שיבוש Reconsolidation של פחד זיכרון בבני אדם על ידי β-Blocker noradrenergic

סיכום

Disrupting Reconsolidation היא גישה מבטיחה לשיכוך הביטוי ההתנהגותי של זיכרון פחד בחולים עם הפרעות חרדה או הפרעת דחק פוסט טראומטית. בסדרה של מחקרי התניה של פחד אנושי הראינו כי שיבוש הקונסולידציה מחדש על ידי הפרופרנולול חוסם β הנוראדרנרגי יעיל מאוד במחיקת תגובת פחד מותנית.

תקציר

העיצוב הבסיסי המשמש במחקרי פחד האוויר האנושיים שלנו בשיבוש reconsolidation כולל בדיקות על שלבים שונים על פני שלושה ימים רצופים. ביום 1 - שלב רכישת הפחד, משתתפים בריאים נחשפים לסדרה של מצגות תמונה. גירוי תמונה אחת (CS1 +) הוא זיווג שוב ושוב עם גירוי מרתיע חשמלי (ארה"ב), וכתוצאה מכך הרכישה של עמותת פחד, ואילו גירוי תמונה אחר (CS2-) אף פעם לא אחריו בארה"ב. ביום 2 - השלב מחדש זיכרון, המשתתפים מחדש נחשפו לגירוי המותנה ללא ארה"ב (CS1-), אשר בדרך כלל גורמת לתגובת פחד מותנית. לאחר ההפעלה מחדש זכרוננו לנהל מינון של 40 מ"ג של propranolol HCl, אנטגוניסט לרצפטור β-adrenergic שבעקיפין מטרות סינתזת החלבון דרושה לreconsolidation על ידי עיכוב זרחון CREB מגורה נוראדרנלין. ביום 3 - שלב הבדיקה, עמ 'articipants נחשפים שוב לגירויים המותנים unreinforced (CS1- וCS2-) כדי למדוד את השפעת הפחתה-הפחד של המניפולציה. מבחן שימור זה ואחרי הליך הכחדה וההצגה של גורמים מצביים לבדוק להחזרת פחד. הגברה של רפלקס מצמוץ עין בהלה נמדדת כמדד לפחד מותנה להגיב. ידע הצהרתי של עמותת הפחד נמדד באמצעות דירוגי תוחלת ארה"ב באינטרנט במהלך כל מצגת CS. בניגוד ללמידת הכחדה, שיבוש reconsolidation מטרות זיכרון הפחד המקורי ובכך למנוע את שובו של פחד. למרות שהיישומים הקליניים הם עדיין בחיתוליהם נראה שיבוש reconsolidation של זיכרון פחד, להיות טכניקה חדשה ומבטיחה עם האפשרות לבהתמדה לדכא את הביטוי של זיכרון פחד בחולים הסובלים מהפרעות חרדה והפרעות פסיכיאטריות אחרות.

מבוא

המוח שלנו מתוכן ללמוד. בני אדם מצוידים היטב עם היכולת ללמוד את הסכנות הפוטנציאליות בחיים ואולי אפילו יותר חשוב ללמוד את המנבאים של סכנה. אוויר מרתיע הפבלובית הוא כלי מצוין ללמוד פחד אסוציאטיבי לומד לא רק בבני אדם אלא גם על פני מגוון רחב של אורגניזמים ^1,2. הליך זה כרוך הצגת גירוי מזיק ניטראלי מבחינה ביולוגית מותנה (CS, למשל, צליל או תמונה) עם גירוי מזיק או מזיק הבלתי מותנה (US), בדרך כלל התחשמלות קלה. אם CS הופך מנבא אמין של ארה"ב, CS יהיה לעורר תגובה-מינים אופייניים מותנית התנהגות (למשל, הקפאה בחולדות וpotentiated רפלקס בהלה בבני אדם), הנתפסים כביטויים של פחד (ראה ³ להערות ביקורתיות על זה מינוח). לא רק מחקר אוויר מרתיע מוסיף להבנה טובה יותר של מולקולרי ותאיתהליכים של למידה וזיכרון אסוציאטיביים פחד ⁴ אבל זה גם מספק בסיס להבנת האטיולוגיה וכמובן של הפרעות חרדה ^5. למרות שזה נושא להזכיר כי הפרעות חרדה אינן נובעות בהכרח מחוויות אוויר ישירות כגון אירועים טראומתיים. הם יכולים גם לנבוע מחוויות פחד למידה עקיפות או עקיפות ^6. אבל בלי קשר להיסטוריה למידה, זיכרון אסוציאטיבי פחד טמון בליבה של הפרעות חרדה. הפרדיגמה האוויר הפבלובית לא הוכיחה רק השירות שלה בהבנת המקור של הפרעות חרדה, היא גם מודל מצוין translational לפתח וטיפול מראש להפרעות חרדה ^5.

במעבדה שני ההליכים למדו בצורה נרחבת ביותר על מנת להפחית למדו פחד הוא (1) הכחדה ו( 2) שיבוש reconsolidation. למרות שאימון הכחדה - כלומר, חזר unreinforced מחדש חשיפה לCS ^7,8 - הוא לימודי אסטרטגיה לטיפול בחרדות, בבעלי חיים ומיזוג פחד האנושי יעילים אמינים מראים כי תגובת הפחד המותנה בקלות יכולה לחזור מחדש על ידי חשיפה לUSS unsignaled (כלומר, השבה), שינוי הקשר (כלומר, חידוש), או חלוף זמן (כלומר, החלמה ספונטנית) ^7,9,10. קונסנסוס כבר בניין שלמידת ההכחדה אינו מוחק את זיכרון הפחד המקורי אבל במקום משקף את היווצרות זיכרון מעכב חדש. כתוצאה מכך, זיכרון הפחד עשוי פני השטח וכתוצאה מכך תשואה של פחד גם לאחר הכחדת פחד מוצלחת במקור. המקורות השונים של הישנות הם עדיין אתגר גדול לפרקטיקה קלינית.

גישה חלופית להפחתת פחד מותנה להגיב הוא ההליך יותר לאחרונה (מחדש) גילה של שיבוש reconsolidation זיכרון על ידי סוכנים תרופתיים. הליך זה הוא מאוד מבטיח כפי שהוא לא רק מפחית conditioפחד נד להגיב אבל נראה אפילו למחוק זיכרון אסוציאטיבי פחד, שעשוי בסופו לפתור את הבעיה של נסיגה.

reconsolidation הזיכרון מתייחס לתהליך דו-שלבים שבאמצעותו זכרונות שאוחדו בעבר להעביר למדינה חולפת מעורער בשליפה ודורשים restabilization תלוי זמן להתמיד ^14-18. שעתוק גנים, חלבונים וסינתזת RNA נחוצים לrestabilization זה ולהציע חלון הזדמנויות לסוכני אמנסטי להשפיע על זיכרון הפחד. אמנזיה לפחד למד הודגמה בבעלי חיים על ידי תרופות (למשל, anisomycin) מיקוד סינתזת החלבון הנדרש ^14,19,20 או השחרור של נוירוטרנסמיטורים ^21,22. סינתזה של חלבונים יכולה גם להיות מופרעת על ידי propranolol חוסם בטא noradrenergic, שאמור לעכב את זרחון CREB מגורה נוראדרנלין ^23-25. פחד צמצום השפעות של propranolol הוכח בבעלי חיים ובני אדם ^26-32. בסדרה של מחקרי פחד אוויר מפלים, שהראינו באופן עקבי כי propranolol (40 מ"ג) מנוהל לפני או אחרי הפעלה מחדש זיכרון ביעילות מופחת תגובת פחד בהלה ממוזגת ומנע את שובו של פחד במשתתפים בריאים.

הוכחה של עיקרון

העיצוב הבסיסי המשמש במחקרי פחד האוויר האנושיים שלנו בשיבוש reconsolidation כולל בדיקות על שלבים שונים על פני שלושה ימים רצופים מופרדים על ידי לפחות 24 שעות כדי איחוד תמיכה (1) (מחדש) של הזיכרונות ו( 2) לאפשר לסמים לשטוף לפני הבדיקה. ביום 1 - שלב רכישת הפחד, משתתפים בריאים נחשפים לסדרה של מצגות תמונה. גירוי תמונה אחת (CS1 +) הוא זיווג שוב ושוב עם גירוי חשמלי מרתיע (ארה"ב), וכתוצאה מכך הרכישה של עמותת פחד, ואילו גירוי תמונה אחרת (CS2-) הוא אף פעם לא אחריו בארה"ב. ביום 2 - השלב מחדש זיכרון, מחדש חשיפה לגירוי unreinforced המותנה (CS1-) בדרך כלל גורמת לתגובת פחד מותנית. בשלב זה, אנו מערכתיים לנהל 40 propranolol מ"ג HCl, אנטגוניסט לרצפטור β-adrenergic שבעקיפין מטרות סינתזת החלבון דרושה לreconsolidation ^25. לאור ריכוזי שיא בפלזמה של propranolol ^33, אנחנו מנוהלים מינון של propranolol 90 דקות לפני הפעלתו מחדש של זיכרון הפחד בניסויים הראשונים שלנו. עם זאת, לבדיקה אופטימלית יותר של reconsolidation, סוכן אמנסטי צריך להינתן לאחר ההפעלה מחדש הזיכרון. לכן, בניסויים האחרונים שלנו אנחנו תמיד מנוהלים propranolol לאחר הפעלה מחדש זיכרון עם תוצאות דומות מאוד. ביום 3 - שלב הבדיקה, שימור זיכרון הפחד נבדק 24 שעות לאחר ההתערבות (כלומר, יום דין המבחן הראשון 3), ואחריוהכחדה הליך וגורמים מצביים לבדוק להחזרת הפחד (כלומר, השבה, התחדשות, החלמה ספונטנית, רכישה מחדש מהירה). לקביעה האם ההשפעה של propranolol דורשת אחזור פעיל של זיכרון הפחד, התרופה צריכה להינתן לקבוצה ממוזגת פחד אחר ללא הפעלה מחדש של הזיכרון (כלומר, מצב propranolol ללא הפעלה מחדש) ^27,28. אנחנו השתמשנו בהגברה של רפלקס בהלה כאמצעי לפחד מותנה להגיב ודירוגי תוחלת ארה"ב מקוונים כמדד ללמידה מגירה. ההגברה של רפלקס בהלה נתפסה כמדד ספציפי ואמין של פחד ^34, subserved ידי האמיגדלה ^35. הגירוי לעורר בהלה-הנפוץ ביותר הוא "הבדיקה בהלה", רעש חזק שמוצג דרך אוזניות במהלך גירוי או במרווח בין שתי מצגות גירוי (כלומר, מרווחי intertrial) ^{36. תגובות בהלה חזקות לרעש חזק במהלך גירוי הפחד המותנה (CS1 +), בהשוואה לגירוי השליטה (CS2-) משקפת את המצב המפחיד של המשתתף שהושרו על ידי הגירוי המפחיד (CS1 +).}

בסדרה של 10 ניסויים ברציפות בדגימות עצמאיות ^27-32,37-39 אנחנו משוכפלים הממצא המקורי שלנו שבו שיבוש reconsolidation של זיכרון פחד על ידי propranolol חוסם בטא-אדרנרגי HCl ביעילות מופחת רפלקס המותנה בהלה ומנע את החזרה של פחד ²⁷ באופן עקבי . התצפיות שהחשיפה לחיזוקים ראשוניים (כלומר כינון,), שינוי בהקשר (כלומר, חידוש) או פשוט את חלוף זמן (כלומר, החלמה ספונטנית) לא הביאה להתעוררות המחודשת של פחד מותנה להגיב כפי שנצפו כלל לאחר אימון הכחדה, תומך בעליונות של שיבוש reconsolidation על למידת הכחדה. בנוסף לאלהטכניקות אחזור, למידת רכישה מחדש לא גילו כל חיסכון של תגובת הפחד למד בעבר. לסיכום, ממצאים אלה מראים כי שיבוש reconsolidation של זיכרון פחד אסוציאטיבי על ידי propranolol יעילות מופחת הביטוי הרגשי של זיכרון פחד.

יתר על כן, בדקנו כמה גבול ותנאים הכרחיים לשיבוש reconsolidation: (1) הפגישה מחדש הזיכרון נראית procedurally דומה לאימון הכחדה (כלומר, חשיפת unreinforced), אבל זה צריך להיות כרוך בניסויי unreinforced פחות מאימון הכחדה בגלל חסמי בטא noradrenergic (כלומר , Propranolol) עלול גם להפריע להיווצרות של זיכרון הכחדה במקום מיקוד זיכרון הפחד המקורי ^40,41; (2) שליפת זיכרון אינה מספיקה ^{ל18,31,42,43} reconsolidation הזיכרון. Propranolol הפחית את הפחד המותנה להגיב כאשר היה משהו שלמד במהלך sess אחזור רקיון ^31,32. פער בין מה שכבר למד ומה ניתן ללמוד על מושב אחזור נתון (כלומר, שגיאת ניבוי) נראה שיש צורך גרימת reconsolidation של זיכרון פחד אסוציאטיבי ^32. תוצאות המחקר מראים כי את המופע של שגיאת ניבוי הוא תנאי הכרחי לreconsolidation ולספק כלי שימושי לפיתוח וייעול טיפולים מבוסס reconsolidation לחולים הסובלים מהפרעות חרדה.

פרוטוקול

הצהרת אתיקה: הפרוטוקול שאושר על-הרופא שלנו עונה על הדרישות של הוועדה האתית של המחלקה לפסיכולוגיה באוניברסיטת אמסטרדם לבדיקת משתתפים אנושיים.

1. קובץ מצורף של אלקטרודות potentiated הרתיעה ופחד ההלם

1. להבטיח את ההגדרה הניסיונית מורכבת מחדר של המשתתפים-מוחלש קול וחדר ניסוי מופרד.
2. השתמש בשני מחשבים עם ארבעה מסכי להקלטה וניטור תגובות פיסיולוגיות כמו גם להצגת התסריט הניסיוני למשתתפים.
3. צרף את הצווארונים דו צדדיים דבקים לאלקטרודות EMG.
4. לנקות את העור של המשתתף מתחת לעין ימין או שמאל ועל המצח באמצעות ספוגית אלכוהול. להורות למשתתפים לשמור עליהם בעיניים עצומות, כדי למנוע גירוי בעיניים פוטנציאליות.
5. מלא את מרכז אלקטרודות EMG עם אלקטרוליט המוליך מאוד gel באמצעות מזרק. אל תנסה למלא את האלקטרודות על ידי יישום כמויות קטנות של ג'ל ברציפות כזה מגדיל את הסיכון של בועות אוויר בתוך הג'ל, אשר עשויים להשפיע באופן שלילי הקלטות.
6. צרף אחד אלקטרודות EMG מתחת לעפעף התחתון של הזכות או עין שמאל בקנה אחד עם התלמיד במבט קדימה. צרף את השני כ 1 - 2 סנטימטר לרוחב הראשון שלאחר העקמומיות של העפעף התחתון. צרף התייחסות קרקע על המצח כ 1 סנטימטר מתחת לקו השיער. מיקום אופטימלי של אלקטרודות ביחס לשריר עשוי לדרוש התאמות אישיות.
7. החל ירידה של ג'ל המוליך על אלקטרודות ההלם ולצרף אותם על פרק כף היד השמאלית העליונה באמצעות רצועת סקוטש הניילון. ודא שהרצועה היא לא חזקה מדי.
8. התאם את עוצמת ההלם החשמלי 2-msec לכל משתתף בנפרד. ליידע את המשתתפים כי ההלם צריך להיות "לא נוח אבל לא כואב".
9. מדריך לly לעורר הזעזועים. התחל בעצמה של 1 מילי-אמפר ולהמשיך ולהפעיל את הזעזועים יחידים - הגדלת עוצמת הדרגה במרווחים של 2 או 3 mA - עד המשתתף מצביע על כך שההלם הוא "שלא בנוח, אבל לא כואב".
10. רשום את רמת ההלם הסופית ולשמור על רמה זו בכל שאר הניסוי.

2. פחד רכישה - יום 1

משך כ -45 דקות.

1. להורות למשתתפים על המשלוח של זעזועים והממשל האפשרי של propranolol HCl. נוסף ליידע אותם כי propranolol HCl משמש לטיפול ביתר לחץ דם. להשיג בכתב הסכמה מדעת.
2. מסך המשתתפים לגבי הבריאות וכל תנאים שקונטרה-מצביעים על נטילת מנה אחת של 40 מ"ג של propranolol HCl: הריון, הפרעת פרכוסים, הפרעה בדרכי הנשימה, מחלות לב וכלי דם, מחלות לב וכלי דם במשפחת הקו הראשון, diaלחלות בסוכרת, כבד או כליות הפרעה, שימוש נוכחי של תרופה נגד דיכאון, או פסיכוזה.
3. להשיג לחץ דם וקצב לב מדידות באמצעות מד לחץ דם אלקטרוני. שאל את המשתתפים להסיר את זרועם מהשרוולים והניחו את השרוול מתנפח באופן מאובטח על הזרוע העליונה. להורות למשתתפים להירגע ולשבת עם זרועם התכופפה מעט באותה הרמה כמו הלב שלהם ונחו על שולחן או משטח שטוח אחר. BP צריך להיות מעל 90/60 מ"מ כספית וקצב לב מעל 60 BPM להכללה בניסוי.
4. לנהל את מלאי המדינה-Trait Anxiety ⁴⁴ וחרדת רגישות מדד ⁴⁵ כאשר משתתף מנוקה מבחינה רפואית. גם לנהל את עכביש פובית השאלון ⁴⁶ בעת שימוש בתמונות של עכבישים כגירויים מותנים.
5. מקם את המשתתפים מול מסך מחשב ולצרף את האלקטרודות EMG והלם (ראה סעיף 1 Attachment "של פחד potentiated הרתיעהד הלם אלקטרודות ").
6. השתמש בשני הליכים למידה שונים - ראה 2.6.1 צעדים ו2.6.2. ליידע את המשתתפים על שתי תמונות שונות שהם רואים על מסך המחשב. להורות להם לפקח על היחסים בין התמונות שהם רואים וכאשר הלם מתקבל.
   1. למידה ללא Asymptotic: ליידע את המשתתפים כי אחת התמונות תהיה ואחריו השוק החשמלי ברוב המקרים ואילו אחרים לעולם לא יהיו ואחריו ההלם.
   2. למידה Asymptotic: Inform המשתתפים בי של שתי תמונות תהיינה תמיד אחרי ההלם החשמלי ושתמונה לעולם לא תהיה ואחריו ההלם (כלומר, הורה למידה פחד).
7. ליידע את המשתתפים על הרעשים חזקים הם ישמעו דרך האוזניות. להורות להם לא לשים לב לרעשים.
8. להורות למשתתפים לדווח תוחלת של duri התחשמלותng הצגת כל התמונות על ידי העברת סמן על סולמות דירוג רציפים על ידי שימוש בעכבר וללחוץ על הכפתור השמאלי של העכבר בתוך 5 שניות הבאות הופעת גירוי על מנת לאשר את תוחלתם. קשקשים להבטיח מורכבים של 11 נקודות שכותרתו מ" בהחלט לא התחשמלות "דרך" בטוח "ל-" בהחלט התחשמלות ". להציג את הכף ברציפות בחלק התחתון של מסך המחשב על מנת לתמוך במשתתפים למקד את תשומת הלב שלהם בתמונות. כאשר התמונות נעלמות הסמן באופן אוטומטי לחזור למצב "בטוח".
9. כוון את המשתתפים לשמור את עיניהם על המסך ולשבת בשקט ככל האפשר עם שני הידיים מונחות בתנוחה נינוחה עם פרקי ידיו על השולחן לפניהם. הרכיב את האוזניות. לעמעם את האורות וסגרו את הדלת. להתחיל את הניסוי מהחדר השני.
10. במהלך רכישת פחד אחד משתי תמונות שיתוף מסתיים עםהלם: CS1, ואילו השני לא ואחריו ההלם: CS2. לעשות שימוש בגירויים רלוונטיים פחד על מנת לחזק את קשר הפחד במהלך רכישה. לתמונות מופע של עכבישים: מספרי IAPS 1200-1201.
11. להציג שני CS1 וCS2 במשך 8 שניות. רעשים חזקים או להבהיל בדיקות - 40 אלפיות שניים ו -104 dB - מוצגים 7 שניות לאחר תחילת CS; ולCS1, אלה ואחרי ההלם החשמלי 2-msec 500 אלפיות שניים מאוחר יותר.
12. התחל הפחד בפועל לומד בהצגת עשר בדיקות בהלה בסיס כדי להפחית תגובתיות בהלה ראשונית:
    1. למידה ללא Asymptotic: הצג כולל של 8 ניסויי CS1 על תכנית חיזוק של 75%: 6 ניסויי CS1 מקבלים חיזוק מהלם - הראשון והמשפט החמישי הם unreinforced. ניסויים נוספים הווה 8 CS2, כמו גם 8 ניסויי NA במהלך משפט-המרווחים הבין-.
    2. למידה Asymptotic: הצג כוללת של 3 ניסויי CS1 על תכנית חיזוק 100%: כל ניסויי CS1 הם reinforced על ידי הלם. ניסויי 3 CS2 נוסף הווה, כמו גם 3 רעש לבד להבהיל בדיקות (NA) במהלך משפט-המרווחים הבין-.
13. לאזן את ההקצאה של התמונות כמשתתפים ברחבי CS1 וCS2. אופן אקראי את סדר הסוג של ניסוי בלוקים של CS1 - CS2 - NA כך שלא משפט מסוג חוזר על יותר משתי פעמים. להשתנות ניסוי המרווחים הבין-- במהלכו משתתפים להציג מסך שחור - בין 15 שניות 20 שניות 25 שניות ועם ממוצע של 20 שניות.
14. לאחר השלמת הניסוי לנתק את האלקטרודות ולאפשר למשתתפים לנקות את הג'ל.
15. להורות למשתתפים לשפוט את מידת הנעימות של ההלם על סולמות דירוג 11 נקודות שנעו בין מינוס 5 (כלומר, לא נעימים) עד 5 (כלומר, נעימים).
16. באופן מפורש להורות למשתתפים לזכור את מה שלמדו במהלך רכישת פחד על מנת להגדיל את ההחזקה של מגירה CS-האמריקאי בימים הבאים, כמו גםכדי למנוע מהם בטעות מצפה תכנית מגירה שונה במהלך בדיקה שלאחר מכן. יתר על כן, כדי להקל על דגימות רוק למחרת, להורות למשתתפים להימנע מקפאין התרגיל והאלכוהול במהלך 12 שעות ולהימנע ממזון ומשקאות שאינם מים, כמו גם עישון וצחצוח שיניים בשעה 2 לפני הפגישה הבאה .
17. נקה את האלקטרודות ביסודיות עם מים לאחר שימוש: להיפטר מכל את הג'ל מבלי לשרוט כל חלק של שכבת AgCl. לאחר ניקוי לא לנגב את המים, אבל להשתמש במערך של אלקטרודות שונה על המשתתף הבא ולאפשר לקבוצה אחרת לייבוש לאורך זמן.

3. זיכרון הפעלה מחדש - יום 2

משך כ -105 דקות.

1. באופן אקראי להקצות את המשתתפים לשני HCl או גלולת פלצבו מצב propranolol עם ההגבלה שתנאים מותאמות על ציוני Stai קרובים ככל האפשר בהתחשב בכך שתכונת הפחתת חרדהy קובע את השפעות הפחתת הפחד של שיבוש reconsolidation ^47. התאם את המשתתפים על ציוני SPQ כמו גם בעת שימוש בתמונות של עכבישים כגירויים מותנים.
2. להשיג לחץ דם ומדידות קצב לב, כמו גם דגימות רוק: להנחות את המשתתפים רק כדי למקם את הספוגית בפיהם לדקות על 3. שמור Salivettes במינוס 25 מעלות צלזיוס לאחר ההסרה.
3. למצב לא-מחדש propranolol עבור לשלב 4.8.1.
4. מקם את המשתתפים מול מסך המחשב ולצרף את האלקטרודות EMG והלם (ראה סעיף 1 "Attachment של פחד potentiated הרתיעה והלם אלקטרודות"). דווח למשתתפים שעוצמת ההלם תישאר זהה.
5. ליידע את המשתתפים כי אותם שני התמונות יוצגו על מסך המחשב ולבקש מהם לזכור את מה שלמדו ביום הקודם - אחת התמונות יהיה אגאובאחריו השוק החשמלי בכל (כלומר למידה, שאינו אסימפטוטי) רוב או את כל (, כלומר למידה אסימפטוטי) ואילו מקרים האחרים לעולם לא יהיה ואחריו ההלם. להורות למשתתפים לדווח תוחלת של התחשמלות במהלך המצגת של כל התמונות. הרכיב את האוזניות ולעמעם את האורות. סגר את הדלת ולהתחיל את הניסוי מהחדר השני.
6. להתחיל מחדש זיכרון על ידי הצגת 10 בדיקות בהלה בסיס כדי להפחית תגובתיות בהלה ראשונית. הבא יציג משפט CS1 unreinforced אחת ואחריו משפט NA יחיד.
7. לנתק את המשתתפים מניסיוני ההגדרה ולתת להם לנקות את הג'ל. מושיב אותם מאחורי השולחן האחר.
8. לנהל "כפולה סמיות" מינון של גלולת פלצבו או 40 מ"ג של propranolol HCl. כדורים צריכים להיות מסונוור עצמאי מרקחת או עמית לעבודת המחקר. יתר על כן רופא תורן עם ידע שלי בפרוטוקולs נחשב הכרחי לאחר מתן תרופה.
   1. לנהל "חד-עיוור" מינון של 40 מ"ג של propranolol HCl לpropranolol המצב לא-מחדש.
9. הכנס תקופת מנוחה של כ -90 דקות. מציע מגזיני המשתתפים לקרוא. נקה את האלקטרודות בינתיים.
10. שוב להשיג BP ומדידות קצב לב, כמו גם דגימות רוק.

מבחן 4. - יום 3

משך כ -45 דקות.

1. להשיג BP ומדידות קצב לב.
2. מקם את המשתתפים מול מסך המחשב ולצרף את האלקטרודות EMG והלם. שוב לדווח למשתתפים שעוצמת ההלם תישאר זהה.
3. להורות למשתתפים כי אותם שני התמונות יוצגו על מסך המחשב. שוב להורות למשתתפים לדווח תוחלת של התחשמלות במהלך המצגת של כל התמונהs. הרכיב את האוזניות ולעמעם את האורות. סגר את הדלת ולהתחיל את הניסוי מהחדר השני.
4. להתחיל את הניסוי על ידי הצגת 10 בדיקות בהלה בסיס. במהלך ההכחדה להציג כ -12 ניסויי CS1 וCS2 unreinforced כמו גם 12 NA ניסויים. לאחר הכחדת משתתפים מקבלים שלוש USS unsignaled: כינון. שוב להציג את המשתתפים עם כ -4 ניסויי unreinforced CS1 וCS2, כמו גם 4 ניסויי NA הבאים USS unsignaled: בדיקת הכינון.
5. לנתק את האלקטרודות ולתת משתתפים לנקות את הג'ל. לשלם את משתתפי כמות קטנה עבור השתתפותם בניסוי. נקה את האלקטרודות ביסודיות עם מים.

תוצאות

propranolol מניפולציה המחאה: בניגוד לפלצבו הגלולה, שני סיסטולי ודיאסטולי BP, כמו גם את אלפא עמילאז הרוק צריך להקטין 90 דקות לאחר צריכת propranolol במהלך הפעלה מחדש זיכרון, אשר מציינת כי המניפולציה הסמים הפעילה ההשפעה הפיזיולוגית שלה נועדה. BP ואלפא עמילאז הרוק צריך שוב לחזור לרמות בסיס במבחן ביום 3.

דירוגי תוחלת ארה"ב: עם הפרוטוקול הנוכחי ייתכן שלא מצפים לשום השפעות של טיפול propranolol על דירוגי תוחלת ארה"ב. ללא קשר לטיפול התרופתי, דירוגי תוחלת ההפרש ארה"ב צריכים להגדיל במהלך רכישת פחד ולרדת במהלך הכחדת למידת 48 שעות מאוחר יותר. יתר על כן הצגת USS unsignaled צפויה לגרום לחזרה של דירוגי תוחלת ההפרש (איור 1 א-ג).

תנאי מוקדם לreconsolidation: כדי לעורר את התהליך של reconsolidation, עקבות הזיכרון צריכה קודם כל להיות מעורערות, כתנאי הכרחיים לשלב restabilization. ליציבות זיכרון פחד, ציפייה של איום ברגע מחדש (כלומר, תוחלת CS1-ארה"ב ללא שינוי) היא הכרחית אך לא מספיק ^31. רודף על הרעיון שהפונקציה של reconsolidation היא לעדכן את עקבות הזיכרון לסביבה משתנה, ההפעלה מחדש הזיכרון צריכה גם לערב שגיאת ניבוי (PE: חוסר התאמה בין מה שמצפה ומה שקורה בפועל). בהתחשב בכך שדירוגי תוחלת ארה"ב נותרים בעינן על ידי המניפולציה propranolol, שינויים בציפיות איום מרכישה לבדוק (PE) עשוי לשמש כסמן בלתי תלוי ביציבות זיכרון (ראה ³² לפרטים נוספים). אבל רק כאשר מחדש הזיכרון כדלקמן למידת אסימפטוטי, שינויים אלה בma הציפייה איוםy להיות שנצפה. במקרה של למידה לא אסימפטוטי חיזק באופן חלקי, שינוי בתוחלת איום הוא לא הכרחי ליציבות זיכרון. מכאן משפט שליפה עלול גם לעורר reconsolidation ללא שינוי בתוחלת לאחר למידה לא אסימפטוטי.

להבהיל פחד להגיב: רכישת פחד מוצלחת ביום 1 באה לידי ביטוי בעלייה בפחד בהלה ההפרש להגיב (כלומר, CS1 לעומת CS2) מהראשון למשפט האחרון של רכישה (1D איור-F). פחד בהלה גבוה יותר להגיב לגירוי שמצמיד בעבר עם ההלם (CS1) בהשוואה לרעש לבד במהלך הפעלה מחדש זיכרון ביום 2 נוסף מצביע על כך שזיכרון הפחד מאוחד גם.

במהלך שלב הבדיקה ביום 3 אתה יכול לצפות פחד בהלה בשלמות להגיב בקבוצת הפלצבו: להבהיל להגיב לCS1 צריך להיות h igher לעומת CS2 בתחילת המבחן. אימון הכחדה לאחר מכן מקטין את ההפרש בהלה להגיב (כלומר, CS1 vs. CS2). יתר על כן הצגת USS unsignaled צריכה לגרום לחזרה של פחד להגיב לCS1 לעומת CS2 (1D איור).

בניגוד לפלצבו הגלולה, הממשל של propranolol HCl צפוי לגרום לחיסולו של הפחד בהלה ההפרש להגיב (כלומר, CS1 לעומת CS2) בתחילת שלב הבדיקה ביום 3. יתר על כן אתה יכול לצפות שUSS unsignaled לא יתאושש הפחד בהלה להגיב (איור 1E).

הערה propranolol שלא צריך להיות שום השפעה-הפחתת פחד כאשר את הגלולה מנוהלת ללא הפעלה מחדש זיכרון ביום 2 (איור 1F).

מחדש 1 "src =" / קבצים / ftp_upload / 52,151 / 52151fig1highres.jpg "width =" 700px "/>
איור 1. דירוגי תוחלת ארה"ב לניסויי CS1 וCS2 ולהבהיל תגובות פחד לCS1, CS2 והרעש לבד (NA) ניסויים במהלך רכישה, הפעלה מחדש זיכרון, הכחדה ובדיקה לפלצבו (A, D), propranolol (B, E), וההפעלה מחדש לא- propranolol (C, F) קבוצות R-CS1 ^-.. מתייחס למשפט מחדש unreinforced אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

דיון

בסדרה של מחקרים שמדגימים באופן עקבי כי, ללא הבדל מין, 40 מ"ג של propranolol חוסם בטא noradrenergic מנוהל או לפני או אחרי הפעלה מחדש זיכרון בצורה יעילה לנטרל את הפחד המותנה להגיב (כלומר, תגובה בהלה הגנתית). אף אחד מארבעת המנגנונים של הישנות - השבה, התחדשות, החלמה ספונטנית ורכישה מחדש מהירה - נצפה לאחר שיבוש reconsolidation עם propranolol ^27-32,37-39. ראוי לציין כי תופעות-נטרול הפחד נצפו רק לתגובה בהלה ההגנתית, אבל לא לדירוג תוחלת איום ולא למוליכות החשמלית של העור. נתונים לאוויר-החשמלי אינם מדווחים כאן כדפוסים הכלליים לSCR לא חרגו באופן משמעותי מדירוגי תוחלת. (למשל, ארה"ב-תוחלת, SCR, r בהלה במחקר מיזוג פחד אנושי, מדדים מרובים של מותנה להגיבesponse, הרחבת אישון, פעילות עצבית) הן בדרך כלל מתקבלת מסיבות של אימות צולבת ^48. עם זאת, עכשיו יש ראיות משכנעות שרמות התגובה השונות אלה לא בהכרח לפעול בתיאום, ואף עלולה לנתק מכל ^{3,27-32,34,37,49} אחרים. שים לב שהתגובה בהלה היא רפלקס הגנתי אוטומטי, אשר potentiated בתגובה לCS, המשויך לארה"ב של הערכיות שליליות ויכול בדרך כלל לא נצפה עם USS של הערכיות ניטרליות או חיוביות ^49,50 (למשל, גירוי או vibrotactile תגובת משימת זמן). לפיכך, הגברה של רפלקס בהלה ההגנתי הוא מדד אמין וספציפי של אוויר מרתיעה ^34. בניגוד לכך, SCR אוויר יכול להתרחש ללא קשר לערכיויות של ארה"ב ^49,50. בהתחשב בכך שהערכיות רגשית של ארה"ב אינה משנה את SCR, אוויר-חשמלי הוא מדד שאינו ספציפי של עוררות מקדימים. לפיכך, אנו מאמינים כי SCR הוא פחות שלuited כאמצעי התנהגות במחקר אוויר מרתיע אנושי.

אם השערות על תרגום ממצאים אלה לפרקטיקה קלינית, כמה בעיות ומגבלות פוטנציאליות כדי להיחשב. ראשית, ייתכן שהוא שאל אם מניפולציה תרופתית על ידי חוסמי בטא noradrenergic היא באמת הכרחית כדי לשבש את התהליך של reconsolidation או אם הליך התנהגות שמטרה להפריע לreconsolidation יניב אפקט נטרול דומה. למרות שטיפול אחד מפגשים של מינון נמוך של propranolol ברור רעיל, הליך התנהגות לגמרי תמיד עדיף על התערבות תרופתית. אכן יש שיטה חלופית שבו אימון הכחדה מוצג בתוך החלון של reconsolidation ^51. מספר מחקרים לא הצליחו עם זאת לשכפל ממצאים המקוריים אלה על ידי et al שילר. ^29,52-54 אבל לראות ^55,56. בנוסף לתוצאות הסותרות אלה,הגבלה פוטנציאלית אחרת של ההכחדה בתוך הליך מחדש תהיה כי בפרקטיקה קלינית תגובת הפחד היא בדרך כלל לא כובתה בטיפול חשיפה חד-ישיבה. לדוגמא, חשיפה דמיונית עבור חולים עם PTSD מסורתי לוקחת עשרה מפגשים לפני הפחד שוכך ^57. לכן, גם הכרה בחסרונות הברור של טיפול תרופתי פשוט בהשוואה להתערבות התנהגותית לחלוטין, אנו מאמינים שנראה המניפולציה noradrenergic של reconsolidation הזיכרון להיות יותר מעשי מאשר הכחדה בתוך חלון reconsolidation.

נושא שני נוגע לתנאים אופטימליים להפעלת reconsolidation זיכרון. יש ראיות הולכות ומצטברים כי מנגנוני תיווך הביטוי ההתנהגותי של פחד באופן ברור הם ניתקו מהמנגנונים מתווכים בתהליך של reconsolidation ^31,32,58-62. לדוגמא, מחקרים בבעלי החיים אחרונים חשפו ההפרש וr הקשור זהeceptors באמיגדלה basolateral תיווך הביטוי, היציבות וrestabilization של זכרונות פחד מותנים בעבר ^63,64. ביטוי ההתנהגותי של זיכרון פחד לא ניתק רק מתהליכי תיווך מחדש זיכרון (כלומר, גישה לעקבת זיכרון), זה נראה גם לא להיות הכרחי עבור reconsolidation להתרחש ^63. ככזה, פחד הביטוי במהלך ההפעלה מחדש זיכרון אינו אינפורמטיבי על אם עקבת הזיכרון נכנסה שלב יציב. בהתחשב בכך שיציבות זיכרון היא תנאי הכרחי לחוסם בטא noradrenergic להתערב בתהליך restabilization, שאלה חשובה היא איך אנחנו יכולים להסיק יציבות זיכרון מוצלחת בפרקטיקה קלינית. מארח של ממצאים מצביע על כך שגורם מכריע בגרימת reconsolidation ובסימון reconsolidation משני אחזור זיכרון או האיחוד של ^40,65 זיכרון רומן הוא מידת שגיאת ניבוי המושרית במהלך memאחזור אורי ^31,32. אבל בהתחשב בעובדה שאין קריטריון אובייקטיבי נגיש לקבוע את המידה האופטימלית של שגיאת חיזוי בפרקטיקה קלינית, לא יכולים בקלות להיות מתורגמים ממצאי המעבדה הנוכחיים לפרוטוקולי טיפול.

אתגר נוסף לתרגום ספרות מדעי המוח לתוך פרקטיקה קלינית נוגע לתוקף האקולוגי של הפרדיגמה. הראיות לשיבוש reconsolidation יש בעיקר הוכחו בבעלי חיים ובבני אדם לזכרונות חדשים יחסית (בת יום אחד) ופשוט פחד (כלומר, הלם טון; הלם תמונה). אין זה מובן מאליו ששיבוש reconsolidation של רשתות זיכרון ישנות יותר, חזקות יותר ורחבים יותר, כגון בחולים עם PTSD הוא יעיל כמו שזה הוכח במעבדה לפחד רמז אוויר. גם ביחס למשתנה התלוי זה עדיין לא ברור אם התצפיות מבעלי החיים ומחקרי מעבדה אנושיות להכללה לחולים עם הפרעות חרדה. הפחד מחדשהשפעות ducing עד כה הוכיחו בעיקר לביטוי ההתנהגותי של אוויר מרתיעה (כלומר, הקפאת התנהגות במכרסמים או רפלקס בהלה ההגנתי בבני אדם), ורק חריג אחד שבו אנחנו, הוכיחו כי גם את התחושות הסובייקטיביות של מצוקה נוטרלו באופן משמעותי על ידי מצור noradrenergic של reconsolidation זיכרון ^37. זה עשוי להיות ספק אם תופעות אלה-הפחתת פחד במעבדה מעידות על החוויות האופייניות אופייני פחד והימנעות התנהגותם של מטופלים הסובלים מהפרעות חרדה. מחקר עתידי צריך לבדוק האם הממצאים הנוכחיים אכן להכליל להימנעות התנהגויות, אחד התסמינים של הפרעות חרדה המרכזיים.

לסיכום, למרות שהליך האוויר מרתיע הפבלובית הוא כלי מצוין ללמוד את המנגנונים הבסיסיים של למידת פחד וזיכרון, אנחנו לא יכולים בקלות לתרגם את ממצאי מעבדה לפרקטיקה קלינית. תובנות שאנחנו שתשתה כבר הסליקה האופטימלי, הגבול והתנאים הכרחיים לreconsolidation זיכרון צריך להיחשב רק כנקודת פתיחה לפיתוח טיפולים מבוסס reconsolidation. מצד השני, המחקר מקיף על הכשרת הכחדה הביא התערבויות חשיפה מבוססת הכחדה, שעדיין שייכות לטיפולים היעילים ביותר לטיפול בהפרעות חרדה והפרעות נלוות אחרות. בהתחשב בכך שהמצור noradrenergic של reconsolidation הזיכרון מאפיל על ההשפעה הנוגדת החרדה של למידת הכחדה, שיבוש נקודות reconsolidation להתערבות חדשה ומבטיחה להפחית ביעילות את הפחדים מוגזמים ולא הגיוניים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
2 מחשבים עם 4 מסכים	Dell	Optiplex 9010	הקלטה וניטור של תגובות פיזיולוגיות. הצגת התסריט הניסויי.
מגבר	פותח על ידי B. Molenkamp - University of Amsterdam		תוכנן סביב מגבר Burr Brown INA101 ומדרגת בידוד ISO103.
VSSRP98	פותח על ידי B. Molenkamp - University of Amsterdam		תוכנה לרישום פיזיולוגי. הקלטת פעילות אלקטרומיוגרפיה - EMG - באמצעות זוג חוטי אלקטרודות מצומדים המחוברים למגבר קדמי בעל התנגדות כניסה של 10 MΩ ורוחב פס של DC-1500 Hz. אותות EMG גולמיים עוברים אינטגרציה במגבר. אותות EMG אינטגרליים נדגמים בתדר של 1,000 Hz ומשמשים לניתוח נתונים.
MATLAB	MathWorks		ניתוח נתונים. אמפליטודות שיא נקבעות על ידי חישוב ההפרשים בין קו הבסיס 50 msec לפני תחילת הגירוי לבין השיא בטווח של 30 - 150 msec לאחר תחילת הגירוי, ונרשמות ביחידות של microvolt.
Presentation	NeuroBehavioral Systems Inc. - USA		הצגת גירויים.
מגרה בזרם קבוע	Digitimer Ltd.	DS7A	מייצר גירוי חשמלי
אלקטרודות הלם	יוצרו על ידי B. Molenkamp - University of Amsterdam		אלקטרודות Ag בגודל 20 mm x 25 mm עם מרחק ביניים קבוע של 45 mm.
אוזניות	Sennheiser Electronic GmbH & CO - Germany	HD 25-1 II	השמעת גירויי בהלה ורעשי רקע.
אלקטרודות EMG	יוצרו על ידי B. Molenkamp - University of Amsterdam		שלוש אלקטרודות Ag-AgCl סינטריות של 7 mm.
טבעות דבק דו-צדדיות	MedCaT - the Netherlands	848125	13 mm x 5 mm. להצמדת אלקטרודות ה-EMG לעור.
ג'ל מוליך	Signa Gel - Parker Laboratories Inc. - USA	224.550.011	מסייע בהולכה מהעור הן לאלקטרודות ה-EMG והן לאלקטרודות ההלם.
סמרטוטים עם אלכוהול	Sanadep 0.5% - Microtek Medical - the Netherlands	3053800	לניקוי עורו של המשתתף.
[כותרת]
ספיגמומנומטר	Omron Healthcare Europe B.V. - the Netherlands	M4-I HEM-752-E	מדידת לחץ דם ודופק.
סליבטים מכותנה	Sarstedt - Germany	511.534	איסוף דגימות רוק.
מזרק בעל קצה מעוקל	Monoject - Covidien - USA	412	למריחת ג'ל על אלקטרודות ה-EMG וההלם.
Propranolol HCl - 40 mg וכדורי פלצבו	Huygens Apotheek - the Netherlands		הכדורים צריכים להיות זהים במראה החיצוני.