הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מודל אפשרי דג הזברה של מחלת כליות פוליציסטיות: מציאה של Wnt5a גורם ציסטות בכליות דג הזברה

10.6K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/52156

⸱

2 בדצמבר 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medicine, Eastern Virginia Medical School, 2Department of Medicine, Medical University of South Carolina, 3Department of Pediatrics, University of Michigan

במאמר זה

סיכום

אנו מתארים שיטה ליצירת מודל אפשרי של דג זברה למחלת כליות פוליציסטית. השתמשנו בדגי Tg(wt1b:GFP) כדי לדמיין את מבנה הכליות. הפלה של wnt5a הייתה על ידי הזרקת מורפולינו. היווצרות ציסטה פרונפרית לאחר נוקדאון wnt5a נצפתה בדג הזברה הטרנסגני GFP הזה.

תקציר

מחלת כליות פוליציסטית (PKD) היא אחד הגורמים השכיחים ביותר למחלת כליות סופנית, מחלה הרסנית שאין לה תרופה. המנגנונים המולקולריים המובילים להיווצרות ציסטות ב-PKD נותרו מעט לא ברורים, אך נחשבים גנים רבים מעורבים. Wnt5a הוא גליקופרוטאין לא קנוני המווסת מגוון רחב של תהליכי התפתחות. Wnt5a פועל דרך מסלול קוטביות התאים המישוריים (PCP) המווסת את חלוקת התאים המכוונת במהלך התארכות תאים צינוריים בכליות. פגמים במסלול ה-PCP נמצאו כגורמים להיווצרות ציסטה בכליות. המאמר שלנו מתאר שיטה לפיתוח מודל מחלת כליות ציסטית של דג הזברה על ידי הפלת הגן wnt5a עם אוליגונוקלאוטידים של wnt5a antisense morpholino (MO). דגי זברה טרנסגניים Tg(wt1b:GFP) שימשו להדמיית מבנה הכליות וציסטות בכליות לאחר נוקדאון wnt5a. נעשה שימוש בשני MOs אנטי-סנס נפרדים (AUG - ו-splice-site) ושניהם הביאו לפנוטיפ זנב מתולתל והיווצרות ציסטה לאחר נוקדאון wnt5a. הזרקת mRNA Wnt5a של עכבר, עמיד ל-MOs עקב הבדל במבנה זוג הבסיסים הראשוני, הצילה את הפנוטיפ החריג, והוכיחה שהפנוטיפ לא נבע מהשפעות "מחוץ למטרה" של המורפולינו. עבודה זו תומכת בתוקף השימוש במודל דג זברה לחקר תפקוד wnt5a בכליה.

מבוא

עוברי דג הזברה (Danio rerio) היו בשימוש נרחב כמודל ללימוד פיתוח כליות ומחלת כליות פוליציסטיות. ישנם יתרונות רבים לשימוש דג הזברה כמודל חיה: את הכדאיות של חקר אינטראקציות גנטיות, את היכולת להשתמש בmorpholinos antisense (MO) למציאת חלבון, הזדמנות assay במהירות מספר גדול של עוברים, ואת הקלות של צפייה פנוטיפים איבר ב חיים זחלים 1. כִּליַת רֵאשִׁית היא הכליה הראשונה לפתח בבעלי חוליות ופונקציונלי בדג הזברה זחל 2. המבנה של דג הזברה כִּליַת רֵאשִׁית בהשוואה פשוט יחסית לmetanephros היונקים, הכליות שלישי ואחרונה להתפתח ביונקים. נפרון הוא יחידת העבודה של הכליות, עם כל כליה אנושית המכילה בין 500,000-1,000,000 nephrons 3,4 וכל כליה עכבר יש כ -13,000 nephrons 5, ולכן קשה להבחין מבנה נפרון יחיד in כליות אדם או לעכבר. יש דג הזברה רק שני nephrons, וכל נפרון דג הזברה מכיל את כל הרכיבים העיקריים נמצאים בglomerulus והצינוריות של עכברים ובני אדם 6 וסוגי תאים דומים מתמחים כליות. בהשוואה לדגמי חוליות אחרות כגון Xenopus, נפרון דג הזברה דומה יותר נפרון היונקים כי יש לו מערכת סגורה 7.

בשנים האחרונות, הגנום דג הזברה כבר רצף, המאפשר היכרות הרחבה של כלים גנטיים, מוטציה משאבים נרחבים, ואוספים של קווי כתב מהונדסים בדגמי דג הזברה. כִּליַת רֵאשִׁית דג הזברה הצורות בין 12-72 לאחר שעה ההפריה (hpf) וניתן דמיינו בקלות בעוברים השקופים. חלבון הגידול של וילם WT1 הוא גורם חיוני להתפתחות כליות. קווי דג הזברה מהונדסים מבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) תחת השליטה של אמרגן wt1b Tg (wt1b: GFP) להראות expre GFPssion ממוקם דווקא באזורי pronephric בעוברי דג הזברה, החל מ -17 hpf 8. Nephronophthisis (NPHP), מחלת כליות פיברוזיס אוטוזומלית רצסיבית, נגרמת על ידי מוטציות של גני NPHP 9. NPHP4 מציאה על ידי morpholino גרם היווצרות ציסטה בTg (wt1b: GFP). דגי 10 לכן, דג מהונדס זה הוא מודל מתאים להתבוננות מבני כליות והיווצרות ציסטה במהלך התפתחות כליות. חשוב לציין, את ההשפעה של מאפננים של פיתוח כליות ניתן ללמוד באמצעות זן זה בזמן ובאופן יעיל עבודה.

העיתון שלנו מתאר את השימוש בTg (wt1b: GFP) דגים כמודל לדמיין היווצרות ציסטה בכליות לאחר אפנון הגן. אנחנו השתמשנו נגד תחושה-אתר שחבור ההתחלה וMOS להפיל את גן wnt5a בדג זברה. Wnt5a הוא גליקופרוטאין מופרש הלא קנוניה של משפחת Wnt שממלא תפקיד חשוב בהתפתחות איברים ולאחר לידה סלולרית שוניםפונקציה 11. Wnt5a עובד דרך מסלולי Wnt הלא קנוניות, כוללים מסלול קוטבי תא מישוריים (PCP), שכבר נמצא לשחק תפקיד בחלוקת תא אוריינטציה במהלך התארכות צינורי כליות. Wnt5a מסדיר את המסלול / PCP Wnt על ​​ידי יצירה מורכבת עם קולטן כמו טירוזין קינאז (ריק), אשר transduces איתות Wnt5a נוסף על ידי יצירה מורכבת עם חלבוני VANGL קוטביות תא מישוריים 2 (Vangl2), ובכך לקדם יציבות Vangl2 12. פגמים במסלול PCP יכולים לגרום לחלוקת תא אקראית ולגרום להיווצרות ציסטה בכליה. אנחנו השתמשנו Tg (wt1b: GFP) קו דג הזברה להתבונן היווצרות ציסטה בכליות הבאות מציאה wnt5a. Tg (wt1b: GFP) מודל דג הזברה מאפשר הדמיה חיה ותצפית בזמן של מבנה כליות. לאחר מציאה wnt5a, היווצרות ציסטה בכליות נמצאה מתחילה ב 24 hpf; בגיל 72 hpf, ניתן היו למצוא ציסטות בglomeruli וtubules הפרוקסימלי. שיטה זו יכולה לשמש גם ליםקרין גנים אחרים שעלולים לגרום להיווצרות ציסטה בכליות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הצהרת אתיקה:: הערה כל ניסויי דג הזברה אושרו על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים ושימוש בבית הספר לרפואת וירג'יניה מזרח.

1. הכנת Morpholino

  1. עיצוב ולסנתז תרגום חסימה (AUG-) וoligonucleotides morpholino אנטי תחושת עיכוב אחוי (Splice-) (MO) לגן של עניין בהתאם להוראות יצרן (איור 1 א). אנא ראה מידע של היצרן בטבלה 1.
    הערה: MOS נשלחים כמניות lyophilized בבקבוקי זכוכית.
  2. מוסיף מים סטריליים בדרגה גבוהה לבקבוקי הזכוכית מחדש להשעות MOS לריכוז סופי של 25 מיקרוגרם / μl. ודא שoligonucleotide הוא נמס לגמרי. אם כמה שרידים מוצקים, לחמם את הבקבוקון המכיל את פתרון oligonucleotide המניה על 65 מעלות צלזיוס במשך 5 עד 10 דקות ובקצרה מערבולת.
  3. אחסן את פתרון מניות MO ב RT. אין לאחסן אותם על 4 מעלות צלזיוס או -20 °; C בגלל טמפרטורות נמוכות עלולות לגרום לoligonucleotide MO להיקשר לקיר מיכל. למדוד את הריכוז של פתרון המניות באמצעות ספקטרופוטומטר (עיין טבלת 1) בכל פעם שפתרון מניות MO חדש הוא עשה.
  4. הכן את הפתרון עובד MO ביום ההזרקה על ידי דילול פתרון המניות עם מים סטריליים בדרגה גבוהה למינון הרצוי. הוסף 0.5% פנול-אדום כדי להגיע לריכוז של 0.05%. לדוגמא, כדי להפוך את הפתרון עובד 5 μl עם ריכוז של 15 ng / NL, להוסיף 3 פתרון מניות μl MO ופנול-אדום 0.5 μl 0.5% לרמה של 1.5 μl מים.
    הערה: עם ריכוז עבודה זו, כל טיפה (500 pl) של הזרקה מכילה 7.5 ננוגרם של MO ושתי טיפות מכילות 15 ng של MO.

2. הכנת מכשירי ההזרקה

  1. זכוכית רכישה מראש משכה מחטים (ראה טבלת מס '1 למידע מפורט). לחלופין, למשוך את wi מחט זריקת הכוסth חולץ מחט.
  2. הפעל את מדחס האוויר ולהתאים את לחץ הגדרה ל -50 psi. הפעל את המקור לנתח מיקרוסקופ אור ומשאבת הזרקת מיקרו פיקו ולהתאים את ההגדרות באופן הבא: החזק את לחץ 20 psi, להוציא לחץ 10 psi, ערך תקופה של טווח 2.5 ו -100 μsec של gating.
  3. טען את זכוכית מחט מראש משכה-עם 5 μl של פתרון ההזרקה ולמקם את המחט במצב אנכי עם הקצה כלפי מטה. חכה עד שכל הפתרון מגיע קצה המחט ללא בועות אוויר נראות לעין. מניחים את בעל המחט בעמדה מתאימה בסמוך למיקרוסקופ ולהכניס את מחט הזכוכית לתוך המחזיק. כוון את זווית הזריקה ל -45 מעלות.
  4. להביא את קצה המחט לעין מתחת למיקרוסקופ, גבוהה מהבמה, ולהתמקד באזור הדק ביותר של הקצה. לשבור את קצה המחט עם פינצטה נקודה עדינה.
  5. הנח שליט וצינור נימים עם קוטר פנימי של צד מ"מ 0.15 על ידי צד מתחת למיקרוסקופ;להזריק את התמיסה לתוך קצה אחד של צינור הנימים לעשות עמודת נוזל. התאם את זמן השליפה להגיע לכל 17 טיפות לכל עמודת נוזל אורך 1 מ"מ, ולאחר מכן את עוצמת הקול של כל טיפה היא nl 1 (ירידה = π x רדיוס 2 אורך x (/ ספירה (טיפות) נפח של טור נוזלי).
    הערה: ירידה בקוטר של 0.1 מ"מ נותנת נפח הזרקה של כ -500 pl (ירידת נפח = 4/3 x π x רדיוס 3).

3. הכנת מופרת עוברי דג הזברה והזרקה עם Morpholinos

  1. הגדר את Tg (wt1b: GFP) זוגות רבייה דג הזברה מהונדסים על פי פרוטוקולים שפורסמו לגידול דג הזברה סטנדרטי ותחזוקה. איסוף עובר אחרי שרצים טבעי, ולשמור אותם בצלחת פטרי 10 סנטימטרים מלאים במי E3 (5 מ"מ NaCl, 0.17mM KCl, 0.33 מ"מ CaCl 2, 0.33 מ"מ MgSO 4). התחל הזרקת MO מייד 13. צג מורפולוגיה עובר מתחת למיקרוסקופ ולעשות הזרקת MO בטוחה היא בחדשלב תא, או לא יאוחרו משלב ארבעה התאים.
    1. מעביר את העוברים לצלחת פטרי 10 סנטימטר עם טריז בצורה אגר שקתות. לשאוב המים E3 נוספים ולחץ בעדינות את העוברים לשקתות.
    2. מניפולציות עובר עם micropipette לדמיין עובר שלב 1-תא מתחת למיקרוסקופ לנתח. לחדור סיסית ואז החלמון להזריק טיפה אחת או שתיים של MO בחלמון (הירידה של 1 = 500 pl). מעביר את העוברים הוחדרו לצלחת פטרי 10 סנטימטר עם מים E3 ולדגור על 28.5 מעלות צלזיוס.
  2. לאחר הזריקות, להסיר את העוברים המתים ולהקליט את מספר העוברים מוזרקים. החלף את המים E3 בצלחת בכל 24 עד 48 שעות.

4. ניסויי הפנוטיפ הצלה

  1. בחר orthologue ממין אחר שיש לו מבנה זוג בסיס העיקרי שונה (בדרך כלל 3-7 חוסר התאמה זוג בסיס), והוא, לכן, עמיד לMO, להצלה. לדוגמא, בניסוי זה, בחרנועכבר בגלל רצף העכבר Wnt5a mRNA שונה מרצף דג הזברה.
  2. עיצוב פריימר שנקבע עם פריימר קדימה מתחיל באתר translational ופריימר ההפוכה בסמוך לסוף אזור קידוד mRNA. הוסף רצף אמרגן T7 ב5'- סוף רצף פריימר קדימה. בניסוי זה, השתמשנו ברצפי פריימר הבאים; קדימה: 5'- TAA מיקס GAC TCA תג CTA GGA CTA TGA TGC TGC TGA TGA AGC a- 3 'ולהפוך: 5'- TCA CTT GCA GAC gta CTG gtc- 3'.
  3. בצע תגובת 50 μl שרשרת פולימראז (PCR) עם סט פריימר (0.5 מיקרומטר של כל צבע יסוד) נועד לעיל ו0.1 מיקרוגרם תבנית ה- DNA המכיל את רצף עכבר Wnt5a cDNA עם תכנית ה- PCR הבאה: מחזור 1 ב 95 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות; 35 מחזורים של 95 ° C (30 שניות), 58.5 ° C (30 שניות), 72 ° C (1 דקות); וצעד ​​ארכה סופי על 72 מעלות צלזיוס למשך 7 דקות.
  4. לאחר שסיימתי את tהוא מעגל, לרוץ 2 μl של מוצר ה- PCR על 1% agarose ג'ל כדי לוודא את הלהקה היא בגודל הנכון. לטהר את מוצר ה- PCR עם ערכת טיהור PCR על פי הוראות יצרן. בדוק ריכוז ה- DNA עם ספקטרופוטומטר. אחסן את מוצר ה- PCR מטוהר ב -20 ° C או להשתמש ישירות בשעתוק RNA כתרים בשלב הבא.
  5. לסנתז במבחנה כתרים mRNA עם ערכת סינתזת RNA כתרים על פי הוראות היצרן. לדלל את mRNA ב -20 מים חופשיים RNase μl ולקבוע את הריכוז. Aliquot RNA ולאחסן ב -80 ° C.
  6. ביום ההזרקה, להכין פתרון עבודה של mRNA עם מים סטריליים חופשיים RNase. שים לב כי 40 pg הוא בדרך כלל מינון RNA הגבוה ביותר שבי השפעות ספציפיות או רעילות של RNA אינן מתרחשות. שמור את הפתרון עובד על קרח. להזריק את העובר עם MO ולאחר מכן mRNA ההצלה, או שיתוף להזריק את שניהם יחד. לדוגמא, אם הריכוז של prepar mRNAed בשלב 4.5 הוא 0.6 מיקרוגרם / μl, להוסיף 0.67 μl של mRNA (0.4 מיקרוגרם) ל4.33 μl של מים חופשיים RNase לעשות ריכוז סופי של 0.08 מיקרוגרם / μl, אז טיפה אחת (500 pl) של כל זריקה מכילה 40 pg של mRNA. הכן MO כמתואר בשלב 3.

5. הכנת עוברים מוזרקים להדמית פלורסנט

  1. לאחר דגירה על 28.5 מעלות CO / N, להוסיף 0.003% N-Phenylthiourea (PTU) למים E3 כדי למנוע melanization, אשר משפיע על תצפית של מבנה כִּליַת רֵאשִׁית באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. עם זאת, אל תוסיף PTU לפני gastrulation, כי זה משפיע על התפתחות עוברית מוקדמת.
  2. ב 48 hpf, dechorionate ידני את העוברים עם פינצטה בסדר. קח תמונות של 48 ו -72 עוברים hpf תחת מיקרוסקופ לנתיחה אור.
    הערה: ניתן לצלם תמונות אלה ללא הרדמה.
  3. כ 10 דקות לפני הדמיה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, להרדים את העוברים על ידי הצבת אותם לצלחת פטרי 10 סנטימטרים המכילה 160 מיקרוגרם / מיליליטר Tricaine נאגר. חכה למשך 5-10 דקות, ולאחר מכן באורח קל לגעת בדג הזברה כדי לוודא שהם לא זזים ולכן ההרדמה עובדת.
  4. לאחר העוברים מורדמים, לעגן אותן ב- 3% תאית מתיל ומכוון אותם במצב שכיבה תחת מיקרוסקופ לנתח (אנא עיינו בטבלת 1).
  5. שים לב למבנה כִּליַת רֵאשִׁית תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי (אנא עיין בטבלת 1) ולצלם בהגדלה שונה (10X ו20X).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

Wnt5a להפיל הושג על ידי החדרת תרגום חסימת MO (אוגוסט-MO) או אחוי גבול אקסון / אינטרון MO (אחוי-MO) לעוברי דג הזברה בשלב תא אחד. האוג-MO מטרות קודון ההתחלה, ולכן, מעכב שניהם הודעת wnt5a האימהית וzygotic. אחוי-MO מטרות אתר תורם אחוי השלישי ומעכב את תמליל zygotic רק של wnt5a (איור 1 א). AUG- וmorphants splice- phenocopied אחד את השני עם מומים מרובים, כוללים ציר מתולתל זנב למטה גוף ובצקת קרום הלב (איור 1). עכבר Wnt5a mRNA חלקית מציל ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחלת כליות פוליציסטיות (PKD) היא אחד מהגורמים העיקריים למחלת כליות סופנית בבני אדם ומאופיין בהיווצרות מתקדמת ציסטה, הרחבת כליות, ופיתוח אבובית נורמלי 14. PKD אוטוזומלית הדומיננטי (ADPKD) הוא מחלה גנטית שבו מוטציה של שני PKD1, קידוד polycystin-1 (PC1), או PKD2, קידוד polycystin-2 (PC2), תוצאות בכליות פוליציסטיות. גנים רבים אחרים, במיוחד אלה קידוד חלבונים הנמצאים בcilium העיקרי, הם חשבו להיות מעורבים בפיתוח של ציסטות בכליות, ועד כה אין כלי אידיאלי לסינון גנים אלה. אנו מתא...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי NIH (DK093625 לLH, וDK069909 וDK047757 לJHL) ו( פרס הצטיינות I01BX000820 לJHL) VA. ברצוננו להודות לד"ר מיכאל חבילת וד"ר Jie הוא באוניברסיטת פנסילבניה דג הזברה Core למתן תמיכה חיונית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.5% פנול-אדוםSigmaP0290מחוון צבע להזרקה
MorpholinoGenn Tools, LLC(מותאם אישית)מותאם אישית מעוצב לגן המעניין
מחט נמשכת מראשTritech ResearchMINJ-PPאם נדרשת כמות גדולה של מחט, אתה יכול גם לרכוש מושך מחט ולהכין את המחט במעבדה
T7 mMessage KitAmbion1344לשעתוק במבחנה להכנת mRNA מכוסה לניסוי הצלה
N-PhenylthioureaSigmaP7629למניעת מלניזציה
TricaineSigmaA5040נקרא גם אתיל 3-אמינובנזואט, להרדמת דג הזברה
מתיל צלולוזסיגמאM-0387למיקום דג הזברה 
ערכת טיהור PCR מהירה Qiagen28104לטיהור מוצר PCR לסינתזת RNA של כובע.
dNTP mixPromegaU1511עבור PCR
תג DNA פולימראזInvitrogen10342-053עבור PCR
ספקטרופוטומטר NanoDropThermo ScientificND-1000למדידת מורפולינו וריכוז RNA
מדחס אווירWerther International, Inc.Panther Compact 106מקור אוויר להזרקה
משאבת מיקרו הזרקה PicoWorld Precision Instruments IncPV830 Pnematic PicoPumpניתן להשתמש בסוגים אחרים של מערכת מיקרו-הזרקה.
מיקרו-manuplatorWorld Precision Instruments IncMMJRימני (MMJL לשמאליים)
מחזיק מחטWorld Precision Instruments Inc5430-ALLלהחזיק מחט למיקרומניפולציה
פינצטהDumont Fine Surgical Tools11253-20לשבירת קצה המחט
ניתוח מיקרוסקופLeica M205C לתצפית והדמיה של עוברי דג הזברה
מיקרוסקופ פלואורסצנטיZeiss Axio Obserer D1m  להדמיית דג הזברה pronephros
צינור נימי (מזהה 0.15 מ"מ)VitroComCV1525Q-100למדידת הנפח של כל טיפה מוזרקת

מקורות

  1. Choi, S. Y., et al. Cdc42 deficiency causes ciliary abnormalities and cystic kidneys. J Am Soc Nephrol. 24 (9), 1435-1450 (2013).
  2. Hostetter, C. L., Sullivan-Brown, J. L., Burdine, R. D. Zebrafish pronephros: a model for understanding cystic kidney disease. Dev Dyn. 228 (3), 514-522 (2003).
  3. Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man. Anat Rec. 232 (2), 514-201 (1992).
  4. Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. Nephron number in patients with primary hypertension. N Engl J Med. 348 (2), 101-108 (2003).
  5. Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice. Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).
  6. Gerlach, G. F., Wingert, R. A. Kidney organogenesis in the zebrafish: insights into vertebrate nephrogenesis and regeneration. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2 (5), 559-585 (2013).
  7. Igarashi, P. Overview: nonmammalian organisms for studies of kidney development and disease. J Am Soc Nephrol. 16 (2), 296-298 (2005).
  8. Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebrafish. Am J Physiol Renal Physiol. 299 (5), 1040-1047 (2010).
  9. Liu, S., et al. A defect in a novel Nek-family kinase causes cystic kidney disease in the mouse and in zebrafish. Development. 129 (24), 5839-5846 (2002).
  10. Slanchev, K., Putz, M., Schmitt, A., Kramer-Zucker, A., Walz, G. Nephrocystin-4 is required for pronephric duct-dependent cloaca formation in zebrafish. Hum Mol Genet. 20 (16), 3119-3128 (2011).
  11. Huang, L., et al. The role of Wnt5a in prostate gland development. Dev Biol. 328 (2), 188-199 (2009).
  12. Andre, P., et al. The Wnt coreceptor Ryk regulates Wnt/planar cell polarity by modulating the degradation of the core planar cell polarity component Vangl2. J Biol Chem. 287 (53), 44518-44525 (2012).
  13. Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev Dyn. 203 (3), 253-310 (1995).
  14. Torres, V. E., Harris, P. C., Pirson, Y. Autosomal dominant polycystic kidney disease. Lancet. 369 (9569), 1287-1301 (2007).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

Wnt5aTg wt1b GFPmRNA Wnt5a
מודל אפשרי דג הזברה של מחלת כליות פוליציסטיות: מציאה של Wnt5a גורם ציסטות בכליות דג הזברה
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.