10 (1), 9-22 (2009).
  11. Haber, M., Vautrin, S., Fry, E. J., Murai, K. K. Subtype-specific oligodendrocyte dynamics in organotypic culture. Glia. 57 (9), 1000-1013 (2009).
  12. Bin, J. M., Leong, S. Y., Bull, S. -J., Antel, J. P., Kennedy, T. E. Oligodendrocyte precursor cell transplantation into organotypic cerebellar shiverer slices: a model to study myelination and myelin maintenance. PloS one. 7 (7), (2012).
  13. Birgbauer, E., Rao, T. S., Webb, M. Lysolecithin induces demyelination in vitro in a cerebellar slice culture system. Journal of Neuroscience Research. 78 (2), 157-166 (2004).
  14. Harrer, M. D., von Budingen, H. C., et al. Live imaging of remyelination after antibody-mediated demyelination in an ex model for immune mediated CNS damage. Experimental Neurology. 216 (2), 431-438 (2009).
  15. Fancy, S. P. J., Harrington, E. P., et al. Axin2 as regulatory and therapeutic target in newborn brain injury and remyelination. Nature Neuroscience. 14 (8), 1009-1016 (2011).
  16. Zhu, X., Hill, R. A., Dietrich, D., Komitova, M., Suzuki, R., Nishiyama, A. Age-dependent fate and lineage restriction of single NG2 cells. Development. 138 (4), 745-753 (2011).
  17. Hill, R. A., Patel, K. D., Medved, J., Reiss, A. M., Nishiyama, A. NG2 Cells in White Matter But Not Gray Matter Proliferate in Response to PDGF. Journal of Neuroscience. 33 (36), 14558-14566 (2013).
  18. Zhu, X., Bergles, D. E., Nishiyama, A. NG2 cells generate both oligodendrocytes and gray matter astrocytes. Development. 135 (1), 145-157 (2008).
  19. Novak, A., Guo, C., Yang, W., Nagy, A., Lobe, C. G. Z/EG, a double reporter mouse line that expresses enhanced green fluorescent protein upon Cre-mediated excision. Genesis. 28 (3-4), 147-155 (2000).
  20. Soriano, P. Generalized lacZ expression with the ROSA26 Cre reporter strain. Nature Genetics. 21 (1), 70-71 (1999).
  21. Hirrlinger, P. G., Scheller, A., et al. Expression of reef coral fluorescent proteins in the central nervous system of transgenic mice. Molecular and Cellular Neuroscience. 30 (3), 291-303 (2005).
  22. Nave, K. -A. Myelination and support of axonal integrity by glia. Nature. 468 (7321), 244-252 (2010).
  23. Rivers, L. E., Young, K. M., et al. PDGFRA/NG2 glia generate myelinating oligodendrocytes and piriform projection neurons in adult mice. Nature Neuroscience. 11 (12), 1392-1401 (2008).
  24. Dimou, L., Simon, C., Kirchhoff, F., Takebayashi, H., Gotz, M. Progeny of Olig2-expressing progenitors in the gray and white matter of the adult mouse cerebral cortex. The Journal of Neuroscience. 28 (41), 10434-10442 (2008).
  25. Kang, S. H., Fukaya, M., Yang, J. K., Rothstein, J. D., Bergles, D. E. NG2+ CNS glial progenitors remain committed to the oligodendrocyte lineage in postnatal life and following neurodegeneration. Neuron. 68 (4), 668-681 (2010).
  26. Ioannidou, K., Anderson, K. I., Strachan, D., Edgar, J. M., Barnett, S. C. Time-lapse imaging of the dynamics of CNS glial-axonal interactions in vitro and ex vivo. PloS one. 7 (1), e30775(2012).
  27. Ghoumari, A. M., Baulieu, E. E., Schumacher, M. Progesterone increases oligodendroglial cell proliferation in rat cerebellar slice cultures. Neuroscience. 135 (1), 47-58 (2005).
  28. Azim, K., Butt, A. M. GSK3β negatively regulates oligodendrocyte differentiation and myelination in vivo. Glia. 59 (4), 540-553 (2011).
  29. Hussain, R., El-Etr, M., et al. Progesterone and nestorone facilitate axon remyelination: a role for progesterone receptors. Endocrinology. 152 (10), 3820-3831 (2011).
  30. Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue. Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 8 (10), 839-845 (2007).
  31. Lubetzki, C., Demerens, C., et al. Even in culture, oligodendrocytes myelinate solely axons. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (14), 6820-6824 (1993).
  32. Demerens, C., Stankoff, B., et al. Induction of myelination in the central nervous system by electrical activity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (18), 9887-9892 (1996).
  33. Wood, P. M., Bunge, R. P. Evidence that sensory axons are mitogenic for Schwann cells. Nature. 256 (5519), 662-664 (1975).
  34. Stevens, B., Tanner, S., Fields, R. D. Control of myelination by specific patterns of neural impulses. The Journal of Neuroscience. 18 (22), 9303-9311 (1998).
  35. Stevens, B., Porta, S., Haak, L. L., Gallo, V., Fields, R. D. Adenosine: a neuron-glial transmitter promoting myelination in the CNS in response to action potentials. Neuron. 36 (5), 855-868 (2002).
  36. Wake, H., Lee, P. R., Fields, R. D. Control of local protein synthesis and initial events in myelination by action potentials. Science. 333 (6049), New York, N.Y 1647-1651 (2011).
  37. Rosenberg, S. S., Kelland, E. E., Tokar, E., De la Torre, A. R., Chan, J. R. The geometric and spatial constraints of the microenvironment induce oligodendrocyte differentiation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (38), 14662-14667 (2008).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

NG2Time lapseCerebellum

מאמרים קשורים