אנו מציגים פרוטוקול כירורגי המפרט כיצד לבצע אקסוטומיה של חתך או ריסוק על עצב הפנים בעכבר. ניתן להשתמש באקסוטומיה של עצב הפנים כדי לחקור את התגובה הפיזיולוגית לפגיעה עצבית ולבדוק טכניקות טיפוליות.
מאמר שיטה
אנו מציגים פרוטוקול כירורגי המפרט כיצד לבצע אקסוטומיה של חתך או ריסוק על עצב הפנים בעכבר. ניתן להשתמש באקסוטומיה של עצב הפנים כדי לחקור את התגובה הפיזיולוגית לפגיעה עצבית ולבדוק טכניקות טיפוליות.
המטרה של פרוטוקול כירורגית זו היא לחשוף את עצב הפנים, שמעצבב את שרירי פנים, ביציאתו מנקב stylomastoid וגם לחתוך או לרסק אותו כדי לגרום לפגיעה עצבית היקפית. יתרונותיו של ניתוח זה הם הפשטות שלו, שחזור גבוה, וחוסר ההשפעה על תפקודים חיוניים או ניידות משיתוק הפנים שלאחר מכן, ובכך וכתוצאה מכך תוצאות ניתוחיות קלות יחסית בהשוואה לדגמי פגיעה עצבית אחרים. יתרון עיקרי של שימוש במודל פגיעה בעצב גולגולת הוא שmotoneurons מתגורר באוכלוסייה הומוגנית יחסית בגרעין המוטורי הפנים בפונס, לפשט את המחקר של גופי תא motoneuron. בגלל האופי סימטרי של עצבוב עצב פנים וחוסר crosstalk בין הגרעינים מוטורי פנים, הפעולה יכולה להתבצע באופן חד צדדי עם צד unaxotomized משמש כבקרה פנימית לזווג. מגוון רחב של ניתוחים ניתן לבצע לאחר הניתוח לישבניםזה התגובה הפיזיולוגית, אשר פרטיו הן מעבר להיקף של מאמר זה. לדוגמא, התאוששות של תפקוד שרירים יכולה לשמש כסמן להתנהגות reinnervation, או ניתן לכמת motoneurons למדוד הישרדות תא. בנוסף, motoneurons ניתן ללכוד במדויק באמצעות microdissection לייזר לניתוח מולקולרי. בגלל axotomy עצב הפנים הוא פולשנית ונסבלת היטב, זה יכול להיות מנוצל על מגוון רחב של עכברים מהונדסים גנטי. כמו כן, מודל ניתוח זה יכול לשמש כדי לנתח את האפקטיביות של טיפולי פגיעה עצבית היקפיים. פגיעה בעצב פנים מספקת אמצעי לחקירה לא רק motoneurons, אלא גם את תגובותיהם של מייקרו-הסביבה המרכזית וההיקפי גליה, המערכת חיסונית, ושרירי יעד. מודל פגיעה בעצב פנים הוא מודל פגיעה עצבי היקפי מקובל שמשמש ככלי רב עוצמה ללימוד פגיעה עצבית והתחדשות.
מודלים פגיעה עצבית היקפיים רבים קיימים, אבל אחד שבולט לחקר motoneurons הוא מודל axotomy עצב הפנים. עצב הפנים, הידוע גם בעצב גולגולת VII, מקורו בגשר המוח ומעצבב את שרירי הבעה בפנים 1,2. בפרוטוקול זה כירורגית, עצב הפנים חשוף ביציאתו מנקב stylomastoid וגם לחתוך או כתוש. חומרת פגיעה עצבית יכולה להיות מסווגת הבאה סנדרלנד 3 סיווגים, המבדיל את הפגיעה המבוססת על שלמותו של אקסונים, endoneurium, perineurium, וepineurium, שהם שכבות רקמת חיבור שרצף לעטוף את חבילות האקסון. בפציעה למחוץ (axonotmesis), אקסונים, נותקו, אבל perineurium וepineurium נשמרים. התאוששות תפקודית מלאה מלמעוך עצב פנים מתרחשת בכ -11 ימים בגלל נדן העצב שלם משמש כצינור שבתוכו האקסונים לגדל מחדש 4,5. בהיד השנייה, בפציעת החתך (neurotmesis), אקסונים וכל 3 שכבות רקמת החיבור נותקו, והעצב הדיסטלי כולו צריך לגדל מחדש כדי לשחזר עצבוב שרירים. חיבור מחדש של כירורגי epineurium מבוצע לעתים קרובות בחולים אנושיים עם פציעות חיתוך רוחב עצב, אולם תוצאות ההתאוששות הן לעתים רחוקות אופטימליות. נדרש מחקר נוסף על מנת להבין למה העצב לא מצליח להצמיח מחדש ליעד שלו ויכולים להיות מועסק מה טיפולים כדי לשפר ולהאיץ את תהליך ההתחדשות.
ישנם יתרונות רבים ללימוד פגיעה עצבית באמצעות מודל axotomy עצב הפנים. ראשית, הליך axotomy עצב הפנים הוא מהיר, קל, ומאוד לשחזור; והשיתוק כתוצאה של שרירי הפנים אינו משפיע פונקציות חיוניות ונסבל היטב על ידי בעלי החיים. כיוון שמדובר במודל פגיעה בעצב גולגולת, לומד את גופי תא motoneuron הוא פשוטים כי motoneurons מתגורר באוכלוסייה הומוגנית יחסית בהגרעין מוטורי פנים דואר בפונס. האוכלוסייה אינה שונה המבוססת על תבנית subnuclear בתוך הגרעין המוטורי הפנים, כפי שיש שבע subnuclei כל ספציפי לinnervating קבוצה ספציפית של שרירים, ולכן הבדלי subnuclear בתגובה לaxotomy עשויים להשפיע על תוצאות 2,6,7.
יתרון עיקרי של מודל פגיעה בעצב פנים הוא שצד unaxotomized יכול לשמש כבקרה פנימית לזווג כי עצבוב העצב הוא סימטרי מאוד ואין crosstalk בין הגרעינים המוטוריים הפנים 8. יתרון נוסף של שימוש בשיטה ניתוחית זו הוא חוסר טראומה ישירה למערכת העצבים המרכזית או השיבוש של מחסום דם מוח 9. סיבוכים כגון דימום וזיהום מוגזמים הם נדירים בהליך זה.
מגוון רחב של ניתוחים ניתן לבצע כדי להעריך את התגובה הפיזיולוגית לפגיעה בעצב. ההתאוששות של רפלקס מצמוץ עין ופעילות זיף יכולה לשמש כהתנהגותמדד של 10,11 החלמה התפקודי. הקלטת וידאו של פעילות vibrissae היא כיום השיטה החזקה ביותר לאיתור התאוששות של עצבוב עצב הפנים 12,13. לאחר המתת חסד, ניתוח היסטולוגית של גזע המוח יכול להתבצע על גופי תא motoneuron בתוך הגרעין המוטורי הפנים. הגרעין מוטורי הפנים מחולק לשבע subnuclei, כל ספציפי לשרירי פנים מסוימים, המאפשר לבדיקת ההפרש של תגובות לפציעה 2,6. ניתן לספור motoneurons פנים לכמת הישרדות תא, או אימונוהיסטוכימיה יכולה לשמש לזיהוי סמנים ביולוגיים ואוכלוסיות תאים ספציפיות 14. הגרעין מוטורי הפנים יכול להיות microdissected במדויק באמצעות לכידת לייזר לניתוח מולקולרי של התגובה התאית לפגיעה בעצב 15,16. השפעות של axotomy עצב הפנים ניתן לנתח בקליפת המוח המוטורי 17,18. כמו כן, העצב יכול להיות גזור ללמוד ניוון Wallerian 19 אוהתחדשות האקסון 20, ואת השרירים ניתן להסיר ללמוד צמתים עצביים-שרירית 21. גם axotomy עצב הפנים יכול לשמש כדי לחקור את תאי גליה מרכזיים והיקפיים הנלווים 22, למקד את המערכת החיסונית תגובת 23 שרירים 21, ו. למרות שדברים רבים הושג בלימוד מודל axotomy עצב פנים 24, נדרש מחקר נוסף של פגיעה עצבית היקפית כי נזק עצבי היא בעיה משמעותית עבור חולים וטיפולים שוטפים לא מצליחים לייצר תוצאות אופטימליות. מודל זה הוא כלי רב עוצמה לבחינת התגובה הפיזיולוגית לפגיעה בעצב וניתוח היעילות של טיפולי התחדשות עצבים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל הנהלים מבוצעים מאושרים על ידי בית הספר לרפואה של אוניברסיטת אינדיאנה מוסדית טיפול בבעלי חי ועדת שימוש ופעלו מכון הלאומי לבריאות הנחיות.
1. טכניקה כירורגית
2. הרדמה והכנה
3. גישה ניתוחית
4. סגירה ושחזור
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
לאחר axotomy עצב הפנים מתבצע, אובדן motoneuron מתרחש כתוצאה מהפגיעה. הישרדות Motoneuron לאחר פציעה תלויה במשתנים רבים, כגון מין, גיל בעלי חיים בזמן הניתוח, ונקודה זמן שבה סעיפי motoneuron נעשים, ומורן וסקירת Graeber 24 וJinno וסקירת Yamada 22 שני לסכם נתונים הישרדות motoneuron. בדרך כלל, כ -86% מתאי עצב האחראים לשרוד 28 יום לאחר axotomy 14,15,26. קינטיקה של אובדן motoneuron מתוארות באל Serpe et. 2000. איור 1 מדגים...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
השלב הקריטי לפרוטוקול זה הוא מיקום העכבר כראוי לפני תחילת הניתוח. אם העכבר אינו שוכב שטוח על צדו, האוזן אינה מודבקת בזווית הנכונה, או שהחתך נעשה במיקום שגוי, אז מציאת עצב הפנים הופכת להיות הרבה יותר קשה. כאשר שולטים בטכניקה זו, הניתוחים יימשכו דקות ספורות בלבד לכל עכבר.
ניתן להשתמש בתפרים, דבק או קליפס פצע לסגירת הפצע. קליפסים לפצע מועדפים בגלל גודל החתך הקטן והמהירות שבה ניתן ליישם אותם. קבענו שאם משתמשים בקליפס פצע והעכברים שוכנים יחד, עכברים נקבות מסתדרים טוב יותר מעכברים זכרים מכיוון שזכר...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
עבודה זו ממומנת על ידי NIH RO1 NS 40433 (K.J.J.).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מיקרוסקופ סטריאו | Leica | M60 | |
| סרט תיוג | פישר סיינטיפיק | 15-952 | |
| Vannas-T ü מספריים קפיציים של Bingen - ישרים/חדים/8.5 ס"מ/5 מ"מ קצה חיתוך | Fine Science Tools | 15003-08 | עיקור לפני השימוש |
| Dumont #5/45 מלקחיים - טיפים סטנדרטיים/זווית 45°/Dumoxel/11 ס"מ | Fine Science Tools | 11251-35 | עיקור לפני השימוש |
| קליפס תפר מישל - 7.5 מ"מ x 1.75 מ"מ | Fine Science Tools | 12040-01 | מתואר כ"קליפ פצע" בפרוטוקול, לעקר לפני השימוש |
| Hagenbarth Cross Action פצע קליפ applier 5 " | George Tiemann & Co | 160-910 | משמש למריחת קליפ פצע, עיקור לפני השימוש |
| מוליך ומסיר קליפ תפר מישל - עבור קליפסים 7.5 מ"מ | Fine Science Tools | 12029-12 | משמש להסרת קליפ פצע |
| 0.9% הזרקת נתרן כלורי, USP | Hospira | 0409-4888-10 | |
| בטאדין, 16 אונקיות, עם מתקן | Fisher Scientific | 19-027132 | |
| 70% אתנול | |||
| חרוזי זכוכית |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה