הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בניתוח חוץ גופייה של תיווך Myd88 הסלולרי תגובה החיסונית לוירוס הנילוס המערבי זיהום הזנים Mutant

7.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/52121

⸱

27 בנובמבר 2014

 ,  ,  ,  , 
1Department of Microbiology & Immunology, The University of Texas Medical Branch, 2Department of Pathology, The University of Texas Medical Branch, 3Center for Biodefense and Emerging Infectious Diseases, Sealy Center for Vaccine Development, The University of Texas Medical Branch

במאמר זה

סיכום

שתי שיטות מבוססות זרימה ציטומטרית - בדיקת תחול תאי T במבחנה וצביעה ציטוקינים תוך תאית שימשו למדידת יכולת הצגת אנטיגן של תאים דנדריטיים ותגובות תאי T ספציפיים לאנטיגן לזיהום מוטנטי בנגיף מערב הנילוס בעכברים.

תקציר

וירוס מוחלש הנילוס המערבי (WNV), (NS) 4B-P38G מוטציה nonstructural, מושרה ציטוקינים מולדים גבוה יותר ותגובות של תאי T מסוג wild-WNV בעכברים. לאחרונה, גורם בידול מיאלואידית 88 איתות (MyD88) הוצגה להיות חשוב ליחול תא T ראשוני ופיתוח תא T הזיכרון במהלך זיהום המוטציה WNV NS4B-P38G. במחקר זה, שני לזרום שיטות מבוססות cytometry - במבחנה assay תא T תחול ומכתים ציטוקינים תאיים (ICS) - נוצלו כדי להעריך תאים דנדריטים (DCS) ופונקציות תא T. בתא T תחול assay, התפשטות תאים נותחה על ידי זרימת cytometry הבא שיתוף התרבות של DCs משני הקבוצות של עכברים עם succinimidyl אסתר carboxyfluorescein (CFSE) - שכותרתו תאי CD4 + T של עכברים הטרנסגניים OTII. גישה זו סיפקה קביעה מדויקת של שיעור מתרבים תאי CD4 + T עם שיפור ברגישות לכללית מאשר המסורת באופן משמעותיאל מבחנים עם ריאגנטים רדיואקטיביים. מערכת צינור microcentrifuge הייתה בשימוש בשני הליכי תרבית התאים ומכתים ציטוקינים של פרוטוקול ICS. בהשוואה למערכת מבוססת צלחת תרבית רקמה המסורתית, הליך שינוי זה היה קל יותר לביצוע ברמת בטיחות ביולוגית (BL) 3 מתקנים. יתר על כן, טופלו תאים נגועים WNV- עם paraformaldehyde בשני מבחני, שאפשרו ניתוח נוסף מחוץ מתקני BL3. בסך הכל, ניתן להשתמש במבחנה מבחני אימונולוגיים אלה כדי להעריך ביעילות מערכת חיסונית בתיווך תא במהלך זיהום WNV.

מבוא

וירוס הנילוס המערבי (WNV), neurotropic, בתוספת חש-flavivirus, הוא איום על בריאות ציבור מתעורר. נכון לעכשיו, אין חיסונים אושרו לשימוש בבני אדם 1. זן WNV מוחלש, שבו יש תחלופה P38G בחלבון 4B nonstructural (NS), ידוע לגרום לא קטלני בעכברים אבל ציטוקינים מולדים גבוה יותר ותגובות של תאי T בעכברים מאשר wild-type WNV NY99 זן 2. עכברים שחוסנו עם המוטציה NS4B-P38G היו מוגנים מפני כל אתגר המשני עם wild-type הקטלני WNV. הדבר מצביע על כך שיש המוטציה NS4B-P38G תכונות מתאימות למועמד אידיאלי חיסון. המנגנונים שבאמצעותם המוטציה NS4B-P38G גורמת חסינות אדפטיבית מגן גבוהה לא ברור הם הבינו עדיין. קולטנים כמו אגרה (TLRs), אשר מכירים הבקשורים דפוסים מולקולריים הפתוגן, ממלאים תפקיד חיוני בייזום של חסינות מולדת לזיהום נגיפי. מסלול איתות TLR ליבה מנצל תגובה הראשונית בידול מיאלואידית gene 88 (MyD88) כמתאם הראשי 3,4. במחקר שנערך לאחרונה, איתות MyD88 הוצגה לשחק תפקיד חשוב בהתפתחות של חסינות תא בתיווך בזיהום המוטציה WNV NS4B- P38G בעכברי 5. תאי Dentritic (DC) הם אחד מתאי מציגי אנטיגן החשובים ביותר מציגים היכולת הייחודית ליזום תגובות תא T העיקרי בזיהום ויראלי 6,7. CD4 + CD8 + ותאי T הן לתרום לחסינות לטווח ארוכה וחשובים להישרדות מארח בעקבות זיהום WNV wild-type 8,9. שני מבחני אימונולוגיים שמשו במחקר זה להעריך את הפונקציות של תאים אלה בעכברים שעברו מוטציה נגועה NS4B-P38G.

ראשית, assay תחול במבחנה תא T נוצל כדי להשוות את יכולת מציגי אנטיגן של DCs של נגוע WNV wild-type וMyD88 - / - עכברים. כדי להגביר את הרגישות של assay, CD4 הנאיבי + תאי T היו מבודדים מעכברים מהונדסים OTII, המבטאים ספציפי Vα2 / Vβ5 TCR לovalbumin העוף פפטיד (OVA) 323 - 339. DCs של עכברים נגועים WNV היה מטוהרים, ושיתוף תרבותי עם carboxyfluorescein succinimidyl פסחא (CFSE ) תאי CD4 + T שכותרתו בנוכחות פפטיד OVA. לאחר 5 ימים של התרבות המשותפת, תאים נקצרו וקבוע עם paraformaldehyde (PFA) ונותחו על ידי הזרימה cytometry. מבחני שגשוג בוצעו באופן מסורתי באמצעות שילוב של 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) או deoxyriboside tritiated הטימין (3 HTdr) 10. עם זאת, מבחני אלה הם או רדיואקטיביים ו / או בצורך של ציוד מיוחד ברמת הבטיחות ביולוגית (BL) 3 מתקנים, שבו מחקרי WNV מתבצעים. ניתוח התזרים cytometric של שגשוג לימפוציטים ידי halving הסידורי של עוצמת הקרינה של הצבע החיוני CFSE הפך נפוץ יותר במבחנים חיסוניים כצבע הוא יותר ביציבותושולב באופן שווה לתאים, זוהה בקלות על ידי cytometry זרימה, והוא nonradioactive 11. Assay יש גם את היכולת להעריך את מספר חלוקות תא. אחד יתרונות עיקריים של שימוש assay זה במחקרי WNV הוא שקיבוע של התאים הנגועים ב1-2% PFA יכול להשבית 12 WNV, אשר יאפשר רכישת מדגם עם cytometer זרימה במעבדה BL2.

בשלב הבא, הליך מכתים ציטוקינים תאיים שונה (ICS) שימש כדי ללמוד את התפקיד של MyD88 איתות ברגולציה של תגובות תא T הספציפיות WNV בעכברים הנגוע במוטציה NS4B-P38G. ב assay זה, טופלו splenocytes מבודד מעכברים נגועים במבחנה עם פפטידים ספציפיים WNV. Brefeldin התווסף ללשמור ציטוקינים בתוך התא. אחרי 5 שעות דגירה, תאים נקצרו, שטפו ומוכתמים עבור תת תא T. תאים אז היו קבועים בPFA, permeabilized ומוכתמת לאינטרפרון -γ (IFN) ונותחו על ידי זרימת cytometry.כמו עם assay זרימה אחר מבוסס cytometry, פעם אחת מטופלות התאים עם קיבעון וחיץ permeabilization מכיל PFA, ניתן להעביר דגימות נגועות למעבדה BL2 לעיבוד וניתוח נוספים. במספר מחקרים שפורסמו, השתמשנו ICS למדוד פונקציות מפעיל סלולארי T בעכברים נגוע WNV 13,14. למרות שזה מבוסס היטב, חסרון עיקרי אחד של assay זה הוא שההליך הוא ארוך מאוד ויכול להיות זמן רב יותר כאשר היא מבוצעת בתוך מתקני BL3. כאן, שיטה מבוססת ICS צינור מיקרו צנטריפוגות הוצגה להיות יותר ריאלי, קל יותר להמשיך ופחות זמן רב כאשר היא מבוצעת בתוך מעבדה BL3.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בבעלי החיים אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטת טקסס רפואית הסניף.

1. בידוד של DCs מעכברים נגועים ללא ונגוע WNV

  1. התאמה לגיל ושיסוד פעילות המינית 6-10 בן שבוע, wild-type C57BL / 6 (B6) וMyD88 - / - עכברים. לחסן intraperitoneally (IP) עם 500 יחידות פלאק ויוצרים (PFU) של המוטציה WNV NS4B- P38G. ביום 3 לאחר פגיעה, להרדים MyD88 B6 ו-- / - עכברים עם CO 2. השתמש בעכברים שאינם נגועים בשתי הקבוצות שולטת. השתמש בשלושה עכברים מכל קבוצה.
  2. פרווה רטובה על צד השמאלי של עכבר הקריב באמצעות אתנול 70% וחתכה את הפרווה בצד השמאלי של העכבר, כמחצית דרך בין החלק הקדמי ורגליו האחוריות. גזור לפתוח את חלל הגוף. הסר את הטחול באמצעות המלקחיים. מניחים את הטחול בצלחת פטרי עם RPMI.
  3. לבודד DCs טחול באמצעות חרוזים מגנטיים אנטי-CD11c פיהוראות היצרן.

2. טיהור ותיוג של תאי T של עכברים הטרנסגניים OTII

  1. קציר טחול אחד מעכבר OTII נאיבי כמתואר בשלב 1.2 לעיל וhomogenize הטחול בין הקצוות החלבית של שתי שקופיות. מעביר את ההשעיה לתא צינור חרוטי 15 מיליליטר, להוסיף בינוני RPMI עד 14 מיליליטר. בואו ההשעיה לשבת במשך 5 דקות ולהעביר 13 מיליליטר של אותו צינור חרוטי 15 מיליליטר חדש.
  2. בודד תאי CD4 + T טחול באמצעות ערכת בידוד תא CD4 + T על פי הוראות היצרן.
  3. העברת תאים לתוך צינור חרוטי 50 מיליליטר, לשטוף פעמיים עם PBS. תאים גלולים בPBS עם אלבומין 0.5% בסרום שור (BSA) בשעה 1 x 10 6 תאים לכל מיליליטר, ולהוסיף 0.5 μmol / מיליליטר של CFSE. לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, מוגנות מפני אור.
  4. הוסף 5 מיליליטר בינוני מלא קר (RPMI-1640 עם 10% בסרום שור עוברי חום מומת, כרך 1/100אנטיביוטיקה / antimycotics, 1/100 כרך L-גלוטמין ו 1/1000 כרך של 1000 x 2-mercaptoethanol).
  5. דגירה על קרח למשך 5 דקות. לשטוף את תאי פעם עם PBS, לתקן 0.2 x 10 6 תאי CD4 + T שכותרתו ב 2% PFA ולרכוש על cytometer זרימה. השתמש בדוגמה זו כדי לקבוע את הרמה הבסיסית של CFSE. מחדש להשעות את שאר תאים שכותרתו במדיום מלא.

3. תאים Co-תרבות OTII T עם DCs של עכברים נגועים WNV

  1. תרבות 2 x 10 5 תאים של עכברי OTII CD4 + T מטוהרים לבד או עם DCs המטוהר של wild-type או MyD88 - / - עכברים (2 x 10 4) בצלחת גם 24 עם או בלי שאריות OVA 323-339 (ז 1 / מיליליטר) ב 1 מיליליטר בינוני מלא בכל טוב.
  2. דגירה תאים ב 37 מעלות צלזיוס למשך 5 ימים. קציר תאים, לשטוף פעמיים במאגר FACS (PBS עם 1% FBS) ולתקן ב0.25 מיליליטר 2% PFA. מערבולת באופן מיידי.

4. ניתוח תזרים Cytometry של במבחנה </ Em> תא T לקרקע

  1. לרכישה, לחץ לחיצה כפולה על סמל תוכנת cytometry הזרימה. עבור חלקת צפיפות של יניארי FSC-מול SSC-ליניארי, ערוצים בחרו 0 עד 200,000 בFSC-ו0 עד 200,000 על SSC-. ואז ליצור שער על תאי חיים (P2, ראה איור 1 א).
  2. כדי לנתח את עוצמת הקרינה של CFSE, לפתוח את ההיסטוגרמה עבור ערוץ FL1 ולרכוש 20,000 אירועים על האוכלוסייה מגודרת. הגדר את סמן על דגימות תאים בתרבית OTII לבד (איור 1 א).
  3. לרכוש דוגמאות לתאי OTII שיתוף תרבותיים עם DCs wild-type (איור 1) או MyD88 - / - DCS (איור 1 ג) באופן דומה.

5. בידוד וגירוי של Splenocytes לציטוקין מבחני

  1. להדביק B6 וMyD88 - / - עכברים עם המוטציה WNV NS4B-P38G באותו האופן כפי שתואר בSTEp 1.1. ביום 30 לאחר פגיעה, מחדש אתגר ששרד עכברים עם 2000 PFU של ip הזן הפראי סוג WNV בימים 8 ו -21 זיהום על-יסודי WNV או ביום 4 הבאים זיהום משני, להרדים עכברים עם CO 2 לאוסף של טחולים .
    הערה: השתמשנו 2-3 עכברים בכל קבוצה לכל נקודת זמן.
  2. הפוך השעיה תא בודדת של splenocytes כמתואר לעיל בשלב 1.2 ושלב 2.2. ספירת תאים באמצעות hemocytometer מחדש להשעות אותם ב 10 מיליליטר בינוני שלם.
  3. לדלל תאים עם מדיום מלא ל -2.5 x 10 6 תאים / מיליליטר. הוסף 1 מיליליטר של splenocytes בצינור מיקרו צנטריפוגות 1.5 מיליליטר.
  4. כדי לדמות תאי CD8 + T, לדלל פפטידים WNV הספציפי NS4B וE (SSVWNATTA וIALTFLAV) ל1 מ"ג / מיליליטר בDMSO. לגירוי של תאי CD4 + T, לדלל פפטידים WNV הספציפי ns3 ו- E (RRWCFDGPRTNTILE וPVGRLVTVNPFVSVA) ל1 מ"ג / מיליליטר בDMSO. הוסף 10 μl של פפטידים לתאים followeד על ידי 1 μl של פתרון Brefeldin. השתמש בתאים ללא טיפול פפטידים כפקדים. מערבבים את התאים.
  5. אגרוף שני חורים עם מחט G 18 בכובע של הצינור. דגירה תאים ב 37 מעלות צלזיוס למשך 5 שעות.

6. תאיים ציטוקין מכתים

  1. העברת תאי צינור מיקרו צנטריפוגות חדשה. ספין תאים 5 דקות ב300-400 XG ויוצקים את supernatant. הוסף 1 מיליליטר FACS חיץ, ספין 5 דקות ב300-400 XG מחדש להשעות תאים על ידי pipetting עם 120 μl FACS חיץ.
  2. הוסף 2 μl חוסם Fc דגירה תאים בטמפרטורת חדר למשך 10 דקות. הוסף 1 מיליליטר FACS חיץ על צינור אחד. ספין 5 דקות ב300-400 x ז.
  3. להשעות מחדש תאים ב300 μl FACS חיץ ולפצל אותם לשלושה צינורות (כ -0.8 x 10 6 תאים לכל צינור). כפי שניתן לראות בטבלה 1, שומרים לעצמנו את הצינור הראשון של כל מצב תרבות לחולדת צביעת IgG-PE. לצינור השני, להוסיף 3 μl של אנטי-CD4 APC לCD4 תאי פפטידים שטופלו, 3 μl אנטי CD8 FITC לתאים שטופלו-פפטידים CD8 או שניהם הנוגדנים לתאים ללא טיפול פפטידים. השתמש בצינור השלישי לצביעת פיצוי. עבור כל מצב תרבות, להשתמש בשלושה צינורות של תאי CD4 מוכתמים בAPC-מצומדות, CD8 FITC- מצומדות או נוגדני PE- כותרת CD3 לבד (3 μl לכל צינור) כפקדי פיצוי על FL1, fl2 וערוצי FL4.
  4. תאים בקצרה מערבולת. השאר על קרח למשך 20 דקות ולהגן מפני אור. להוסיף 1.4 מיליליטר חיץ FACS. ספין 5 דקות ב300-400 XG ויוצקים את supernatant.
  5. להתסיס לשבש תא גלולה (או בקצרה מערבולת). מחדש להשעות תא גלולה ב250 pipetting solutionby הקיבעון / permeabilization μl. דגירה בטמפרטורת חדר למשך 20 דקות ולהגן מפני אור.
  6. להוסיף 1.2 מיליליטר חיץ FACS. דקות ספין 5 ב300-400 תאי XG וגלולים במאגר FACS 300 μl.
    הערה: בשלב זה, ניתן להעביר תאים למעבדה BL2 לעיבוד נוסף או לאחסן במקרר ומוגן מפני אור לup לשלושה ימים.
  7. הוסף 500 μl FACS חיץ. ספין 5 דקות ב300-400 תאי XG וגלולים ב500 μl של חיץ permeabilization / לשטוף 1x. ספין 5 דקות ב300-400 גר 'x.
  8. להשעות מחדש תאים ב100 μl 1x פרם / לשטוף, להוסיף 3.5 אנטי-IFNγ-PE μl לצינור הוסיף בעבר עם נוגדנים לCD4 ו / או סמני תא CD8 T בשלב 6.3 ועכברוש μl 3.5 IgG-PE בצינור שמורות לשליטת IgG במשך 25 דקות על קרח ולהגן מפני אור. לשטוף את התאים על ידי הוספת 1.4 מיליליטר של חיץ permeabilization / לשטוף 1x. ספין 5 דקות ב300-400 גר 'x. חזור על שלב הכביסה על ידי הוספת 1.4 מיליליטר 1x חיץ permeabilization / לשטוף.
  9. ספין 5 דקות ב300-400 XG ולמזוג supernatant. לשטוף את התאים על ידי הוספת 1.4 מיליליטר של חיץ FACS מחדש להשעות ב400 μl של חיץ FACS לרכישה סופית.

7. ניתוח תזרים Cytometry של תאיים ציטוקין מכתים

  1. השתמש באותן הגדרות כמו בשלב הרכישה 4.1. Create שער על תאי חיים (P2, ראה איור 2 א). התאם את המתח באמצעות צינורות פיצוי לכל אחת מקבוצות.
  2. שני מגרשי נקודה חדשים פתוחים, אחד כדי להציג נתונים שנאספו לFL1 vs. Fl2 (CD8 vs. IFN-γ), והשני הוא להציג נתונים שנאספו לFL4 vs. Fl2 (CD4 vs. IFN-γ). לרכוש 50,000 אירועים לאוכלוסייה מגודרת של כל דגימה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

בassay תא T תחול, תאי CD4 + T CFSE שכותרתו היו בתרבית עם DCs מטוהר מנגוע המוטציה wild-type NS4B-P38G וMyD88 - / - עכברים בנוכחותו או היעדריו של פפטידים OVA. תאי T שכותרתו בתרבית לבד עם או בלי OVA במשך 5 ימים שמשו כקבוצת ביקורת שלילית. כפי שניתן לראות באיור 1 א, הכולל תאי T היו סגור לניתוח של עוצמת הקרינה בערוץ FL1. הסמן הוקם על בסיס תאי CD4 + T שכותרתו הטרי ביום 0 כדי לקבוע את קצב ההתפשטות ללא שיתוף התרבות של DCs. הייתה רמה נמוכה ש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

WNV הוא פתוגן BL3. בשל תקנות בטיחות, מבחני אימונולוגיים עם דגימות נגועות WNV לעתים קרובות מוגבלים על ידי הזמינות של ציוד במתקנים BL3 או יותר ארוכים ומייגע לבצע. במחקר שנערך לאחרונה, השתמשנו בשתי שיטות מבוססות cytometry זרימה ללמוד תגובות חיסוני בתיווך תא במהלך זיהום WNV 5. בשני מבחני, טופלו תאים נגועים בWNV עם 1-2% PFA ישירות או עם פתרון הקיבעון / permeabilization המכיל 4% PFA. זה ידוע כי 1% קיבעון PFA של תאים נגועים בנגיף ביעילות יכול להפחית את מספרם של חלקיקים מזהמים ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

יש לי המחברים אין לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי NIH ל-T.W. (R01AI072060 ו-R01AI099123). G. Xie נתמך על ידי מלגת קדם-דוקטורט של מרכז Sealy לפיתוח חיסונים. אנו מודים לד"ר ריצ'רד פלאוול (המכון הרפואי הווארד יוז, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת ייל, ניו הייבן) ולד"ר שיזואו אקירה (אוניברסיטת אוסקה, יפן) על אספקת עכברי MyD88–/– ולד"ר Y Cong (UTMB, גלווסטון) על אספקת עכברים טרנסגניים OTII.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
RPMI 1640Invitrogen11875מתחמם ב-37 מעלות; C
Anti-CD11c חרוזים מגנטייםMiltenyi Biotec130-052-001עוקבים אחר היצרן הוראות
חרוזים מגנטיים נגד CD4Miltenyi Biotec130-095-248עקוב אחר היצרן' s הוראות
CFSEInvitrogenC34554
שאריות OVA 323-339Genscript CorporationRP10610
פפטידיםProimmunePC0AD-D
Brefeldin A תמיסהBD Bioscience555029
Mouse Fc Blockere-Bioscience14-0161-85
CD4מצומד APCe-Bioscience17-0041-81
CD8 מצומד FITCe-Bioscience11-0081-82
פתרון קיבוע/פרמביליזציהBD-Bioscience554722
מאגר פרמיביליזציה/שטיפהBD-Bioscience554723
אנטי-IFNγ-PEe-Bioscience12-7311-82
ציטומטר זרימהAccuri BD מדע ביולוגי

מקורות

  1. Campbell, G. L., Marfin, A. A., Lanciotti, R. S., Gubler, D. J. West Nile virus. Lancet Infect. Dis. 2, 519-529 (2002).
  2. Welte, T., et al. Immune responses to an attenuated West Nile virus NS4B-P38G mutant strain. Vaccine. 29, 4853-4861 (2011).
  3. Iwasaki, A., Medzhitov, R. Toll-like receptor control of the adaptive immune responses. Nat. Immunol. 5, 987-995 (2004).
  4. Akira, S., Hemmi, H. Recognition of pathogen-associated molecular patterns by TLR family. Immunol. Lett. 85, 85-95 (2003).
  5. Xie, G., et al. A West Nile virus NS4B-P38G mutant strain induces adaptive immunity via TLR7-MyD88-dependent and independent signaling pathways. Vaccine. 31 (38), 4143-4151 (2013).
  6. Fang, H., et al. gammadelta T cells promote the maturation of dendritic cells during West Nile virus infection. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 59, 71-80 (2010).
  7. Silva, M. C., Guerrero-Plata, A., Gilfoy, F. D., Garofalo, R. P., Mason, P. W. Differential activation of human monocyte-derived and plasmacytoid dendritic cells by West Nile virus generated in different host cells. J. Virol. 81, 13640-13648 (2007).
  8. Shrestha, B., Samuel, M. A., Diamond, M. S. CD8+ T Cells Require Perforin To Clear West Nile Virus from Infected Neurons. J. Virol. 80, 119-129 (2006).
  9. Wang, Y., Lobigs, M., Lee, E., Mullbacher, A. CD8+ T cells mediate recovery and immunopathology in West Nile virus encephalitis. J. Virol. 77, 13323-13334 (2003).
  10. Plebanski, M., Katsara, M., Sheng, K. C., Xiang, S. D., Apostolopoulos, V. Methods to measure T-cell responses. Expert Rev. Vaccines. 9, 595-600 (2010).
  11. Lyons, A. B. Analysing cell division in vivo and in vitro using flow cytometric measurement of CFSE dye dilution. J. Immunol. Methods. 243, 147-154 (2000).
  12. Kraus, A. A., Priemer, C., Heider, H., Kruger, D. H., Ulrich, R. Inactivation of Hantaan virus-containing samples for subsequent investigations outside biosafety level 3 facilities. Intervirology. 48, 255-261 (2005).
  13. Saxena, V., et al. A hamster-derived west nile virus isolate induces persistent renal infection in mice. PLoS Negl. Trop. Dis. 7, 2275(2013).
  14. Welte, T., et al. Vgamma4+ T cells regulate host immune response to West Nile virus infection. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 63, 183-192 (2011).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

Myd88TCFSE2T CD4
בניתוח חוץ גופייה של תיווך Myd88 הסלולרי תגובה החיסונית לוירוס הנילוס המערבי זיהום הזנים Mutant
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.