יצירה אנטומית מדויק והשחזור תוך גולגולת xenografts של גידולים במוח אדם

סיכום

המוח הוא אתר ייחודי עם איכויות שאינם מיוצגות היטב על ידי במבחנה או ניתוחים מחוץ לרחם. מודלים עכבר orthotopic עם מאפייני מיקום וצמיחה לשחזור ניתן ליצור באופן אמין עם זריקות תוך גולגולתי באמצעות מכשיר קיבוע stereotaxic ומשאבת מזרק בלחץ נמוך.

תקציר

מודלים גידול Orthotopic כרגע הדרך הטובה ביותר ללמוד את המאפיינים של סוג גידול, עם ובלי התערבות, בהקשר של בעלי חיים חיים - במיוחד באתרים עם איכויות פיסיולוגיות ואדריכליות ייחודיות כגון המוח במבחנה ומודלים מחוץ לרחם לא יכולים. דין וחשבון על תכונות כגון כלי דם, מחסום דם מוח, חילוף חומרים, אספקת סמים ורעילות, וכן שורה של גורמים רלוונטיים אחרים. דגמי Orthotopic המגבלות שלהם מדי, אבל עם תאי גידול טכניקה נכונים של עניין יכולים להיות engrafted במדויק לרקמה שרוב מקרוב תנאים מחקה במוח האנושי. על ידי שימוש באמצעים המספקים כמויות נמדדו בדיוק למקומות מוגדרים באופן מדויק בקצב עקבי ולחץ, מודלים עכבר של גידולים במוח אנושיים עם שיעורי צמיחה צפויים ניתן ליצור reproducibly ומתאימים לניתוח אמין של התערבויות שונות. הפרוטוקול המתואר כאן מתמקד בteפרטי chnical של תכנון והכנה להזרקה תוך גולגולתי, ביצוע הניתוח, ולהבטיח את צמיחת גידול מוצלחת ושחזור ומספקים מתחילים נקודות עבור מגוון רחב של תנאים הניתנים להתאמה למגוון רחב של דגמי גידול במוח שונים.

מבוא

ניסויים במבחנה של תאי גידול במוח הם לא יסולא בפז עבור לנתח מנגנונים מולקולריים המשפיעים על צמיחה, הישרדות, נדידה, ופלישה של תאים סרטניים; ניסויי תאים בתרבית יכולים להגדיר מסלולי איתות, מציעים מטרות טיפוליות אפשריות, ולאפיין את התגובה תאית לטיפול תרופתי. אבל במבחנה מערכות הן הרבה יותר מדי פשטניות לנבא תגובת האורגניזם לתרופות; הם חסרים את התגובות הפיזיולוגיות, תגובות חיסוניות, microenvironment תא, וההטרוגניות כוללת של מערכות חי בעלי חיים. מבחינה גנטית מודלים מהונדסים יכולים להיות יקר, כאשר זמינים, אך הבדלים מולקולריים קיימים בין מינים ותאים עכבריים לא יכול לשחזר אירועים בתהליכים אנושיים, וכתוצאה מכך פערים משמעות....

פרוטוקול

כל ההליכים המתוארים היו נבדקו ואושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים ושימוש המוסדית שלנו.

.1 תכנית הניסוי

1. בחר תאים להיות מוזרק. תאים ממגוון רחב של מקורות הם מועמדים להזרקה: קווי תרבית תאים חסיד, שיבוטים מהונדסים גנטי, תאי neurosphere, תרבויות עיקריות, או גידולים מפוצלים. הסוג של המודל הרצוי יגדיר את האתר המתאים ביותר להזרקה.
   1. לקבוע מספר תא להזרקה. מספר התאים הדרושים ליצירת של גידולים מ....

תוצאות

ניתן ליצור xenografts תוך גולגולתי אמין עם טכניקה מתוארת זה. זיהוי המבנים הקריטיים של גולגולת העכבר (איור 1) יאפשר להכרה בגבחת ולהנחות את החוקר למיקום מדויק ושחזור הזרקה. במחקרים אלה את הקו של הורי U251, תאי U251 transfected עם לוציפראז (U251 לוק), או U87 הונצחו תאי תרבות אנושיים GBM רקמות הושעו ב4 עד 6 μl של SF-DMEM והזריקו 2.5 מ"מ קדמי לרוחב (מימין), 1.5 מ"מ , ו3.5 מ"מ הגחון ביחס לגבחת (איור 2).

דיון

מודלים עכבר orthotopic של סרטן המוח אנושי יכולים להיות כלי מצוין להערכת היעילות של טיפולים קליניים, אך יש להקפיד כדי לייעל את המיקום של תאים ברקמת המוח. מחקרים הראו כי כמויות מופרזות aliquot, טכניקת הזרקה תת אופטימלית ושיעורי זריקה חפוזים עלולות לגרום לדליפות וההופעה של תאים סרטניים במקומות לא רצויים (חדרי לב, עמוד השדרה, אזורי extradural, וכו '.) וגבוהה וריאציה בגודל גידול ² (תצפיות אישיות ). ניתוח של אספקה ​​המונע על ידי מעבד זעיר של דגימות noncellular מצ.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
<חזק>ציודמכשיר
סטריאוטקסי בעל חיים קטן עם קונסולת תצוגה דיגיטלית	Kopf	דגם 940
מחזיק ראש הרדמה גז עכבר	Kopf	דגם 923-B
מוטות אוזניים עכבר	Kopf	Medel 922
סיבים אופטיים תאורה	פישר	12-562-36
UltraMicroPump III	WPI	UMP3
Micro4 מיקרו-מעבד	WPI	UMC4
מקדחה סיבובית ידנית במהירות משתנה	Dremel	דגם 300
מקדחה דנטלית, מתאם	514554		Spoelting
למקדח שיניים: קולט 3/32 אינץ'	Dremel	481
כרית			לעכברים
		אידוי איזופלורן	לעכברים
צינורות ומחברים			לחיבור וופורייזר איזופלורן עם מסגרת
<חזק>מכשירים
דיוק 25 μ l מיקרו-מזרק	המילטון	7636-01	דגם 702, ללא מחט
מחטי מיקרו-מזרק, 26 שניות G	המילטון	7804-04	RN, סגנון נקודה 25 מ"מ 2
מספריים עדינים (ישרים, חדים/חדים)
מספריים סטנדרטיים
מלקחיים
סטנדרטיים המוסטטים משוננים (2)
מלקחיים
<חזק>אספקהתפרים
חזקים 5-0 ויקריל P-3 13 מ"מ (אתיקון)	MWI	J463G
להבים כירורגיים #10, אל חלד (נוצה)	פישר	296#10
איזופלורן (פלוריסו)	VetOne	NDC 13985-528-60	פריט #502017. הרדמה באינהלציה נוזלית. החוק הפדרלי מגביל את השימוש בתרופה זו על ידי או בהוראת וטרינר מורשה.
קרפרופן (הזרקת רימאדיל 50 מ"ג/מ"ל)	פייזר	NDC 61106-8507-01	מדולל במי מלח
משחת עיניים (דמעות מלאכותיות)	רוגבי	NDC 0536-6550-91
אנטיביוטיקה מקומית (AK-Poly-Bac)	Akorn	NDC 17478-238-35
פובידון-יוד חומר חיטוי מקומי, 10% (בטאדין)	בטדין	NDC 67618-150-04
מי חמצן, 30%	פישר	H325-100	להמחשת ציוני דרך בגולגולת
מלח סטריליים	VetOne	NDC 13985-807-25	לדילול תמיסות, ניקוי רקמות
שעוות עצם	WPI	פריט #501771
וילונות סטריליים	McKesson	25-517
כפפות כירורגיות סטריליות	McKesson	(להתאמה)
רפידות גזה סטריליות, 2 x 2	Fisherbrand
רפידות גזה סטריליות, 4 x 4	Fisherbrand	22-415-469
רפידות הכנה לאלכוהול (בינוניות)	PDI	B603
אפליקטורים סטריליים עם קצה כותנה	Fisherbrand	23-400-114
צינור מכסה בורג סטרילי 0.5 מ"ל עם כובעים לתאים	ארה"ב סיינטיפיק	1405-4700	לתאים
פיפטות סטריליות עטופות בנפרד פיפטות דיספו	פישר	BD 357575	לפתרונות ניקוי מחטים
BD מזרקי אינסולין עם מחטים	פישר	329461	למשכך כאבים
70% אתנול			לניקוי
סטרילי diH2O			לניקוי
צינורות מיקרופוגה לפתרונות ניקוי			לפתרונות ניקוי מחטים
עט קצה לבד (ייעודי)			לסימון גולגולת

1.0 מ"מ חימום מערכת רפואיים סטריאוטקסיתבגודל בינונימשוננים עדינים מי 22028556 סטריליות