מתקן דג זברה המתאים לגידול ומחקר in vivo בנוי בצורה קלה ומשתלמת. התחזוקה מינימלית. מתקן זה אידיאלי למעורבות סטודנטים ולמחקר עצמאי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
In vivo מחקר הביו-רפואי הוא ציר מרכזי לתרגם בממצאים חוץ גופית להתקדמות קלינית. מוסדות אקדמיים קטנים עם משאבים מוגבלים מוצאים את זה כמעט בלתי אפשרי לבנות ולתחזק מתקני מכרסמים אופייניים למחקר. מחקר דג הזברה כבר הוכיח להיות חלופה רבת ערך למחקר in vivo בפרמקולוגיה, פיזיולוגיה, פיתוח ומחקרים גנטיים. מאמר זה מדגים כי מתקן דג הזברה פונקציונלי יכול להיות בנוי בצורה קלה ובמחיר סביר. אנו מראים כי מתקן כזה יכול להיות בנוי כביום עבודה עם כלים ומומחיות מינימאליים. עלות מתקן דג הזברה 27 1.8 L האקווריום נבנה במחקר זה הייתה כ 1500 $. אנו מעריכים כי התחזוקה של מושבה דגים ראשונית עבודה 150 במשך 3 חודשים היא 1,000 דולר. תלמידים זה פרויקט מעורב, שהוכנסו לaquaculturing של דג הזברה למחקר מציע.
מבוא
In vivo מודלים חיוניים במחקר ביו-רפואי מקיף שכן הם מאפשרים במחקר מבחנה להיות מתורגמים ברמת המערכת והאורגניזם. לדוגמא, מחקר עם יונקים קטנים, כלומר מכרסמים, הוכח צורך בפיתוח תרופות ובשיפור של תרופות זמינות. עם זאת, את המורכבות (כספי ולוגיסטי) עלולות להפוך אותו לכמעט בלתי אפשרי לבנות ולתחזק מתקני מכרסם לניסויים במוסדות אקדמיים מציע מחקר קטנים. עם זאת, במחקר vivo יכול להתבצע באמצעות בעלי חיים אחרים הדורשים לוגיסטיקה פחות משוכללת. דג הזברה (Danio rerio) שימש בהצלחה כמודל in vivo ללמוד גנטיקה, התפתחות, הפתופיזיולוגיה, ו1,2,10,11,12 פרמקולוגיה. המתקנים הנדרשים לבית דג הזברה לניסויים הם יחסית פשוטים ומשמעותי פחות יקר בהשוואה לrמתקני אודנט. קים et al. 3 תארו לאחרונה בפירוט מערכת דיור דג הזברה 80 טנק שיכול להיות בנויה לכ -1,500 דולרים, שכולל שני חלקים ועלויות עבודה. זה עומד בניגוד מוחלט לכמעט 8500 $ שיידרשו לרכוש מערכת מוכנה, 80 טנקים ממספר כלשהו של ספקים מסחריים. עם זאת, התיאור שניתן על ידי אל קים et. יכול להיות מסובך וקשה לעקוב אחרי יותר עבור משתמשים חדשים של מחקר דגים. אנו מאמינים כי מתקן דג הזברה יכול להיות בנוי באופן פשוט להשקעה של 1,500 דולר.
הקמת מתקן in vivo במוסדות אקדמיים קטנים מספקת הפקולטות שלהם כלי נוסף שבה לייצר מחקר יותר חזק ויסודי. במבחנה נתונים נתמכים על ידי in vivo תוצאות בדרך כלל לייצר מחקר ביו-רפואי מקיף יותר מאשר נתונים המתקבלים באמצעות רק בגישות חוץ גופית. לכן,יישום מתקן מחקר in vivo ישפר במידה ניכרת את הצלחת המוסד במאמצי המחקר הכולל שלה (חשיפת סטודנט למחקר, פרסומים, תקשורת, מרדף אחר מימון חיצוני, וכו '.).
הקמת מתקן דג הזברה כמו זה שתואר במחקר זה היא אידיאלית עבור מוסדות אקדמיים מחקריים עם מתקנים מוגבלים (או במוסדות ללא in vivo מתקני מחקר) בהצרת פעמים פיננסיות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הערה: פרוטוקולים אלה עוקבים אחר ההנחיות בIACUC של Presbyterian מכללה.
1. חומרים רוכשים מפורטים בטבלה 1.
2. להרכיב 5 המדף Chrome על פי הוראות היצרן. זה ישמש לבית המתקן.
3. לבנות מערכת סינון (איורים 1 א ו -2) המאגר והמים.
- שימוש באיור 1 א כמדריך, פריסת דלי 18 ליטר, משאבה, המסננים ומנורת UV כדי לקבוע את מיקום התקנה סופית וגודל.
- ברגע שהחלקים מונחים, למדוד ולחתוך "צינור PVC ¾ לאורך הדרוש להרכבה. להשתנות האורכים של כל הצינורות בהתאם לצרכים ספציפיים ומגבלות שטח.
- להרכיב צינורות ואביזרים כפי שהותווה בעבר תוך שימוש בפריימר PVC והמלט, ראה להלן (3.3.2 ו3.3.3).
- חול קצות החתך של הצינור עם נייר זכוכית עד שהם חלק למגעד אין פסולת.
- ראש מחוץ לצינור ואת החלק הפנימי של הולם עם פריימר PVC שנרכש עם הספוגית הכלולה מפריימר PVC.
- מלט הצינור והולם יחד על ידי יישום מלט PVC לחלק החיצוני של הצינור באמצעות הספוגית הכלולה. חזור לכל הצעדים שצריכים מלט PVC.
- מניחים את דלי 18 ליטר לצד אחד של בניית המדף.
- התקן מחבר מחיצה בצד של טנק המאגר.
- צרף "צינור PVC ¾ למחיצה.
- חבר את הקצה השני של "צינור לכניסת המשאבה באמצעות ¾" ¾ הליכי להפוך הולם.
- חבר את המסננים למשאבה באמצעות שני מרפקים 90 מעלות ו¾ "צינור PVC.
- השתמש במסנן נייר אחד ואחריו מסנני פחם פעילים אחד כדי לסנן פסולת ולהפחית את רמות הכלור וכימיות במים.
- חבר את מנורת UV לaccordi המסנניםng להוראות היצרן.
- צרף את מערכת סינון המשאבה והצד העליון של המדף הראשון של המתלה באמצעות קשרי חוט. להשתנות סדר ההרכבה והמצורף בהתאם לגודל והפריסה של המדף / המדף שנבחר.
- להוסיף bioball 1 לגלון מים למאגר המים ברגע שמערכת מסנן המשאבה והם התאספו ומחוברים למדף.
4. לבנות הקו הראשי האספקה (1B דמויות ו -2).
- למדוד ולחתוך חתיכה של ¾ "צינור PVC כדי לחבר את מנורת UV לאספקה העיקרית
- השתמש "טי PVC להתחיל נתיב האספקה העיקרית על ידי חיבור טי ל¾" ¾ פליטת PVC מגיעה ממסנן UV. .
- להוסיף שסתום על-off לתחתית טי PVC לשמש ניקוז לשטיפת תחזוקה של המערכת.
- התחל נתיב האספקה העיקרית של מהחלק העליון של ¾ "טי PVC על ידי מדידה וחיתוך ¾" PVCצינור לאורך רצוי לספק צינורות הזנה לכל אחד מהמדפים על המדף.
- התקן ¾ "טיז PVC לקווים אופקיים שייכנסו כל מדף של המדף.
- לחלופין (והציע), להוסיף ¾ "על-off שסתום עבור כל קו אספקת מדף כדי לאפשר בידוד של כל מדף ועיצוב המודולרי של המערכת.
- השתמש "צינור PVC ¾ כלחץ צמצום קו על המדף העליון. אם הקו הזה פועל על חלקו האחורי של המדף, להשתמש מדף זה לאחסון. בסופו של לחץ צמצום קו בקו הפליטה העיקרי (איור 1) עם ¾ "שסתום על-off.
- ברגע שהצעדים לעיל הושלמו, ראש ולחזק את צינור PVC יחד כפי שנעשו בעבר בעת בניית מערכת המאגר וסינון.
5. לבנות הקו הראשי הפליטה (1C דמויות ו -2).
- הפעל את האורך האנכי של קו הפליטה העיקרי לצד השני של f המדף האחררום נתיב האספקה העיקרית. השתמש בצינור PVC 2 "עבור קו אנכי זה כדי לקבל את נתיב האספקה העיקרית בשורות העליונה וניקוז מהטנקים דגים מכל מדף.
- חותך את החתיכות של 2 "צינור PVC לקו הפליטה העיקרי האנכי ולהשתמש 2" טיז PVC לקבל קווי ניקוז האקווריום מכל מדף. בסופו של קו הפליטה העיקרי במניות הטנק לגרש את המים הממוחזרים על פילטר ספוג.
- חותך אינץ 'אחד פתיחה לכל אורך חלקי צינור 2 "PVC ולצרף לקו פליטה העיקרי אנכי עם PVC T לקווי ניקוז אופקיים מהטנקים הדגים.
- כובע 2 "קווי ניקוז אופקיים עם 2" כובע PVC.
- ראש ולחזק את החלקים באמצעות אביזרים הדרושים (מחברים, פטמות או מרפקים).
6. לבנות טנקי דגים (איור 3).
- עם המקדחה, לחתוך "חור בחלק האחורי של האקווריום 1" 1 1/8 מתחת לקצה העליון במסור חור.
- החלק "מתאם הליכי ¾ זכר PVC (עם טבעת 18 # O המצורף) דרך החור (מהחלק הפנימי של המכל לבחוץ).
- צרף ולהדק 90 מעלות 3/4 "הליכי מרפק PVC למתאם הזכר ליצירת צינור פליטת האקווריום. להוסיף חתיכת רשת בסדר לפני הברגת אגוז ההחזקה כדי למנוע דג הזברה עוברת מערכת הפליטה.
- מניחים את האקווריום עם סיום צינור הפליטה שלו למרחב הפתוח של קו הניקוז מאחורי הטנקים
7. החל מערכת המים
- בכמה מכולות, כמו זו המשמשת למאגר, למדוד שלוש פעמים את כמות מים הכלול בתוך המערכת. בואו מים זה לעמוד בטמפרטורת חדר למשך אוויר במשך 48 שעות.
- מוסיף מים למערכת ולתת לו לזרום למינימום של 3 ימים.
- להחליף את המים במערכת במרץ לאורך 3 הימים הראשונים של מחזור דם כדי להיפטר המערכת של tha מזהמיםt מתגורר בתוך הצינורות.
- להוסיף דג הזברה המתנע ולאפשר מחזור החנקן להתבסס. לנרמל pH ל7. עקביים שמור שבע דג הזברה ל1.8 L, ולהאכיל אותם פעמיים ביום במהלך ימי שבוע ופעם ביום במהלך סופי השבוע כפי שהוצע על ידי 4 Linbo וMcNabb 6.
- צג חנקתי (<75 מ"ג / ליטר), ניטריט (<10 מ"ג / ליטר), ואמוניום (0 מ"ג / ליטר) ביום בשבוע הראשון לאחר הוספת דגים, ורמות פעמיים בשבוע רצויים פעם אחת נשמר עם שינויי מים סדירים .
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
בנייה של מערכת השאיבה וFlters
ברגע שהמדף מורכב ולהגדיר את הצעד הראשון הוא לבנות את מערכת המשאבה ומסנן. המסננים מחוברים למשאבת המערכת ונמצאים מעל לרמה התחתונה של המדף הראשון, המאפשר לתחזוקת מסנן קלה והחלפה. באופן דומה, מנורת UV מחוברת עם צינור PVC למסנן ונערכה במקום עם קשרי חוט פלסטיק כדי לאפשר להחלפה קלה של מנורת UV לפי צורך (איור 4 א). מייד לאחר משאבת מסנן נייר, מסנן פחם פעיל, ומנורת UV מותקנים באמצעות צינור PVC. Bioballs מתווספים לטנק כדי לספק משטח...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מטרתו העיקרית של מאמר זה היא להוכיח כי הקמת מתקן דג הזברה פונקציונלי היא לא מסובכת ויכולה להיות שנבנתה על ידי חוקרי דגי טירון עם ידע מינימאלי בנייה. יתר על כן, מאמר זה מראה כי החומרים למתקן דג הזברה פונקציונלי זה ניתן לרכוש בקלות ובעלות סבירה מחנויות אספקת חיית מחמד מקומיות או חנויות לחומרי בניין. ברגע שכל החומרים והכלים שרכשו את בנייתה של המערכת והטנקים הדגים לוקח בערך יום עבודה. 72 שעות ההפעלה הראשונה מאפשרת כישלון כלשהו במערכת, כגון דליפות או לחץ מים נמוך, שייקבע. זה הפעלה הראש...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שום ניגוד עניינים למאמר זה.
תודות
המחברים מבקשים להודות למשרד המחקר של בית הספר לרוקחות במכללה Presbyterian לתמיכה כספית של פרויקט זה באמצעות בית מרקחת פרסים הקטן למחקר ולשיתוף פעולה בפרס (SPARC). המחברים מודים למר ג'ון Smink, מנהל המעבדה לחקר Aquatic בעלי החיים, אוניברסיטת קלמסון, קלמסון, SC לתיקון כתב יד סיוע הטכני שלו.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| פריט | כמות | מותג | |
| 74 אינץ' H x 48 אינץ' רוחב x 18 אינץ' D 5 מדף פלדה עצמאית יחידת מדפים | סגנון | בחירה 1 | |
| 18 ליטר כללי דלי / תיק | סנטרקס פלסטיק: LLC תיק מחוספס | 1 | |
| רצועת חשמל עם 6 שקעים עם כבל 15 רגל | חשמלאי ראשי | 1 | |
| 9 וואט UV Water Garden Clarifier FiIter ומנורת UV | Smartpond | ||
| מסנן החלפת מים לכל הבית | מערבולת | 6 | |
| אטום לכל הבית דיור סינון מראש | מערבולת | 2 | |
| חוט איטום סרט | וויליאם ה. הארווי | 1 | |
| 8 אונקיות LO-VOC PVC צמנט | Oatey | ||
| אונקיות נוזל פריימר LO-VOC | Oatey | ||
| 1/4 אינץ' x 100 רגל ויניל טפטוף חלוקת צינורות חלוקת | מיסטר נוף | ||
| 1/4 אינץ' שסתום הפעלה/כיבוי השקיה בטפטוף | מיסטר Landscaper | 33 | |
| סעפת השקיה NPT 9 יציאות עם מסנן | מיסטר Landscaper | 6 | |
| פילטר נפתח עם בית | מערבולת | 6 | |
| 2 אינץ' קוטר 90 מעלות PVC מרפק | LASCO | 3 | |
| 2 אינץ' קוטר 90 מעלות טי | LASCO | 3 | |
| 3/4 אינץ' קוטר 90 מעלות החלקה מרפק | LASCO | 15 | |
| 3/4 אינץ' קוטר PVC מתאם | LASCO | 7 | |
| 3/4 אינץ' קוטר PVC טי | LASCO | 12 | |
| 2 אינץ' קוטר PVC כובע | LASCO | 3 | |
| 1 בקוטר x 3/4 אינץ' קוטר PVC מתאם | LASCO | 2 | |
| 3/4 אינץ' שקע PVC בשורה שסתום כדור | שסתום אמריקאי | 5 | |
| 1/2 אינץ' קוטר x 3/4 אינץ' קוטר PVC מתאם | Lasco | 8 | |
| 3/4 אינץ' קוטר PVC כובע | Lasco | 1 | |
| 2 אינץ' x 5 רגל צינור Pvc | צינור שרלוט | 4 | |
| ¾-In x 10-Ft צינור Pvc | צינור שרלוט | 3 | |
| 11/16x1-7/80 טבעת PVC | SXT | 10 | |
| ½ ” מתאם זכר PVC | SXT | 1 | |
| ¾ ” צימוד PVC | SXT | 1 | |
| ½ ” מתאם נקבה PVC | SXT | 1 | |
| link | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾ ” מתאם זכר PVC (עם טבעת O #18) | SXT | 28 | |
| 90 מעלות ו-frac34; ” מרפק PVC מושחל | SXT | 27 | |
| רשת עדינה | N / A | 1 חצר | |
| מחבר מחיצה | N / A | 1 | |
| מסור N | / A | 1 | |
| מקדחה | N / A | 1 | |
| מסור חורים | N / A | 1 | |
| מפתח ברגים מתכוונן | N / A | 1 | |
| צבת | לא ישים | 1 | |
| סרט מדידה | N/A | 1 | |
| משקפי בטיחות | N/A | 1 | |
| כפפות עבודה | N/A | 1 |
מקורות
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. Modular, easy-to-assemble, low-cost facility. Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196(2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
